中藥微生態制劑對雛雞免疫力的影響

(哈爾濱中科生物工程有限公司，韓小米)

摘要：1日齡AA雛雞隨機分為微生態制劑--本草倍利康試驗組和對照組，用間接酶聯免疫吸附試驗(IELISA)法分別測定了2組雛雞淚液、氣管液、膽汁和腸液的IgA、IgM、IgG相對含量的動態變化。結果發現，雛雞服用微生態制劑--本草倍利康后1-49 d，上述4種體液的3種免疫球蛋白含量均不同程度地高于未服用本草倍利康的對照組雛雞，表明本草倍利康可在一定程度上增強雛雞呼吸道和消化道局部的體液免疫功能，提高雛雞免疫力。

    微生態制劑--本草倍利康是攝入后能對機體健康或生理機能產生有益影響的活菌微生態發酵制劑，常被用作飼料添加劑，可以提高動物生產性能、飼料轉化率，以及增強動物抗病能力。禽大多數傳染病是通過局部黏膜途徑傳播的，而局部黏膜免疫系統是機體抵抗外界環境變化和病原微生物入侵的第一道屏障，廣泛分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道及一些外分泌腺的淋巴組織，是執行局部特異性免疫功能的主要場所。本研究對服用微生態制劑--本草倍利康雛雞局部體液(淚液、氣管液、膽汁和腸液)的IgA、IgM、IgG含量進行動態檢測，為本草倍利康在獸醫臨床應用及進一步市場推廣提供理論依據。

1  時間、地點、材料與方法

1. 1  試驗時間和地點

試驗時間：2012年5月17日--2012年7月9日;

試驗地點：在江蘇省宿遷市某大型肉雞養殖場。

1．2 試驗動物

    1日齡AA混合肉雛雞80只，購自安徽省合肥市某孵化場，雞傳染性法氏囊病、馬立克氏病和傳染性支氣管炎等抗體檢測均為陰性。

1．3 微生態制劑    

    微生態制劑--本草倍利康：由哈爾濱中科生物工程有限公司生產，批號：飼添字(2007)2316號，按產品說明使用。

1．4 兔抗雞IgA、IgG、IgM血清

    兔抗雞IgA、IgG、IgM血清由揚州大學農學院禽病免疫病理研究室制備。

1．5 HRP標記羊抗兔IgG結合物

    辣根過氧化物酶(HRP)標記山羊抗兔IgG，購自北京中杉金橋生物技術有限公司，批號：83228，ZB一2301。

1．6 試驗動物分組及處理

    80只雛雞隨機分為本草倍利康組(P組)和對照組(C組)。其中P組雛雞分別于1-49日齡連續灌服本草倍利康發酵液稀釋液，1次／d；C組雛雞于上述相同時間灌服等量生理鹽水。

1．7 被檢材料采集

    分別于0、4、7、10、17、24、38、52日齡每組隨機抽取5只雛雞，采集淚液，然后心臟采血處死，采集氣管液、膽汁和腸液，低溫保存，供免疫球蛋白含量檢測用。

1．8 檢測指標及方法

    用間接ELISA法測定淚液、腸液、氣管液和膽汁IgA、IgG、IgM相對含量：①將待檢體液用0．05 mol／L PH 9．6的碳酸鹽緩沖液適當倍數稀釋后，加入96孔聚苯乙烯酶標板中(200μL／孔)，4℃濕盒過夜；②0．01 mol／L PH 7．4磷酸鹽緩沖液(含

0.05％Tween一20)洗滌，5 min／次×3，控干；③分別加入適度稀釋的兔抗雞IgA、IgC、IgM血清，每孔200μL，37℃濕盒內作用2 h；④重復步驟②；⑤每孔加入適當稀釋的HRP-羊抗兔IgG結合物200μL，37℃濕盒內反應2 h；⑥重復步驟②；⑦每孔加人50μL TMB顯色液，室溫顯色10-15 min；⑧每孔加入50μL 2 mol／L H2S04。終止反應，在DG3022酶聯比色檢測儀上測定450 nm的光密度(OD)值。每個被檢樣品設3個重復，同時每個反應板設空白對照及陰性對照。

