一、研究背景
仔豬白痢是由致病性大腸埃希氏菌所引起的一種仔豬常發(fā)病，多發(fā)生于10-30日齡仔豬，發(fā)病率高，死亡率低，嚴(yán)重影響仔豬的生長發(fā)育。若治療時間不及時或治療方法不妥當(dāng)，則極易形成僵豬，從而降低飼料報(bào)酬，影響?zhàn)B豬的經(jīng)濟(jì)效益。該病在世界各地均有發(fā)生，據(jù)統(tǒng)計(jì)美國仔豬黃白痢的發(fā)病率約為16.5%，死亡率可達(dá)15.5%；荷蘭仔豬黃、白痢的發(fā)病率約為16.6%，死亡率為11.5-14.2%；我國華東西區(qū)部分規(guī)模化豬場，仔豬黃白痢平均發(fā)病率約為29.0%±3.0%，平均死亡率達(dá)到20.4%±1.9%。隨著規(guī)模化養(yǎng)殖的發(fā)展，由大腸桿菌引起的仔豬腹瀉有明顯上升趨勢，仔豬死亡率增高，成活率降低，斷奶窩重降低，生長發(fā)育受阻，嚴(yán)重制約了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。
由于獸醫(yī)臨床上藥物的不合理使用，引起動物源性病原菌耐藥現(xiàn)象異常嚴(yán)重，導(dǎo)致病原菌的不斷傳播擴(kuò)散，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。此外，耐藥菌在動物、環(huán)境和人類之間廣泛的傳遞和擴(kuò)散可能成為嚴(yán)重危害人類健康的因素之一。
鑒于此種情況，蔚藍(lán)生物股份有限公司開發(fā)出了中藥治療仔豬白痢的藥物——連翁顆粒，并且在農(nóng)業(yè)部成功注冊三類新獸藥，證書號：[（2013）新獸藥證字2號]。
二、新獸藥名稱及主要成分
通用名：連翁顆粒。
主要成分：黃連、白頭翁、老鸛草、大黃炭。
三、產(chǎn)品特點(diǎn)
鑒于細(xì)菌耐藥性不斷增強(qiáng)、仔豬白痢給養(yǎng)豬業(yè)帶來較大的危害和治療相對困難，給人類健康帶來巨大威脅的現(xiàn)狀，因此研究開發(fā)安全、有效、不易產(chǎn)生耐藥性的新型藥物顯得越來越重要。
為此，蔚藍(lán)生物股份有限公司根據(jù)民間中獸醫(yī)工作者多年的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和研究結(jié)果選定黃連、白頭翁、老鸛草和大黃炭4味中藥，對其配方和生產(chǎn)工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究而得的專門用于治療仔豬白痢的中藥復(fù)方顆粒——連翁顆粒。經(jīng)大量的研究表明，本品具有較高的安全性，其生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可行，質(zhì)量可控，劑型設(shè)計(jì)合理，對大腸桿菌感染引起的仔豬白痢有較好的治療效果，給藥方便。
連翁止痢顆粒在靶動物仔豬的安全性。結(jié)果證明，連翁止痢顆粒按2g/kg/d和1g/kg/d的劑量連續(xù)給藥5d，觀察10d，試驗(yàn)仔豬采食、飲水、排便均未見異常和毒副作用，兩個給藥組與空白對照組的日均增重?zé)o明顯差異，各組撲殺2頭仔豬，經(jīng)剖檢胃、腸、心、肝、脾、腎等臟器均未見病理變化，具有較高的安全性。
四、藥效學(xué)研究
蔚藍(lán)生物股份有限公司對連翁顆粒的主要藥效學(xué)作用進(jìn)行了研究。觀察連翁顆粒對正常小鼠以結(jié)晶硫酸鈉、蓖麻油致瀉和小腸推進(jìn)運(yùn)動試驗(yàn)觀察其止瀉作用，以二甲苯致小鼠耳廓水腫、甲醛和蛋清致大鼠足趾腫脹試驗(yàn)，觀察其抗炎效果，用醋酸致小鼠扭體法觀察其止痛效果，采用平板打孔法和MIC測定法觀察其對大腸桿菌和沙門氏菌的體外抑菌效果。結(jié)果顯示，連翁止痢顆粒對結(jié)晶硫酸鈉、蓖麻油導(dǎo)致的小鼠腹瀉有一定的止瀉作用，能抑制腸蠕動，減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)，抑制二甲苯致小鼠耳廓水腫和甲醛、蛋清致大鼠足趾腫脹，對大腸桿菌和沙門氏菌有一定的體外抑菌效果。
