防己為防己科植物粉防己Stephania terandra S.Mmoore的干燥根。2005版《中國藥典》以粉防己堿和防己諾林堿為指標成分,采用高效液相色譜法測定其含量。有關防己含量測定方面文獻報道的較多,防己中粉防己堿和防己諾林堿的含量測定方法主要為高效液相色譜法和薄層掃描法等。
一、高效液相色譜法
2005版《中國藥典》防己含量測定項下:
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-甲醇-水-冰醋酸(40:30:30:1)(每100ml含十二烷基磺酸鈉0.41g)為流動相,檢測波長為280nm;理論板數按粉防己堿峰計算應不低于4000。
供試品溶液的制備:取本品粉末(過三號篩)約0.5克,精密稱定,精密加入2%鹽酸甲醇溶液25ml,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的重量,濾過。精密量取續濾液5ml,置10ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,即得。
宋旭峰等測定輕身減肥片中粉防己堿和防己諾林堿的含量,采用RP-HPLC法,Agilent高效液相色譜儀。色譜柱為Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流動相為甲醇-0.3%二乙胺溶液(75:25);檢測波長為242nm;流速為1.0mL/min;柱溫為30℃。在此條件下,粉防己堿的回收率為103.65%,RSD為1.59%(n=6);防己諾林堿的回收率為97.11%,RSD為1.91%(n=6)。樣品用流動相超聲處理。
和健等測定迪可顆粒中芍藥苷和粉防己堿的含量,采用高效液相色譜法,Waters高效液相色譜儀。色譜柱為diamonsil ODS(5μm,250mm×4.6mm)分析柱;流動相為甲醇-乙腈-0.003mol/LKH2PO42二乙胺(55:25:20:0.06);流速1.0mL/min;柱溫為室溫;檢測波長230nm。粉防己堿在0.0278~0.2227μg范圍內峰面積和進樣量呈良好的線性關系, r=0.9999,平均回收率為98.38%。供試品溶液的制備:本品加氨試液加塞放置30min→加醋酸乙酯超聲→取上清液水浴蒸干,殘渣加3:2的甲醇水溶液溶解并稀釋至刻度。
劉幸平等測定防己黃芪顆粒劑中防己諾林堿、粉防己堿的含量,采用反相高效液相色譜法,Waters效液相色譜儀。色譜柱為Kromasil 柱(4.6mm×250mm,5μm);柱溫30℃;流動相為甲醇-0.3%二乙胺(80:20);流速1.0mL/min;紫外檢測波長242nm。
二、薄層掃描法
李永慶等測定痛立克注射液中延胡索乙素、粉防己堿和防己諾林堿的含量,采用薄層掃描法,島津CS-9301型雙波長飛點掃描儀。薄層色譜:薄層板為含0.5%氫氧化鈉和0.1%羧甲基纖維素鈉的硅膠G薄層板;展開劑:環己烷-氯仿-甲醇(7.5:4:2);顯色:碘蒸氣熏30min,取出,揮盡碘。掃描條件:紫外反射鋸齒掃描;光斑0.4mm×0.4mm,檢測波長360nm,掃描寬度11mm。