1.1 試驗飼料
以魚粉、麥麩、豆粕、菜粕等原料，配制成草魚魚種常規配合顆粒飼料作為對照組飼料，在對照組飼料原料中分別添加0、300mg/kg乳能（20%膽汁酸，山東sh龍昌動物保健品有限公司提供）配成2種試驗飼料。膽汁酸實際添加水平為0、60mg/kg。飼料組成及營養成分見表1。所有原料粉碎后過80目篩，各原料按配比稱量后混勻，加適量水混合均勻，經小型絞肉機制成直徑為2 mm的顆粒，于常溫條件下風干，儲存于-4℃的冰箱中。
1.2試驗用魚
養殖試驗在山東省淡水水產研究所養殖試驗場進行，試驗所用的草魚由山東省淡水研究所養殖試驗場提供，初始體質量為11.49±0.82g。試驗共分兩個處理，每個處理設三個重復。正式試驗前，草魚在條件相同的其他水族箱用普通草魚配合飼料馴養4周，然后，隨機分組，每組放養30尾，分別放于400L的養殖桶中進行試驗。養殖采用流水飼養，每天8:00～9:00，12:00～13:00，16:00～17:00投飼，日投飼量是魚體質量的1％～3％，每兩周稱一次魚體質量，并調整投飼量。每天18:00清除桶底的草魚排泄物。養殖試驗持續10周。養殖水溫為（22±3）℃，pH為7.0±0.4，溶解氧不低于5.0 mg/L。
表1 草魚基礎飼料組成及營養成分
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成分 |
含量/% |
營養成分 |
含量/% |
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魚粉 |
4 |
水分 |
7.86 |
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豆粕 |
21 |
粗蛋白 |
28.79 |
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菜粕 |
20 |
粗脂肪 |
4.09 |
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棉粕 |
8 |
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次粉 |
24 |
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麥麩 |
18 |
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大豆油 |
2 |
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磷酸二氫鈣 |
2 |
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維生素預混料 |
0.2 |
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礦物鹽預混料 |
0.8 |
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注：預混料向每千克日糧提供：VA 6000IU, VD 2000IU, VE 50mg, VK 5mg, VB1 15mg, VB2 15mg, VB3 25mg, VB5 30mg, VB6 10mg, VB7 0,2mg,VB11 3mg, VB12 0.03mg, VC 100mg; Zn 80mg, Fe 150mg, Cu 4mg, Mn 20mg, I 0.4mg, Co 0.1mg, Se 0.1mg, Mg 100mg
1.3 生產性能的測定
養殖試驗結束時，試驗魚饑餓24 h，將魚從養殖桶中撈出稱魚體質量。生長指標采用下面的公式計算：
增重率/% =（終末魚體質量-初始魚體質量）/初始魚體質量╳100；
飼料系數 =飼料總消耗量/魚體總增重；
1.4 運輸應激
生長試驗結束后，從每個養殖桶中隨機撈取5尾草魚，迅速放入200mg/L MS-222中，在30s內深度麻醉(不影響血清皮質醇含量的測定)，分別采集血樣用于基礎皮質醇水平測定。運輸應激：每組用自制塑料袋網撈取草魚10尾放入盛水15L的塑料袋中，充入純氧，打包，用皮卡車運輸6h，共運輸6包，60尾魚。運輸結束后統計成活率。
1.5 血清皮質醇含量測定
草魚血清中皮質醇參照Picketind方法用放射免疫法(RIA)進行測定。每組取8尾魚進行尾靜脈取血，并將魚血在4000 r/min條件下離心10 min以提取血清，用于皮質醇含量的測定。試劑盒采購自南京建成生物技術有限公司。
1.6數據處理
采用SPSS 13.0統計軟件中獨立樣本T檢驗對試驗數據進行分析處理，所有的數據結果均以平均值(X)±標準偏差(S.D.)表示，顯著水平采用0.05。
2 結果
各飼料組草魚的生長性能見表2。飼料中添加膽汁酸能顯著提高草魚的增重率（P<0.05），顯著降低草魚的飼料系數（P<0.05）。飼料中添加60 mg/kg膽汁酸組草魚的增重率顯著高于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05），飼料系數顯著低于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05）。
表2 各飼料組草魚的生長性能
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膽汁酸添加量/（mg/kg） |
初始體重/g |
終末體重/g |
增重率/% |
T-檢驗 |
飼料系數 |
T-檢驗 |
|
0 |
11.56±1.21 |
48.90±7.73 |
321.50±22.27 |
P<0.05 |
1.66±0.56 |
P<0.05 |
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60 |
11.28±1.07 |
52.60±6.84 |
365.20±17.39 |
1.53±0.03 |
注：同列肩標字母不同表示差異顯著（P<0.05）。
各飼料組草魚運輸成活率和血清中皮質醇含量見表3。飼料中添加膽汁酸對草魚的運輸成活率沒有影響。飼料中添加60 mg/kg膽汁酸組草魚血清中皮質醇含量顯著低于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05）。
表3飼料中添加膽汁酸對成活率和血清皮質醇含量的影響
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膽汁酸添加量/（mg/kg） |
運輸成活率/% |
運輸前皮質醇含量/（ng/ml） |
運輸后皮質醇含量/（ng/ml） |
T-檢驗 |
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0 |
100 |
5.59±0.32 |
54.26±3.56 |
P<0.05 |
|
60 |
100 |
5.43±0.45 |
20.34±1.45 |
注：同列肩標字母不同表示差異顯著（P<0.05）。
3 討論
早期的研究結果表明，膽汁酸是一種脂肪代謝促進劑（Masatoshi, 1985），能夠促進動物的生長（Vilder and Enzo, 2002）。膽汁酸的主要功能是幫助脂肪以及脂溶性物質消化吸收和利用。膽汁酸作為一種乳化劑，增加了同脂肪酶的接觸面積（Bowen, 2001; Mukhopadhyay and Maitra, 2004）。同時膽汁酸可以通過提高脂肪酶的活性來幫助脂肪消化。在本試驗中，飼料中添加60 mg/kg膽汁酸能顯著提高草魚的增重率，顯著降低草魚的飼料系數，表明膽汁酸提高了草魚的生產性能和飼料利用率。
應激是指有害作用因子引起的動物一系列非特異性的生理防御反應的總和。在水產動物養殖中，水溫變化(低溫，高溫)、運輸、驚嚇、水體污染、酸堿度變化．病原微生物侵襲、高密度飼養，分池、捕捉，飼料更換等活動都可能產生應激。當魚類受到這些應激因子的刺激時，副腎皮質肥大，體內糖皮質激素和甾類皮質激素等水平上升，由此引起血淋巴細胞、巨噬細胞和嗜中性粒細胞和溶菌酶的活性急劇下降，動物的免疫系統受到抑制，表現增重減慢，死亡率增加，從而嚴重影響了養殖的經濟效益和生態效益。在本實驗中，添加膽汁酸能顯著降低草魚血清中皮質醇的濃度，表明膽汁酸能提高草魚的抗運輸應激的能力。
4 結論
綜上所述，草魚在運輸等強應激刺激因子作用下，皮質醇激素含量迅速升高，從而引起對機體新陳代謝和生理機能的改變。運輸應激的刺激可能導致草魚肝臟等組織的損傷，造成機體不可逆轉的生理變化，從而加速了魚體的死亡，使得草魚的運輸困難。飼料中膽汁酸的添加可以有效提高草魚的抗應激能力，降低應激對肝臟等組織的損傷。