“雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota株+H120株）”由南京天邦生物科技有限公司、國家獸用生物制品工程技術研究中心和江蘇省農業科學院獸醫研究所根據市場需求共同研制，于2015年取得國家三類新獸藥注冊證書“證號：（2015）新獸藥證字41號”。

我國現階段常用的生物制品保護劑主要為 5%的蔗糖脫脂牛奶和1.5%-3.0%明膠，一般此類生物制品要求低溫保存，在常溫下要求盡快用完。而耐熱凍干保護劑更全面地考慮了具有生物活性的制品在較高溫度和較長保存時間的情況下凍干物質可能產生的物理和化學變化對活疫苗存活的影響。耐熱保護劑更能有效地保護疫苗，使保存時間更長，大大提高了疫苗的免疫成功率和免疫保護率。

雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota株+H120株）系采用雞新城疫病毒弱毒La Sota株、傳染性支氣管炎病毒弱毒H120株，分別以適宜稀釋度的病毒接種SPF雞胚，收獲感染胚液，取經檢驗合格的兩種病毒液按適當比例混合，加入一定量特定配方耐熱保護劑，經冷凍真空干燥制成。該疫苗用于預防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎。

與傳統的蔗糖牛奶保護劑不同，該疫苗解決了傳統凍干活疫苗對貯藏、運輸等冷鏈要求較高的問題，使凍干疫苗在2-8℃條件下，保存期能達到24個月。

一、主要成分及其作用

雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota株+H120株）系用雞新城疫病毒弱毒La Sota株、傳染性支氣管炎病毒弱毒H120株，分別以適宜稀釋度的病毒接種SPF雞胚，收獲感染胚液，取經檢驗合格的兩種病毒液按適當比例混合，加入一定量特定配方耐熱保護劑，經冷凍真空干燥制成。

1.毒種來源可靠

制造本品用的毒種為雞新城疫病毒弱毒La Sota株，雞傳染性支氣管炎病毒弱毒H120株；效檢用強毒雞新城疫病毒北京株，雞傳染性支氣管炎病毒M41株，均從中國獸醫藥品監察所引進。經SPF雞胚復壯、擴繁，鑒定合格后建立生產和檢驗用種子批。

2.抗原制備符合相關規定

均選用健康的SPF胚作為制苗材料，按照《雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗制造及檢驗規程（草案）》要求制備雞新城疫病毒La Sota株雞胚液與雞傳染性支氣管炎病毒H120株雞胚液，與《規程》（二OOO年版）中“雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗制造及檢驗規程”相一致。生產的抗原按《中國獸藥典》無菌檢驗的方法進行檢驗，無細菌、霉菌生長；同時測定病毒含量，雞新城疫病毒La Sota株，每0.1ml≥108.0/EID50，雞傳染性支氣管炎病毒H120株，每0.1ml≥106.0/EID50。

3.耐熱保護劑配置優良

為了提供對疫苗的良好保護，減少疫苗的凍干損失、保存和運輸過程病毒的毒力的下降，我們調試出一組配方，主要組分為明膠、蔗糖、乳糖、谷氨酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、蛋白胨等。根據各主要成分的理化性質，保護劑分保護劑組分I（過濾除菌）、保護劑組分II（116℃高壓30分鐘進行滅菌），二者按1︰4混合后，用于疫苗的配制。

二、產品特點

1.安全性好

對實驗室制品進行一次單劑量接種、單劑量重復接種和超劑量（點眼、滴鼻10倍劑量、飲水20倍劑量）接種的安全性試驗。結果，接種雞和對照雞飲食、呼吸均正常，未見呼吸癥狀或神經癥狀等任何異常臨床反應，表明該疫苗對于4-7日齡雞是安全的。

2.免疫效力好

效力檢驗 分別用雞胚和雞進行效力檢驗，并與同種類的常規二聯苗（La Sota+H120株）、新城疫耐熱單苗（La Sota株）及傳染性支氣管炎耐熱單苗（H120株）相比較。經雞胚測定雞新城疫抗原的含量均大于106.0EID50/羽份，雞傳染性支氣管炎的抗原含量均大于103.5 EID50/羽份；各組雞只免疫后用雞新城疫北京株強毒攻毒，對照雞全部發病死亡，免疫雞9/10以上獲得保護；用雞傳染性支氣管炎病毒強毒M41株攻毒，對照雞9/10發病，免疫雞10/10保護。說明該實驗室制品與常規二聯苗（La Sota+H120株）、新城疫耐熱單苗（La Sota株）及傳染性支氣管炎耐熱單苗（H120株）效力相當，均符合現行《中國獸藥典》質量標準的規定。

免疫期 將三批實驗室制品分別接種7日齡SPF雞，并于免疫后5、7、14、21、30、45、60、75日檢測血清中的雞新城疫、傳染性支氣管炎HI抗體，同時在免疫后5、7、60、75日進行攻毒試驗。結果，免疫后7日，血清中的新城疫HI抗體達到4.0 log2以上，攻毒保護率在90%以上，傳染性支氣管炎HI抗體達到3.1log2以上，攻毒保護率在80%以上；免疫后21-30日，新城疫HI抗體達到高峰，在7.0 log2以上；免疫后30-45日，傳染性支氣管炎HI抗體達到高峰，在4.8 log2左右；免疫后60日，新城疫HI抗體下降至4.7-5.0 log2，但攻毒保護率為100%；免疫后75日，傳染性支氣管炎HI抗體下降至3.3-3.8 log2，攻毒保護率在60%以上。說明，該疫苗免疫7日就能對雞新城疫強毒、傳染性支氣管炎強毒提供有效保護；免疫后2個月以上免疫效果依然良好。為了保證雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱活疫苗對雞只的有效保護，我們將該疫苗的免疫期定為2個月。

