“卵移”是胚胎或受精卵移植的簡稱。其特點是從優秀母牛(供體)取出受精卵,經過冷凍保存、運送,再給其它乳牛(受體)移植到子宮角或輸卵管內,使其發育并分娩。該犢牛具有與供體母牛相似的特性。因此,它對充分發揮優良母牛的繁殖潛力,推廣利用優良雌性配子,加速畜群改良等,都有極其重要的實際生產價值,在動物遺傳學和繁殖生理學的研究中也具有重要作用。
卵移的過程中包括超數排卵、胚胎的采集、胚胎的保存和胚胎移植。
(一)超數排卵
也稱“超排”。指將供體母牛經激素處理,使其發情、并能排出數量較多的發育成熟的卵子,經合理的人工授精方法,以獲得數量穩定的可移植的胚胎。
處理方法:母牛發情后9—13天開始肌肉注射促卵泡素(FSH),每次劑量為50IU,每天兩次,每次間隔12h,連續注射4天,共8次。在首次注射促卵泡素(FSH)后的48h、60h和72h,分別肌肉注射氯前列烯醇O.2mg。經觀察,母牛在首次用氯前列烯醇后的30--60h相繼出現發情。
超排處理時間和激素使用不盡相同,有的在性周期第16天,肌肉注射孕馬血清2 500IU,在20--21天時靜脈注射絨毛膜促性腺激素(HCG)2000IU;有的在性周期第8-14天,肌肉注射孕馬血清2000IU,48h后用前列腺素F2a33mg,一次肌肉注射。
超排數目與激素劑量有關,劑量過大,排卵數過多,易損傷卵巢功能。通常,以每次母牛排卵10個左右為宜;當排卵數在11—21個時,可使受精率、回收率和受胎率下降。
對經超排處理的母牛,應認真觀察母牛的發情表現,每天應觀察2-3次,由于牛群中出現較多的相互爬跨母牛,為確保準確,可用開膣器檢查,當子宮頸口充分開張,并有適量粘液流出即為發情。當母牛接受其它牛爬跨時開始推算人工授精時間。
超排母牛的人工授精時間和授精次數報道不一,有在超排母牛發情后的12h或24h授精的,有在用氯前列烯醇處理后的48h授精的。關于授精次數上,有1次輸精的,有3次(8h、16h,24h)輸精的,一般認為,超排母牛增加人工授精次數可以提高母牛超排卵子的受精率。
(二)胚胎采集
也稱為“采卵”。通常胚胎采集的時間是母牛發情后3~7天。胚胎收集的方法有手術和非外科手術法兩種。其中非外科采集法已普遍采用。多用德式二路采卵管非手術采集胚胎。
操作方法:母牛站立保定。局部麻醉或用低劑量的全身麻醉藥使其安靜。掏出直腸內的蓄積的糞便。用0.1%新潔爾滅液充分、徹底洗潔母牛后軀,再用75%酒精擦拭陰門。在二路采卵管內插入不銹鋼內芯使之挺直,將挺直的采卵管導入陰道達陰道穹窿,另一只手在直腸內協助。慢慢將導管插入子宮體,到子宮角內5cm左右,拔出采卵管內的內芯約2cm,再使采卵管沿子宮角彎曲方向進入子宮角深部。在這一過程中,助手每抽出約2cm的內芯,術者將采卵管向子宮內送入相應的長度,直到將采卵管送到子宮角適當的位置。采卵管中的一路為“氣路”,即通過它向氣球內充氣;另一路為“水路”。即向子宮內灌注和回收沖卵液。充氣后的氣球可將子宮角固定于子宮角大彎附近。此時,將采卵管內的不銹鋼內芯全部抽出,用50ml注射器將20--30ml沖卵液通過采卵管注入子宮角,再將沖卵液吸入到注射器內。沖卵液由20ml逐漸增加到50ml,每側子宮角共用沖卵液500ml?;厥盏臎_卵液輕輕注入到500ml的集卵杯內,靜置30min,徐徐吸去上部液體,將剩余的30ml沖卵液分別置于多個直徑為10cm的平皿中,在顯微鏡下逐個檢查,已檢查出的胚胎將其移入到培養液中保存。
(三)胚胎保存
沖卵液和胚胎培養液通用。較為適用的是含滅活犢血清磷酸緩沖液(pbs)。其成分:氯化鈉8g,氯化鉀2g,磷酸氫二鈉1.15g,磷酸二氫鉀0.2g,氯化鈣O.1g,氯化鎂0.1g,丙酮酸鈉32mg,葡萄糖1g,牛血清白蛋白4g,卡那霉素25mg,酚紅5mg,三蒸餾水1000ml。犢牛血清20%,pH7.2,-20℃保存。
(四)移植技術
移植技術有外科方法和非外科方法兩種?,F普遍應用的是非外科移植。沖出來的胚胎首先應采用形態學觀察和體外培養相結合的方法進行質量評定,最后才能確定其是否為可移植胚胎。
形態學觀察在實體顯微鏡下進行,放大80倍??梢浦才咛サ臉藴适桥咛グl育與采集日期一致;形態典型,透明帶完整或損傷輕微;胚胎結構清楚,或缺陷輕微;細胞突出胚胎整體部分或色澤發暗部分不超過胚胎總體積的1/5。體外培養:將色澤發暗比例過大或細胞突出胚胎整體過多的胚胎置于37℃培養2—4h,若其發育者為可移植胚。將以PBS培養的胚胎按直腸把握子宮頸輸精法,將其注入子宮角深處即可。