近幾年，傳染性法氏囊病（IBD）已成為威脅我國養雞業的主要疫病之一。由于IBD超強毒和IBDV血清亞型（或變異株）的出現，使IBD病雞死亡率明顯上升。在世界范圍內，IBD疫苗免疫失敗時有發生。因此，如何提高IBD疫苗的免疫效果成為許多學者感興趣的研究課題，免疫增效劑的研究就是其中之一。目前被證實有免疫增強作用的物質不下幾十種，如卡介苗、轉移因子等。然而市售免疫增效劑都制備復雜，價格昂貴，并多有副作用。 為此，本院中西獸醫結合研究室根據中獸醫學基本原理，結合現代免疫學技術，從幾十種中藥中篩選出以黃芪和絞股藍為主的多種藥物制成復方黃芪口服液，給IBD疫苗免疫雞飲用，觀察復方黃芪對雞免疫功能的影響，以探討提高疫苗免疫效果的新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）實驗動物：購自南京農科院非免疫來航雞種蛋，由蕭山孵化廠孵化。（2）藥物：本院中西獸醫結合研究室制備，由黃芪 、絞股藍等組成，經水煎，過濾，濃縮成每毫升含生藥1 g的藥液。（3）疫苗：IBD病毒變異株JD1弱毒苗，由本院免疫研究所提供。（4）飼料：購自大江飼料有限公司。

1.2 分組及給藥 將102羽雛雞飼養至12日齡時，隨機分成A、B、C三組，每組34羽，并按下表給藥。

表1 實驗雞分組及給藥方法

組別 雞數（只） 給藥方法

A組34 飲水給藥，每日每雞0.5 ml，連用5天

B組34 飲水給藥，每日每雞0.5 ml，連用2天

C組34 不給藥

1.3 免疫 于14日齡時，各組雛雞用傳染性法氏囊病JD1弱毒苗，按要求用生理鹽水稀釋后按規定劑量進行滴眼免疫。

1.4 檢測指標和方法

1.4.1 體重和免疫器官的測定 分別于免疫后第7天、10天、15天、25天，每組隨機取4只雞稱重后經頸靜脈放血處死，立即解剖并分離法氏囊和脾臟，用濾紙吸去表面水分后，用電子稱稱重，按以下公式計算法氏囊系數和脾臟系數：法氏囊系數=法氏囊濕重(mg)/體重(g脾臟系數=脾臟濕重(mg)/體重(g)

1.4.2 微量血清中和試驗測抗體 分別在免疫后第7天、10天、15天、25天翅靜脈采血，每組5只，分離血清，參照文獻［6～7］有關方法進行中和試驗。將被檢血清56℃滅活30 min，以1∶10～1∶20 480，作倍比稀釋。然后固定JD1 35代細胞毒100TCID50不變，將每個血清稀釋度與病毒等量混合，37℃ CO2培養箱中和1 h。取各個稀釋度的中和物20 μl于雞胚成纖維細胞（CEF）上，CO2培養箱吸附1 h。加維持液繼續培養，每天觀察2次，一直觀察到96 h，記錄細胞病變情況。

1.4.3 硝基藍四氮唑（Nitroblue tetrazalium,NBT）還原試驗 分別在免疫后第7天、10天、15天和25天無菌采抗凝血，按文獻有關方法進行NBT試驗。

1.5 統計方法 參照文獻用t檢驗進行統計分析。

2 結果

2.1 對法氏囊系數的影響 見表2。

表2 復方黃芪對免疫雞法氏囊系數的影響

組別 免疫后天數

7 1015 25

A組 3.758±0.839 a4.368±0.419a5.563±0.218a5.378±0.613a

B組 4.923±0.872 a4.810±1.041ab 5.563±1.359a 5.173±0.645a

C組 6.018±1.850a 6.213±0.644b5.965±2.252a4.138±0.465 b

注：a，b不同字母間表示差異顯著(P<0.05)，相同字母間表示差異不顯著(P>0.05)(下同)。

由表2可見，免疫后10天的法氏囊系數C組顯著高于A組(P<0.05)，A組與B組，B組與C組間差異不顯著(P>0.05)；免疫后7天、15天，各組間差異不顯著(P>0.05)；免疫后25天，A組和B組顯著高于C組（P<0.05)，A組與B組間差異不顯著(P>0.05)。

2.2 對脾臟的影響 見表3。

從表3可知，免疫后7天、10天、15天、25天的脾臟系數，A組和B組均高于C組，但各組間差異不顯著（P>0.05）。

表3 中藥對免疫雞脾臟系數的影響

組別 免疫后天數

710 15 25

A組1.980±0.4381.823±0.237 1.771±0.1982.143±0.259

B組2.015±0.6101.943±0.408 1.690±0.3842.525±0.623

C組1.755±0.1261.718±0.358 1.537±0.6232.138±0.270

2.3 對雞血清中和抗體效價的影響 見表4。

表4 中藥對免疫雞血清中和抗體效價的影響

組別 免疫后天數

7 101525

A組2665.4 3444.1 4439.6 10049.2

B組2435.2 3766.2 5147.2 9449.3

C組2030.0 3150.4 4270.9 7851.3

從表4可以看出，A組和B組的中和抗體效價均高于C組，且免疫后25天時更明顯。A組和B組相比，免疫7天的血清中和抗體效價A組高于B組；免疫后10天、15天的血清中和抗體效價B組高于A組；而免疫25天的血清中和抗體效價則是A組高于B組。

2.4 NBT試驗結果 見表5。

3 討論

3.1 據報道，黃芪水提物能明顯增強刀豆蛋白A或美洲商陸素引起的淋巴細胞增殖反應。絞股藍在體外可促進混合淋巴細胞的增殖作用，并能促進小鼠脾細胞分泌白細胞介素-2。

復方黃芪以黃芪和絞股藍為主要成分。從本試驗結果來看，兩個中藥組的脾臟系數均高于對照組；免疫后25天，復方黃芪對法氏囊增重作用顯著，表明該復方黃芪對脾臟和法氏囊的發育都具有一定的促進作用。

3.2 當病原微生物入侵機體，突破機體的第一道防線，即機械屏障（如皮膚、呼吸道、胃腸黏膜等）后，機體就啟動其第二道防線，即嗜中性白細胞的吞噬功能，它們是第一個離開血液通過血管內皮細胞間隙和組織基質，進入感染位置吞噬和破壞病原體的細胞。據報道，黃芪中的多糖（APS），可以增強巨噬細胞的吞噬作用；絞股藍皂甙能提高正常小鼠外周白細胞數目和增加吞噬酵母多糖時的化學發光值。從NBT還原試驗結果可以看出，中藥黃芪復方制劑能明顯提高異嗜性白細胞還原NBT能力，說明其能增強機體的抗感染能力。該制劑這一作用可能與這些成分有關。

3.3 從病毒血清中和試驗結果中可以看出，復方黃芪制劑能明顯提高動物對傳染性法氏囊病疫苗的免疫應答反應能力，這一結果可能與本制劑中黃芪、絞股藍等中藥的某些成分有關。據報道，黃芪能明顯促進機體抗體的生成，可使抗體形成細胞素(PFC)和溶血測定值(QHS)顯著升高;使小鼠血清IgA、IgM、IgG水平，包括抗體分泌細胞及T、B淋巴細胞和NK細胞明顯增高;能提高患者白細胞誘生干擾素的能力，提高易感冒患者鼻腔分泌液中免疫球蛋白IgA及IgG的含量,在一定程度上抑制病毒的繁殖。（中國獸醫網）