微生態制劑對水產動物的生物活性研究

（哈爾濱中科生物工程有限公司 韓小米）

摘要：為測定微生態制劑“高免肽”對水產動物抗病、促生長功效以及生產應用價值。首選藥敏試驗結果表明，微生態制劑“高免肽”對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。選擇大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦為實驗動物，在基礎日糧中按比例0.1%添加高免肽。監測實驗魚蝦成活率、日增重、餌料投入比等生產性能比較指標。結果顯示，高免肽對實驗魚蝦成活率平均提高10%以上，青蝦養殖效果顯著。

關鍵詞：微生態、高免肽、水產動物、生物活性、生產性能

    高免肽是由酵母細胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物堿、苷類、蒽醌類及其還原衍生物和多種活性肽組成，具有提高免疫力、提高消化率、殺滅細菌真菌和原蟲、抵制病毒侵擾等作用，是生物提高非特異性免疫的不可缺少的重要組成成分。與抗生素相比，具有高效、無耐藥性、無污染、無毒副作用等優點，符合綠色環保飼料的要求，是理想的抗生素替代品。高免肽具有活性高、分子量小、熱穩定性好、水溶性好和生物利用度高等特點。實驗通過在飼料中添加高免肽，比較對大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦的日平均增重、發病率、死亡率、餌料系數等生產性能影響，為高免肽在水產養殖中的應用提供理論依據。

1 材料、方法、時間與地點

1.1 實驗材料

    試驗用高免肽由哈爾濱中科生物工程有限公司提供，批號黑飼添字（2009）251015，陰涼、干燥處貯藏。

實驗用菌株：大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌均由國家獸用生物制品工程技術研究中心惠贈。

1.2 時間和地點

試驗地點：江蘇省鹽城市射陽縣黃沙港某養殖場。

試驗時間：2011年3月25日-2011年4月24日。

1.3 高免肽最小抑菌濃度的測定

    采用微量稀釋法進行測定。把處于對數生長期OD600≈0.5（細菌計數約10^6）的指示菌用LB 培養液稀釋到OD600≈0.05，分別接種到96 孔細胞培養板上，每孔90 μL。將高免肽用pH 值6.0 的0.1 mol/LPBS 倍比稀釋。各取10 μL 分別加入培養孔中，混勻，每組重復3 個孔。設加LB 培養液為陰性對照，接種細菌的為陽性對照。置37 ℃培養箱孵育12 h后取出，用自動酶標儀測量培養液的OD600值，將完全抑制菌體生長的最低蛋白濃度確定為最小抑菌菌濃度（MIC）。

1.4 實驗動物的選擇與養殖

    大黃魚、真鯛采用海水網箱養殖，全冰鮮飼料喂養。實驗組按每噸飼料添加高免肽1kg，飼養30 d，每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何添加物的冰鮮飼料。

    白鰱、草魚、花鰱魚采用池塘養殖方式，水深0.8～1.0 m，每667 m2 投入魚苗10 萬尾，基礎餌料為黃豆漿，實驗組按每噸飼料添加高免肽1kg，飼養25 d，每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何藥物。

     青蝦苗由長江直接捕撈的抱仔青蝦所繁育的蝦苗（長江蝦苗），每池平均放養規格7 000 尾/kg，每口池放養數量約6 萬尾，重量為8.6 kg。每日2 次喂料，基礎飼料為：豆粉、魚粉、皮糠、次粉、貝殼粉、礦物質、螺旋藻混合物。實驗組添加抗菌肽，按每噸飼料添加抗菌肽1kg。對照組飼喂不添加任何添加物的基礎飼料。

1.5 飼養管理

    堅持每天2 次巡池，檢查實驗魚蝦攝食情況，及時調整日投餌量，嚴格檢查排水過濾設施是否破損，及時撈出殘餌雜物、多余水草，捕捉蛙、蛇等敵害生物。保證微流水的暢通、有充足的氧氣。定期使用生石灰進行全池潑灑消毒，生石灰用量為每口池

每次7.5 kg。

1.6 生產性能指標測定

    每天采集數據至實驗結束，統計成活率、畝平均產量、平均個體重，計算餌料報酬等，并對發病率進行λ²卡方顯著性分析。

2 結果

2.1 高免肽的最小抑菌濃度

    通過微量稀釋法測得高免肽對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌的MIC 分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。

2.2 大黃魚和真鯛養殖結果

    飼養30 d，高免肽實驗組魚苗色澤鮮艷，大小均一。大黃魚實驗組的發病率為15.1%，對照組為26.3%，下降了11.2%。真鯛實驗組的發病率為17.6%，對照組為20.4%，下降了2.8%。可見高免肽顯著或極顯著降低大黃魚和真鯛的發病率（P<0.05）或（P<0.01）。實驗組大黃魚的日增重比對照組高0.14 g/d，真鯛的日增重比對照組高0.17 g/d，表現出較好的生產性能（表1）。

       表1 高免肽對大黃魚、真鯛生產性能的影響

    注：“*”表示與對照差異顯著或極顯著，P<0.05或P<0.01，下同。

2.3 白鰱、草魚和花鰱魚養殖結果見表2.

表2 高免肽對白鰱、草魚和花鰱魚生產性能的影響

    表2可以看出應用高免肽后，白鰱的成活率由40%提高至48.77%，草魚的成活率由16.8%提高至22.75%，花鰱魚的成活率由53.5%提高至68.01%。各實驗組和對照組比較分別提高了21.93%、35.42%和24.12%。λ²卡方分析表明，高免肽極顯著提高白鰱、草魚和花鰱魚的成活率（P<0.01）。草魚和花鰱的餌料系數分別降低18.7%和22.9%，每畝平均產量也明顯提高18.42%、19.98%、23.23%。

2.4 青蝦養殖結果見表3.

      表2 高免肽對青蝦生產性能的影響

    由表3可知，至實驗期結束，實驗組青蝦平均增長了2.3cm，對照組為1.4 cm。實驗組的平均增長是對照組的1.64 倍，比對照組提高了64.29%。實驗組平均產量101 kg/667 m2，對照組平均產量58.5 kg/畝，實驗組平均產量是對照組的1.73 倍，比對照組提高72.65%。

3 討論

高免肽是機體非特異性免疫不可缺少的重要組成部分，可以使細菌的細胞膜去極化或者形成“孔洞”，造成細胞內容物外流或者肽分子進入細胞內部與DNA、RNA 等形成靶向作用，進而殺死細菌。實驗結果顯示，體外高免肽對環境中常見的細菌大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌敏感，最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。添加進飼料中高免肽仍具有顯著的抗菌活性，可以顯著提高魚苗的抗病能力。將高免肽用于魚苗培育階段，平均成活率可以提高10%以上。同時也發現，高免肽也能明顯提高魚、蝦的生長速度及飼料利用效率，日增重平均增加，餌料報酬亦增加。

高免肽除具有抗菌、殺菌作用，對病毒、真菌、寄生蟲等其他病原微生物具有較強的抑制作用，還能與宿主體內某些陽離子蛋白、溶菌酶或抗生素協同作用，增強其抗菌效應。另外，高免肽生物學活性穩定，在高離子強度和酸、堿環境中或100 ℃加熱10 min 時仍具有殺菌抑菌作用。實驗用高免肽可耐高溫（150 ℃以上），能耐受飼料制粒時的高溫。同時，高免肽是一種無毒、無害、綠色環保的產品，還具有不易出現耐藥性突變、分子量小、熱穩定性好、水溶性好、作用迅速等特點。

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