Singel(1981)等發現,人紅細胞與白細胞一樣,也具有重要的免疫功能,其基礎是紅細胞表面的C3b受體。國內的郭峰等許多學者也發現了人紅細胞上存在C3R,并建立了一系列檢測方法。機體的免疫系統是由免疫細胞和免疫分子組成的一個完整的免疫網絡,由于新生雛雞免疫生理的特殊性,各種應激因素易使其潛伏感染轉化為活動感染。因此,小雞免疫功能的調節主要在于如何增強機體免疫性。目前,已有學者研究開發免疫調節劑或增強劑或提高機體免疫性以達到防病、治病的目的。微生態制劑是否對雞免疫功能有影響是一個值得研討的課題,本實驗旨在討論益生芽孢桿菌對雞免疫器官和機體免疫系統的影響。
1 材料與方法
1.1 材料
(1)1日齡雛雞,黃羽×本地土雞,購自雅安草壩某雞場。
(2)益生芽孢桿菌制劑,由四川農業大學微生態工程實驗室提供。
(3)新城疫LaSotaⅥ系弱毒苗,批號:9928,購自雅安市畜牧局。
1.2 分組及給藥 將1日齡雛雞隨機分成試驗組和對照組,均飼喂同一日糧,試驗組日糧中添加0.1%益生芽孢桿菌制劑。日糧營養水平如下:1~3周齡:粗蛋白20.97%,代謝能2.93 Mcal/kg,Ca 0.94%,P 0.64%,有效P 0.48%,Lys 1.10%,Met 0.44%,CF 4.66%;4~7周齡:粗蛋白18.30%,代謝能2.97 Mcal/kg,Ca 0.88%,P 0.63%,有效P 0.46%,Lys 0.95%,Met 0.35%,CF 5.0%。
1.3 免疫 兩組雛雞均用雞新城疫苗,按規定劑量滴鼻,7日齡首免,21日齡2免。
1.4 檢測指標
(1)增重率:每周分別從試驗組和對照組隨機取4羽稱重。
(2)E-C3bR花環率:從第2周將上述稱重的雞只,頸靜脈或翅下采血3.0 ml,肝素鈉抗凝,取抗凝血0.75 ml用生理鹽水4 ml洗滌離心3次,再用生理鹽水稀釋成1.25×10.7個/ml的紅細胞懸液;參照文獻制備C3b致敏酵母懸液,取C3b致敏酵母懸液和雞紅細胞懸液各3滴,混勻,于37℃水浴45 min,取出輕輕搖勻,加1滴0.25%戊二醛固定5 min,再用適量生理鹽水稀釋,涂片,自然干燥,瑞氏染色,顯微鏡下檢查,計數花環率。
(3)免疫器官重量:從1周齡開始,剖殺上述已稱重(或采血)的雞只,分離胸腺、脾臟、法氏襄,用濾紙吸去水分,稱重。
1.5 統計方法 用t檢驗進行統計分析。
2 結果
益生芽孢桿菌對雞增重效果明顯,特別是第4周開始能顯著促進雛雞生長發育。
益生芽孢桿菌對雛雞E-C3bR花環率影響只有第5周齡時差異顯著,總平均差異不明顯。說明其對雞紅細胞免疫影響不大。
益生芽孢桿菌制劑對雛雞E-C3bR花環率的影響。
益生芽孢桿菌對免疫器官增重在第2周齡和第6周齡不顯著,而其余周齡都表現出顯著或極顯著。表明益生芽孢桿菌能促進免疫器官的生長發育。
益生芽孢桿菌制劑對雞胚免疫器官發育的影響。
3 討論
3.1 益生芽孢桿菌對雞增重效果明顯,這可能是由于益生芽孢桿菌合成B族維生素、賴氨酸、蛋氨酸等營養物質為雞所利用(姚建國,2000)。同時,益生芽孢桿菌可能產生了蛋白酶、淀粉酶、植酸酶等各種消化酶來促進飼料的轉化。益生芽孢桿菌具有較強的酶活性,同時,其能增加血液中的鈣、鎂,減少鉀量而改善礦物質的吸收。本次試驗證明了益生芽孢桿菌能顯著促進雛雞生長發育。
3.2 從微生態學來講,畜禽疾病是由于機體內菌群失衡所致,益生芽孢桿菌用于飼料中可恢復正常菌原有的平衡態,其可能的途徑有:產生了揮發性脂肪酸,降低腸道pH值,從而抑制病原微生物的生長發育;防止腸道內產生的腸毒素、毒性胺、吲哚、甲烷等有毒物質的,有利于動物生長;刺激動物分泌過氧化氫、有機酸、類抗生素等殺菌物質,殺滅潛在的病原微生物,刺激動物產生非特異性免疫調節因子,提高免疫球蛋白濃度和巨噬細胞活性,從而增強機體免疫功能。
3.3 1983rh Inooka和Kimuxa首先闡述了納豆芽孢桿菌飼喂雞后,能夠增強雛雞對抗綿羊紅細胞的凝集抗體產生,并認為飼喂納豆芽孢桿菌在雛雞免疫反應上起一個重要作用。1986年、1988年Inooka等用該菌飼喂雛雞進行研究,結果實驗組雞脾臟T、B淋巴細胞比例顯著升高且顯著地降低脾臟的粘連細胞過氧化氫的產生。國內劉克林研究報道飼喂蠟樣芽孢桿菌組的免疫器官生長發育較對照組迅速、成熟快,血中T細胞值較對照組高。潘康成等用地衣芽孢桿菌也能促進家兔細胞免疫和體液免疫。本試驗也證明了益生芽孢桿菌難促進免疫器官的生長發育。
3.4 許多學者都已證實了益生芽孢桿菌能促進機體體液免疫和細胞免疫,但本次試驗表明益生芽孢桿菌對雞紅細胞免疫影響不明顯(P>0.05)。其實,影響其效果的因素較多,包括動物種類、年齡、生理狀態、菌株組成及其定植能力、飼養方式與劑量等。另外,可能由于接種了雞新城疫疫苗而形成的免疫復合物(IC)占據紅細胞C3b受體空位,從而表現出較輕微代償性紅細胞免疫缺陷,從而間接降低了益生芽孢桿菌的作用。馮來坤等(1991)報道了雞紅細胞上存在C3b受體,本次試驗進一步證實這一結果,也支持了Siegel關于RCIS至少廣泛在哺乳動物存在的論斷(Siegel,1981)。
目前,國內外還沒有關于益生芽孢桿菌對雞紅細胞免疫影響研究的正式報道,本試驗結果表明益生芽孢桿菌對雞紅細胞免疫的影響不明顯。