3.保存期長

在2-8℃條件下保存27個月后，疫苗的物理性狀、水分含量、安全檢驗、雞效力檢驗、病毒含量，均符合現行《中國獸藥典》的相關規定，各項質量指標達到了現有新城疫耐熱保護劑活疫苗（La Sota株）、雞傳染性支氣管炎耐熱保護劑活疫苗（H120株）的水平，且明顯優于普通雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota+H120株）。為保證疫苗保存的可靠性，我們將疫苗在2-8℃條件下的保存期規定24個月。

4.耐老化效果好

按照通行的加速穩定性試驗方法，將疫苗置37℃10日后進行毒價測定，結果：雞新城疫病毒La Sota株的下降滴度為1.0-0.83，雞傳染性支氣管炎病毒H120株的下降滴度為1.0-0.83，分別達到了現有的雞新疫耐熱活疫苗（La Sota株）、雞傳染性支氣管炎耐熱活疫苗（H120株）的耐老化試驗質量標準，而普通的雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota+H120株）在經耐老化試驗后疫苗效價下降嚴重，達不到質量標準的要求。因此，我們將疫苗在37℃放置10天，每羽份雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒含量下降均不超過1個滴度確定為該二聯活疫苗耐老化試驗標準。

三、作用研究

（一）與同類疫苗的保存期比較試驗

1. 2-8℃保存期 將三批實驗室制品（批號為20070501、20070602和20070603）與某廠家普通二聯活疫苗（La Sota+H120株）及雞新城疫耐熱保護劑活疫苗（LaSota株）、雞傳染性支氣管炎耐熱保護劑活疫苗（H120株）產品，置2-8℃保存，分別于3、6、9、12、15、18、21、24、27個月測定各組分的病毒含量。結果，各批雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota+H120株）在2-8℃保存27個月后，雞新城疫及傳染性支氣管炎的抗原含量分別為106.63EID50/羽份、103.78EID50/羽份，106.78EID50/羽份、103.83EID50/羽份，106.50EID50/羽份、103.63EID50/羽份，均達到質量標準的要求；而普通二聯苗在保存6個月后，其雞新城疫及傳染性支氣管炎的抗原含量分別為105.83EID50/羽份、103.38EID50/羽份，均達不到質量標準的要求。（見表1）

表1 2-8℃保存不同時間各批疫苗效力檢測結果

2. 37℃耐老化 將三批實驗室制品（批號為20070501、20070602和20070603）與某廠家普通二聯活疫苗（La Sota+H120株）及雞新城疫耐熱保護劑活疫苗（LaSota株）、雞傳染性支氣管炎耐熱保護劑活疫苗（H120株）產品，置37℃保存，于保存后10天檢測各組分的病毒含量。3批實驗室制品及2批耐熱單苗雞新城疫抗原的下降滴度為1.0-0.83，傳染性支氣管炎抗原的下降滴度為1.0-0.83，而普通二聯苗兩種抗原的下降滴度均遠遠超過1。具體的檢測結果見下見表2：

表2 耐老化試驗結果

（二）臨床安全性觀察

5批雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota+H120株）中試產品，090701、090702、090803、090804和090805，分別以單劑量（滴鼻免疫每只雞1個羽份，飲水劑量為2個羽份）、10倍劑量免疫，并設常規二聯苗的免疫對照。免疫后，各組試驗雞只精神狀態正常，無聚集、蜷縮、呼吸異常等現象，未引起采食量、飲水量下降，與同種類疫苗相比較其安全性很好。對臨床上死亡的雞只進行剖檢，未發現由雞新城疫、雞傳染性支氣管炎引起的相關病變。對安全試驗期間活雞的剖檢結果顯示，各只雞均安全，均未有雞新城疫、傳染性支氣管炎相關的病變。（見表3）

表3 免疫后各組雞只的安全性比較

（三）臨床效力檢驗

5批雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱保護劑活疫苗（La Sota+H120株）中試產品，090701、090702、090803、090804和090805，分別以單倍劑量免疫，滴鼻免疫每只雞1個羽份、飲水劑量為2個羽份，并設常規二聯苗的免疫對照。蛋雞在免疫后2周、8周，肉雞在免疫后2周、6周，每組試驗雞各隨機抽取40只，飼養于南京天邦生物科技有限公司強毒動物房隔離器內，分別用雞新城疫（北京株）、雞傳染性支氣管炎強毒（M41株）攻擊，免疫雞只都能抵抗雞新疫、雞傳染性支氣管炎強毒的攻擊，對照SPF雞攻擊雞新城疫強毒后100%發病死亡，攻擊雞傳染性支氣管炎的SPF雞發病率在90%以上。具體的攻毒保護情況見下表4：

表4 各組試驗雞攻毒之后的保護情況（攻毒后健康雞數/試驗雞數）

四、雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯耐熱活疫苗（La Sota株+H120株）的正確應用

1. 適用于7日齡以上雞。按瓶簽注明羽份，用滅菌生理鹽水或適宜的稀釋液稀釋。點眼、滴鼻免疫，每只雞1滴（0.03ml）；飲水免疫，劑量加倍，其飲水量根據日齡大小而定，一般5-10日齡每只5-10ml，20-30日齡每只10-20ml。

2.疫苗稀釋后，應放冷暗處，必須在4小時內用完。

3.飲水免疫時，忌用金屬容器，飲用前至少停水2-4個小時。