1．9 數據處理

    采用SPSS 16．0軟件進行數據處理，比較各組間差異。

2  結果

2．1 雛雞服用本草倍利康后淚液和氣管液免疫球蛋白相對含量的動態變化

    從表1可知，雛雞服用本草倍利康后1-49 d，其淚液Iga、lgM和19G含量均不同程度地高于未服用本草倍利康的對照組雛雞，其中IgM和IgG于4-7 d較對照雛雞明顯升高(P<0．05或P<0．01)；IgA含量于7-21 d明顯高于對照雛雞(P<0．05)。氣管液IgA、lgM、IgG均于7 d和21 d差異顯著或極顯著增加(P<0．05或P<0．01)；IgG、IgM含量分別于14d、49 d明顯高于相應對照雛雞(P<0．05)。

表1 雛雞使用本草倍利康后淚液和氣管液免疫球蛋白含量變化

2．2 雛雞服用本草倍利康后膽汁和腸液免疫球蛋白相對含量的動態變化

    由表2可見，雛雞服用本草倍利康后，其膽汁IgA含量于1-7d和21 d極顯著高于對照雛雞(P-7 d、21 d和35d明顯高于對照雛雞(P<0.01或P<0．05)。而腸液IgA、IgM、IgG均于7-21 d明顯高于未服用本草倍利康的對照雛雞(P<0．01)；IgM、IgG含量又于4d、49d明顯高于對照雛雞(P<0．01或P<0．05)。

    表2雛雞應用本草倍利康后膽汁和腸液免疫球蛋白含量變化

3討論

    有效防治畜禽傳染病是保證畜牧業健康發展的首要問題，禽類大多數傳染病是通過消化道和呼吸道等黏膜途徑傳播的。大量試驗證明，黏膜免疫不僅在黏膜局部和其它黏膜組織產生免疫應

答，還可引起全身免疫改變。因此，近年來黏膜免疫倍受國內外學者的密切關注。通過本次試驗發現，1日齡肉雛雞在開食前服用本草倍利康后，其淚液、氣管液、腸液和膽汁的IgA、IgM、IgG相對含量均較對照組雛雞不同程度增高。本草倍利康組雛雞呼吸道和消化道局部體液的IgA、IgM、IgG含量分別在第7天及第21天明顯高于對照組雛雞。之后，隨日齡增加，本草倍利康組雛雞和對照組雛雞局部體液的免疫球蛋白含量逐漸趨于相同，表明本草倍利康在一定范圍內可增強雛雞局部體液免疫功能，提高免疫力。有人在肉雞飲水中添加芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌后與對照組相比，其氣管液和膽汁中IgG含量顯著升高，可見上述3種菌復合劑可提高機體局部免疫水平。有研究人員給1日齡雛雞飼喂乳酸菌后，其IgA天然抗體水平明顯高于未服用乳酸菌的雛雞。

作為獸藥和飼料添加劑的益生菌菌種主要有乳酸菌、芽孢桿菌和雙歧桿菌等，其主要通過刺激方式對機體免疫系統發揮作用。免疫刺激可使個體免疫反應功能提高，這對免疫缺陷或免疫低下動物尤為重要一。多數乳酸桿菌和雙歧桿菌可激發動物主動免疫系統的較早建立，增加其防病、抗病能力。還有人用添加有微生態制劑或寡糖的飼料飼喂三黃雞，結果微生態制劑組肉雞免疫器官指數、白細胞吞噬率及新城疫抗體效價顯著提高。研究發現，在提高烏骨雞免疫機能方面，微生態制劑比抗生素具有更大的優勢。也有研究者發現，用微生態制劑飼喂肉雞，其脾臟、法氏囊、胸腺指數分別提高18．47％、6．42％、41．46％。

    雛雞服用微生態制劑在短期內增加體液免疫球蛋白的產生，可能是微生態制劑中的活性乳酸菌增強了腸道派伊爾結等對抗原的識別能力，同時活化腸道相關淋巴組織，活化集合淋巴結生發中心的B細胞，促進其轉化為漿細胞。漿細胞進入淋巴系統，經胸導管進入血循環，逐步分化成熟，在特異的歸巢受體介導下，多數免疫細胞歸巢到致敏部位的黏膜內，即腸黏膜內，形成腸液中的免疫球蛋白，發揮免疫效應，少數免疫細胞進入其它黏膜部位，進而使淚液、氣管液和膽汁免疫球蛋白含量相繼分泌增多。不同黏膜部位的免疫反應相交聯，表明黏膜既存在局部免疫，又存在著共同黏膜免疫系統。

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