結(jié)論：連翁顆粒具有止瀉、抗炎、抗菌和止痛作用。
表1連翁顆粒粒對結(jié)晶硫酸鈉致小鼠腹瀉的止瀉結(jié)果
組 別 | 動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg b.w.） | 腹瀉次數(shù)（次/只） | |||
0-1h | 1-2h | 2-3h | 3-4h | |||
LWS-H | 10 | 2.6 | 1.3±1.5 | 1.5±0.6 | 0.8±0.5 | 0.3±0.2 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 1.0±0.9 | 0.8±0.5 | 0.7±0.4 | 0.2±0.4 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 1.2±1.0 | 1.2±0.7 | 1.2±1.1 | 0.5±0.2 |
XBJ | 10 | 0.72 | 2.0±1.3 | 2.4±1.2 | 1.4±0.8 | 0.3±0.5 |
MX | 10 | 等容積生理鹽水 | 1.8±1.0 | 2.5±1.3 | 1.3±0.7 | 0.4±0.5 |
注：LWS-H 代表連翁顆粒高劑量組，LWS-M 代表連翁顆粒中劑量組，LWS-L代表連翁顆粒低劑量組，XBJ代表鹽酸小檗堿組，MX代表
模型組；*表示與模型組相比差異顯著（p<0.05），*表示與模型組相比差異極顯著（p<0.01），下同。
表2連翁顆粒對蓖麻油致小鼠腹瀉的止瀉結(jié)果
組 別 | 動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg b.w.） | 腹瀉次數(shù)（次/只） | |||
0-1h | 1-2h | 2-3h | 3-4h | |||
LWS-H | 10 | 2.6 | 2.4±1.1 | 2.1±1.0 | 0.6±0.5 | 0.3±0.7 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 1.2±0.5 | 1.6±1.4 | 0.7±0.5 | 0.4±0.5 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 2.0±1.0 | 3.3±0.7 | 1.7±0.8 | 0.8±0.8 |
XBJ | 10 | 0.72 | 1.1±1.0 | 3.3±1.8 | 1.3±0.9 | 0.5±0.7 |
MX | 10 | 等容積生理鹽水 | 3.1±1.1 | 4.3±1.4 | 1.7±0.7 | 1.2±0.9 |
表3連翁顆粒對小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動影響的結(jié)果
組 別 | 動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg b.w.） | 小腸總長度（cm） | 炭墨推進(jìn)距離（cm） | 炭墨推進(jìn)率（cm） |
LWS-H | 10 | 2.6 | 46.7±2.5 | 30.1±3.7 | 64.5±5.1 |
LWS-M | 10 | 1.3 | 50.7±3.3 | 33.2±4.0 | 65.5±10.0 |
LWS-L | 10 | 0.65 | 50.7±3.8 | 32.2±5.1 | 63.5±11.0 |
XBJ | 10 | 0.72 | 50.0±3.5 | 27.6±4.0 | 55.5±10.0 |
MX | 10 | 等容積生理鹽水 | 50.7±4.0 | 41.3±5.6 | 82.4±16.0 |
表4 連翁顆粒對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 `x ±S n=10
