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人參、人參葉含量測定方法介紹

放大字體  縮小字體 發布日期:2007-10-24  來源:中國獸藥114網  作者:信風  瀏覽次數:869

人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根及根莖。人參葉為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥葉,二者均收載于2005版《中國藥典》一部中。對人參和人參葉的含量測定,2005版藥典均采用HPLC法,前者以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1為指標;后者以人參皂苷Rg1和人參皂苷Re為指標。現對有關含量測定方法作一介紹。

一、高效液相色譜法(HPLC)
⑴ 2005版藥典人參、人參葉含量測定項:
人參:
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動相A,以水為流動相B,按下表進行梯度洗脫;檢測波長為203nm。理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于6000。
0-35min:A19%,B81%;35-55min:A19→29%,B81→71%;35-70min:A 29%,B71%;70-100min:A29→40%,B71→60%。
供試品溶液的制備:取本品粉末(過四號篩)約1克,精密稱定,置索氏提取器中,加三氯甲烷加熱回流3小時,棄去三氯甲烷液,藥渣揮干溶劑,連同濾紙筒移入100ml錐形瓶中,精密加水飽和正丁醇50ml,密塞,放置過夜,超聲處理(功率250W,頻率50kHz)30分鐘,濾過,棄去初濾液,精密量取續濾液25ml,置蒸發皿中蒸干,殘渣加甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

人參葉:
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.05%磷酸溶液(100:400)為流動相,檢測波長為203nm,理論板數按人參皂苷Re峰計算應不低于1500。
供試品溶液的制備:取本品粉末10克,精密稱定0.2克,置索氏提取器中,加三氯甲烷30ml,加熱回流1小時,棄去三氯甲烷液,藥渣揮去三氯甲烷,加甲醇30 ml,加熱回流3小時,提取液揮干,加水10 ml使溶解,加石油醚(30--60℃)提取2次,每次10 ml,棄去醚液,水液通過D101型大孔吸附脂柱(內徑1.5cm,長15cm),以水50ml洗脫,棄去水液。再用20%乙醇50ml洗脫,棄去20%乙醇洗脫液,繼用80%乙醇80ml洗脫,收集洗脫液70ml,蒸干,殘渣加甲醇溶解并定量轉移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

⑵有關液相色譜法測定人參皂苷含量的報道,大多測定一種或幾種人參皂苷(如人參皂苷Re、Rgl、Rb1)的含量對人參藥材及其制劑進行鑒別或定量分析。如(非藥典條件):

徐道娟等采用HPLC法測定參芪降糖顆粒中人參皂苷Re、Rg1的含量。Agilent 1100高效液相色譜儀;色譜柱:HypersilBDS Cl8柱流動相:乙腈-0.05%磷酸溶液(100:400),流速:0.8ml/min,柱溫,30℃ ,檢測波長203nm。人參皂苷Re、Rg1回歸方程分別為Y=0.00183A+0.02353 r=0.9998,Y=0.0015A-0.0053,r=0.9999,線性范圍分別為:1.976- 9.880μg,0.968pg-4.840μg。樣品處理方法同人參葉。
梁寧等用HPLC法,以茶堿為內標,氨基鍵合相為固定相,同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1與Rb1的含量。日立L-7ll0型高效液相色譜儀,日立L-7400型紫外檢測器,江申色譜工作站。色譜柱為NH2P-50柱(4.6 mm×250mm,5μm),流動相為乙腈-水(80:20),流速為1.0 mL/min,檢測波長為203nm,柱溫為室溫。人參皂苷Rg1在8O~ 280μg/mL(r=0.999 5),Rb1在8O~240μg/mL(r=0.999 3)線性關系良好,Rg1和Rb1加樣回收率分別為97.1% 和98.4% ,RSD分別為2.44%和2.3%( n=9)。
周迎春等采用高效液相色譜法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1含量。島津LC-10ATVP型高效液相色譜儀;島津SP-10AvP型紫外檢測器;ANASTAR色譜工作站;色譜柱為Asahipak NH2P-50(4.6 mm ×250 mm,5μm),固定相為氨基鍵合相,流動相為乙腈-水(81:19,V:V ),流速1.2mL/min,檢測波長203nm,柱溫:室溫。

文獻報道多采用ODS柱對一種人參皂苷單體進行定量,流動相多為乙腈-水、乙腈-磷酸等系統;同時測定幾種單體的一般為藥典方法或為氨基柱,流動相多為為乙腈-磷酸系統,梯度洗脫法。

二、薄層掃描法
張春桃等采用薄層掃描法測定健脾開胃顆粒劑中人參皂苷Rg1、Re的含量。雙波長薄層掃描分析儀(CS*930型,日本島津)。Rg1以氯仿-甲醇-水(25:10:1)為展開劑,Re以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃下放置下層液為展開劑;10%硫酸乙醇為顯色劑,以硅膠G為吸附劑,Rg1:(入s=535nm,入R=660nm),Re:(入s=525nm,入R=700nm)。
鐘華等采用薄層掃描法測定乳結散膠囊中人參皂苷Rb1、Rg1含量。CS-9OOO型雙波長薄層掃描儀(日本島津);定量毛細管(美國Drummond);Larnbdal6紫外分光光度儀(PERKIN ELMER) 。展開劑:氯仿-甲醇-水(13:7:2)lO℃以下放置過夜的下層溶液。雙波長反射法鋸齒掃描:測定波長入s=520nm,參比波長入R=700nm;線性參數:sx=3;狹縫:1.25mm×1.25mm;靈敏度:中;步距:0.5 mm。
何元凱采用雙波長薄層掃描測定血塞通片中人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的含量。CAMAG (TLC SCNNER 3)型薄層掃描儀,CAMAG (LINO MAT IV)半自動點樣儀。正丁醇-醋酸乙酯-水(4:1:5)上層溶液為展開劑。測定波長入s=535nm,參比波長入R=460nm。

文獻報道采用薄層色譜法測定人參皂苷的含量,多為對一種單體進行測定,展開系統多為氯仿-甲醇-水或氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水等。若同時分析幾種,一般采用雙波長掃描,效果較好。而且供試品溶液的制備是關鍵。有關文獻報道一般采用乙醚脫脂,甲醇提取,正丁醇萃取,堿洗,水洗,上氧化鋁柱等過程進行分離、純化。其中上柱處理是除雜的主要手段,但上柱處理樣品費時,操作繁瑣,可能產生較大的操作誤差。如果經過前期處理,薄層中干擾較少,則可以不經過上柱,同時也可以增加含量測定的準確度。

有關人參、人參葉極其制劑的含量測定報道較多,采用的方法主要有比色法、分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法等。在這些分析方法中,比色法和分光光度法由于其專屬性差、誤差大,已逐漸被淘汰。現階段較常用的是薄層掃描法和高效液相色譜法,而且,高效液相色譜法使用的頻率在迅速增加。

 
 
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