菊花為菊科植物菊Vhrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法測定其綠原酸的含量。綠原酸的含量測定方法報道得較多,現介紹菊花及其制劑中綠原酸的測定方法。
一、高效液相色譜法
2005版《中國藥典》菊花含量測定項下:
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.01mol/L磷酸二氫鈉緩沖液[取磷酸二氫鈉15.6g,加水至1000ml,制成0.mol/L的溶液,加入磷酸適量,使pH為2.7]-甲醇(70:30)為流動相;檢測波長為328nm。理論板數按綠原酸峰計算應不得低于2500。
供試品溶液的制備:取本品粉末(過一號篩)約1g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,加熱回流2小時,冷卻,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密;精密量取續濾液10ml,蒸干,殘渣加三氯甲烷5ml,浸漬3分鐘,棄去三氯甲烷液,殘渣揮去三氯甲烷,加水適量使溶解,并轉移至5ml量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。
文獻報道的HPLC法一般為藥典條件,如:①LC-6AD 型高效液相色譜儀(日本島津公司)色譜柱為D iamon silTMC18 (4.6mm×150mm, 5μm );0.1mol/L磷酸二氫鈉-甲醇(7.3:2.7) 為流動相;檢測波長為326nm;柱溫32℃。樣品用丙酮超聲處理。(楊振萍等,“HPLC測定川菊中綠原酸的含量”,光譜實驗室,2005,22(5))。②PEIntegral 4000高效液相色譜儀;Nova-Pak C18色譜柱(4μm,4.6mm×250mm);流動相的配制:取磷酸二氫鈉適量制成0.1mol/L的溶液,按2ml/L的比例加入磷酸適量,調整pH為2.65,超濾后與甲醇按70:30的比例混合;檢測波長為328nm;溫為室溫。(李宗等,“菊花中綠原酸的含量測定”,中國中藥雜志,1999,24(6))等。
顧瑤華等分析不同藥用菊花品種綠原酸的含量時,采用惠普HP-1100系列高效液相色譜儀;色譜柱Kromasil C18柱;流動相以甲醇-水-磷酸(30:70:0.4)等度洗脫;檢測波長328nm;柱溫為室溫。
二、紫外分光光度法
陳勇敢等測定菊花速溶片中綠原酸的含量,采用UV 2265紫外分光光度計,在328nm處測定。結果表明用紫外分光光度法測定菊花速溶片中綠原酸的含量, 不需分離提取, 具有操作簡便、分析快捷、結果重現性好、回收率高的特點, 特別適用于基層單位適用。