組 別 | 動物數(shù)(只) | 劑量(g/kg b.w.) | 腫脹度（mg） |
LWS-H | 10 | 2.6 | 16.51±5.22* |
LWS-M | 10 | 1.3 | 17.25±3.15* |
LWS-L | 10 | 0.65 | 18.84±3.99 |
XBJ | 10 | 0.72 | 22.88±3.16 |
MX | 10 | 等容積生理鹽水 | 23.16±3.56 |
表5連翁顆粒對甲醛致大鼠足趾腫脹的影響（x±SD,n=6）
組 別 | 試驗(yàn)動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg） | 甲醛致炎不同時間足腫脹率（%） | |||
0.5h | 1h | 2h | 4h | |||
LWS-H | 6 | 2.6 | 51.7±2.6* | 53.8±6.2* | 56.4±3.7* | 31.7±5.9* |
LWS-M | 6 | 1.3 | 60.2±10.2 | 44.7±4.9* | 55.0±4.8 | 37.8±4.2* |
LWS-L | 6 | 0.65 | 53.4±9.5* | 75.6±7.5 | 55.6±4.7* | 38.5±3.2 |
XBJ | 6 | 0.72 | 62.6±14.1 | 61.3±6.3 | 66.0±9.0 | 47.9±9.9 |
MX | 6 | 等容積生理鹽水 | 71.3±6.6 | 69.9±7.9 | 69.4±13.7 | 50.4±7.5 |
表6 連翁顆粒對蛋清致大鼠足趾腫脹的影響（x±SD,n=6）
組 別 | 試驗(yàn)動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg） | 蛋清致炎不同時間足腫脹率（%） | |||
0.5h | 1h | 2h | 4h | |||
LWS-H | 6 | 2.6 | 105.0±5.9 | 83.4±3.6 | 69.5±11.0* | 29.5±35.7* |
LWS-M | 6 | 1.3 | 111.3±6.2 | 75.6±3.8 | 50.7±9.6* | 36.8±1.4* |
LWS-L | 6 | 0.65 | 97.6±18.5 | 107.4±10.7 | 67.4±8.2* | 50.5±3.6* |
XBJ | 6 | 0.72 | 101.4±16.2 | 116.8±24.2 | 90.2±9.8 | 58.8±8.5 |
MX | 6 | 等容積生理鹽水 | 103.5±22.3 | 92.7±9.0 | 90.2±6.0 | 62.6±1.8 |
表7 連翁顆粒對小鼠試驗(yàn)性致痛的影響 `x ±S n=10
組 別 | 試驗(yàn)動物數(shù)（只） | 劑量（g/kg） | 扭體次數(shù) |
LWS-H | 10 | 2.6 | 12.34±2.6* |
LWS-M | 10 | 1.3 | 13.88±3.4* |
LWS-L | 10 | 0.65 | 13.54±1.8* |
XBJ | 10 | 0.72 | 17.27±2.6 |
MX | 10 | 2.6 | 18.31±4.8 |
表8 中藥及其復(fù)方對大腸桿菌的抑菌結(jié)果
藥 物 | 濃度（g/ml） | 抑菌圈直徑（mm） | MIC值（mg/ml） | ||||
1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | ||
黃 連 | 1.0 | 8 | 9 | 8 | 200 | 175 | 150 |
白頭翁 | 1.0 | 7 | 7 | 8 | 200 | 250 | 200 |
老鸛草 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
大黃炭 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
