5.12　轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子

Have發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子(Transcriptional regulator)對(duì)于肺炎鏈球菌在不同模型(如耳炎、肺炎和腦膜炎模型)中的完整毒力是必需的，這些可能的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子可以調(diào)節(jié)組織特異性毒力因子的表達(dá)。rlrA是其中一個(gè)調(diào)節(jié)子，它對(duì)于肺炎鏈球菌在鼻咽部的定殖及肺部的感染是必不可少的。

5.13　表面錨定蛋白

肺炎鏈球菌的表面錨定蛋白(Surface anchored protein)在黏附過程中起到了強(qiáng)有力作用。肺炎鏈球菌表面錨定蛋白，屬于LPXTG蛋白家族。突變?cè)囼?yàn)表明，此蛋白對(duì)于肺炎鏈球菌在咽部的定殖和肺的感染是必需的。此序列可能與豬鏈球菌2型的黏附過程有關(guān)[11]。

5.14　金屬ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子

細(xì)菌通常具有多種機(jī)制，從環(huán)境中獲得必需的微營養(yǎng)(離子)。而金屬ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子(ATP-binding cassette transporter)正是肺炎鏈球菌從外界環(huán)境獲得離子的必要工具。經(jīng)同源性查找發(fā)現(xiàn)，9號(hào)片段與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子具有相似性，故其可能在豬鏈球菌2型的致病過程中發(fā)揮了作用[14]。

6　豬鏈球菌的鑒定

6.1　生化鑒定

該菌在固體培養(yǎng)基上以雙球菌為多，少量呈3個(gè)～5個(gè)排列的短鏈，在液體培養(yǎng)物中以長鏈為主。在鮮血培養(yǎng)基上菌落為圓形、微凸、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、半透明，直徑約1 mm～2 mm，能發(fā)酵葡萄糖和蔗糖，不發(fā)酵菊糖和馬尿酸鈉，對(duì)乳糖、蕈糖、甘露醇、山犁醇及水楊苷的發(fā)酵能力因毒株而異，不還原硝酸鹽，接觸酶陰性，低于10 ℃或高于45 ℃時(shí)不生長[15]。

6.2　血清學(xué)鑒定

血清學(xué)方法包括協(xié)同凝集試驗(yàn)、莢膜反應(yīng)試驗(yàn)、平板凝集試驗(yàn)、莢膜多糖的免疫印跡分析等。其中協(xié)同凝集試驗(yàn)應(yīng)用最廣，即將豬鏈球菌分型用抗血清與金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)A蛋白(SPA)相結(jié)合，再與待檢的臨床分離菌株作玻板凝集試驗(yàn)，陽性反應(yīng)出現(xiàn)特異的顆粒狀凝集物。莢膜反應(yīng)的抗原為培養(yǎng)5 h～6 h的菌液(此時(shí)莢膜產(chǎn)生量最大)，與抗血清混勻，直接在相差顯微鏡下觀察，并設(shè)置空白對(duì)照進(jìn)行比較，該法能分辨現(xiàn)有的35個(gè)血清型(1型～34型及1/2型)。平板凝集反應(yīng)的方法是，將培養(yǎng)基制成鏈球菌的選擇性培養(yǎng)基，再加50 mL/L的抗豬鏈球菌羊血清，制成平板，然后培養(yǎng)待檢菌株，豬鏈球菌能形成大的沉淀圈，該法特異性大于94.5%，相對(duì)敏感率為88.7%。莢膜多糖的免疫印跡分析用來鑒定豬鏈球菌2型菌株，方法是先提取待檢菌株的莢膜多糖，用PAGE分離，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用抗豬鏈球菌2型特異性抗體雜交，然后酶聯(lián)顯色，產(chǎn)生特征條帶的為陽性。此法敏感、特異，但試驗(yàn)過程繁雜，故不適用于大規(guī)模的篩選鑒定。

6.3　多重PCR技術(shù)對(duì)豬鏈球菌血清型的鑒定

Smith根據(jù)型特異性的莢膜多糖基因設(shè)計(jì)引物，研制出一種快速敏感的三重分型PCR，分別能同時(shí)從豬的扁桃體中檢測(cè)出豬鏈球菌1型(或14)、2型(或1/2)和9型。利用CPS2J、CPS1I、CPS9H3組基因，建立分型的多重PCR，它們的PCR產(chǎn)物大小分別為235、440、390 bp，它可以在同一個(gè)PCR體系中同時(shí)鑒定1型或14型、2型或1/2和9型。Marois C等[16]為了檢測(cè)試驗(yàn)感染豬及無癥狀臨床豬的扁桃體攜帶細(xì)菌狀況，建立了檢測(cè)豬鏈球菌2型和1/2型的復(fù)合PCR檢測(cè)技術(shù)，主要是針對(duì)細(xì)菌的16 S RNA序列和CPS2J序列進(jìn)行檢測(cè)。Silva L M等[17]通過構(gòu)建針對(duì)豬鏈球菌的GDH、CPS、EF、MRP、SLY、SsnA 6種基因的復(fù)合PCR，來鑒定和尋找毒力菌株的特征。PCR技術(shù)明顯地彌補(bǔ)了生化鑒定的不足， 提高了鑒定的效率和準(zhǔn)確性。適合于分子診斷和流行病學(xué)調(diào)查，同時(shí)為控制和根除豬鏈球菌病提供了有效的檢測(cè)方法。

7　免疫預(yù)防與治療

免疫預(yù)防是控制傳染病的有效手段，研制能預(yù)防豬鏈球菌感染的疫苗是成功控制該病的關(guān)鍵。另外，多次加強(qiáng)免疫，受免疫豬的攻擊保護(hù)率會(huì)相應(yīng)提高。

除全菌外，豬鏈球菌2型胞壁外蛋白亦作為疫苗研究的重點(diǎn)。MRP、EF是豬鏈球菌2型重要的保護(hù)性抗原，可作為亞單位疫苗的候選蛋白。對(duì)感染豬鏈球菌2型并出現(xiàn)臨床癥狀的豬，敏感的藥物、合適的給藥途徑有助于感染豬的康復(fù)。最小抑菌濃度試驗(yàn)表明，大多數(shù)分離株對(duì)青霉素中度敏感，對(duì)阿莫西林、氨芐青霉素等則高度敏感，對(duì)四環(huán)素、林可霉素、紅霉素、卡那霉素、新霉素、鏈霉素則具有高度的抵抗力。Vela A I等[18]檢測(cè)了從西班牙病豬體內(nèi)分離的151株豬鏈球菌對(duì)常用抗生素的耐藥性，結(jié)果表明， 87%以上的豬鏈球菌對(duì)于四環(huán)素、磺胺類藥物、大環(huán)內(nèi)酯類藥物和氯林可霉素耐藥，而且87%以上的菌株對(duì)至少4種抗生素具有多重耐藥性， 6%的菌株對(duì)6種以上的抗生素具有多重耐藥性。最常見的多重耐藥的藥物為四環(huán)素、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類。豬鏈球菌9型對(duì)泰樂菌素和氯林可霉素的耐藥性明顯比豬鏈球菌2型的耐藥性高。