雛雞接種法分離病毒：取病雞的病料腹腔接種于1周齡以內的易感雛雞。在接種后2-10周進行檢查，如肉眼或顯微鏡能發現馬立克病變、細胞培養能分離出病毒、羽毛囊中出現特異性抗原、血清抗體試驗呈陽性，則表明已經感染。
     瓊脂擴散試驗：按常規制作瓊脂板，梅花打孔器打孔。① 用標準抗原檢測抗體（受檢雞血清）。用滴管將受檢血清按順序間隔地滴加于周邊孔內，以孔滿而不溢出為度。每加一份血清須換一支滴管向中心孔內滴加抗原，以滿為度；再取一支滴管向空下的周邊孔內加入標準陽性血清。將加樣完畢的瓊脂平皿加蓋后，在室溫下靜止片刻，待樣品稍稍擴散液面下陷后，平放于帶蓋的濕盒內，置37℃溫箱中，于24小時內觀察并記錄結果。② 用標準陽性血清檢測病毒抗原（受檢雞羽髓浸液）。選拔受檢雞含羽髓豐滿的翅羽或身上其他部位大羽（幼雞8根，中、成雞3～根），將含有羽髓的羽根部分按編號分別剪下收集于小試管內，于每管內滴加蒸餾水2～3滴（羽髓豐滿時也可不加），用玻璃棒將羽根擠壓于試管底，使羽髓浸出液流至管口，另一人用滴管將其吸出。用同樣方法浸提其他樣品。將被檢樣品間隔滴加到周邊孔內，每加一個樣品須換一支滴管或將滴管充分洗凈、拭干再用。用另一支吸管向中心孔滴加標準陽性血清。再用一支吸管向空下的周邊孔滴加標準抗原。以上均以加滿不溢為度。加樣完畢的瓊脂平皿加蓋后，在室溫下靜止片刻，待樣品稍稍擴散而液面下陷后，平放于帶蓋的濕盒內，置37攝氏度溫箱中，于24小時內觀察并記錄結果。③ 判定結果。被檢材料形成清晰的沉淀線并與標準試劑的沉淀線相互融合，則判為陽性反應；不出現沉淀線的則判為陰性反應；標準陽性血清和抗原所產生的沉淀線末端彎向被檢樣品孔，則該被檢樣品判為弱陽性；有的被檢材料可能會產生一條以上沉淀線，仍發球陽性反應。
間接血凝試驗：凝集價達1：16或更高時，即認為是抗體陽性反應。