黃連：白頭翁（1:1） | 1.0 | 9 | 8 | 10 | 175 | 200 | 175 |
連翁顆粒 | 1.0 | 8 | 11 | 10 | 150 | 150 | 175 |
注：“-”表示無明顯抑菌作用。抑菌圈判斷標(biāo)準(zhǔn)：直徑>10 mm為強(qiáng)抑菌， 8-10 mm為抑菌， 8 mm以下為不完全抑菌。表13同。
表9 中藥及其復(fù)方對沙門氏菌的抑菌結(jié)果
藥 物 | 濃度（g/ml） | 抑菌圈直徑（mm） | MIC值（mg/ml） | ||||
1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 | ||
黃 連 | 1.0 | 11 | 10 | 10 | 200 | 200 | 200 |
白頭翁 | 1.0 | 10 | 9 | 9 | 200 | 200 | 200 |
老鸛草 | 1.0 | 10 | 12 | 9 | 200 | 150 | 150 |
大黃炭 | 1.0 | — | — | — | — | — | — |
黃連：白頭翁（1:1） | 1.0 | 11 | 9 | 12 | 200 | 175 | 200 |
黃連：白頭翁：老鸛草（3:3:2） | 1.0 | 10 | 11 | 12 | 175 | 150 | 125 |
連翁顆粒 | 1.0 | 10 | 11 | 9 | 150 | 200 | 175 |
五、臨床應(yīng)用
1.適應(yīng)癥
主要用于治療大腸桿菌及其他致病菌引起的仔豬黃白痢、仔豬斷奶后腹瀉、豬回腸炎及各類久治不愈的頑固性腹瀉。
2.用法用量
預(yù)防斷奶仔豬腹瀉：本品0.5kg拌料50kg，連用五天，可有效預(yù)防斷奶仔豬腹瀉。
治療哺乳仔豬腹瀉：每窩哺乳仔豬一包50g，溶于25ml，25-45攝氏度溫水調(diào)制成稀糊狀，灌服，一天兩次，連用三天。
3.臨床療效試驗(yàn)
阜新市洪亮養(yǎng)殖場，經(jīng)產(chǎn)母豬存欄300頭。3月份發(fā)生哺乳仔豬腹瀉，以水樣腹瀉居多，仔豬嚴(yán)重脫水，極度消瘦。雖經(jīng)抗生素治療，但效果不理想。10日齡前哺乳仔豬死亡近半；10日齡至斷奶期間哺乳仔豬，死亡率雖低，但仔豬消瘦，斷奶重過低。公司了解情況后，推薦豬場使用連翁顆粒。
4.操作方法
將本品一包50g，溶于25-45攝氏度溫水30ml，調(diào)制成稀糊狀，用注射器灌服患病仔豬10-15頭。上下午各一次，連用三天。
5.治療效果的對比
一般經(jīng)過3天治療后，仔豬腹瀉得到完全控制，絕大部分仔豬采食及糞便狀況恢復(fù)至正常。治療后仔豬長勢良好，無僵豬現(xiàn)象出現(xiàn)。
針對10日齡仔豬腹瀉，臨床治療對比表明，連翁顆粒治療效果明顯，恢復(fù)后增重效果好。
發(fā)病仔豬頭數(shù) | 發(fā)病日齡 | 治療方案 | 治愈率 | 仔豬狀態(tài) | 斷奶重 |
40 | 5-10日齡 | 慶大、環(huán)丙沙星肌肉注射 | 55% | 部分消瘦 | 28天斷奶平均6.5kg |
50 | 5-10日齡 | 連翁顆粒灌服 | 90% | 完全康復(fù) | 28天斷奶平均8kg |
六、小結(jié)
連翁止痢顆粒為純中藥制劑，綠色、無殘留、較少產(chǎn)生耐藥性，甚至有報(bào)道稱中藥制劑可逆轉(zhuǎn)耐藥性。連翁顆粒中含有多種生物堿，鞣質(zhì)、黃酮、有機(jī)酸、揮發(fā)油、大黃多糖和三萜皂苷。經(jīng)過大量臨床驗(yàn)證，其對大腸桿菌及其他致病菌引起的仔豬細(xì)菌性腹瀉有奇效，對病毒性腹瀉繼發(fā)感染效果明顯。目前連翁顆粒已經(jīng)獲得國家三類新獸藥證書1項(xiàng)，申報(bào)國家發(fā)明專利2項(xiàng)，均已進(jìn)入實(shí)質(zhì)審查階段。連翁顆粒為全國首創(chuàng)，在治療大腸桿菌感染引起的仔豬白痢有較好的治療效果。與其他藥物相比具有安全、無耐藥性、無殘留等的顯著優(yōu)點(diǎn)。
