目的：建立金訶天根膠囊中腺苷的含量測定方法。方法：HPLC法測定金訶天根膠囊中腺苷的含量。采用C18柱，以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(90：10)為流動相，檢測波長260nm。結果：此方法線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為100.3％，RSD=0.79％(r=5)。結論：本方法簡便，穩定，能有效地控制該制劑的質量。
關鍵詞：腺苷；金訶天根膠囊；HPLC
金訶天根膠囊是由冬蟲夏草[麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis(Brek．)Sacc．寄生在蝙蝠娥科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體復合體]、喜瑪拉雅紫茉莉[紫茉莉科植物喜瑪拉雅紫茉莉Mirabilis himalaica(Edgew．)Heim．的干燥根]、西藏迷果芹[傘形科植物迷果芹Sphallerocarpus gracilis(Bess．)k-po1．的干燥根及根莖]、手參[蘭科植物手參Gymnadenia conopsea(L．)R．Br．的干燥塊
根等9味藏藥組成。其處方最早收載于《四部醫典》，由此加減制成的一種復方藏藥制劑。具有滋補肝腎，益精培元，延緩衰老等功效。用于治療虛勞導致的疲勞綜合癥，腰膝酸痛，夜尿頻多等癥狀。方中君藥冬蟲夏草的主要成分為腺苷，2000版中國藥典 及文獻報道 均采用高效液相色譜法測定腺苷的含量。在實驗中曾采用上述2種方法檢測，結果峰形對稱性不好，嚴重拖尾且有一干擾峰，為此我們試尋找適宜的提取條件及色譜條件進行測定，取得了比較好的效果，為藏藥制劑的質量控制方法提供了一定的依據。
1 儀器與試藥
惠普1100高效液相色譜儀，惠普1100檢測器，TU-1201型紫外分光光度計(北京通用儀器廠)，腺苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，純度99％以上，供含量測定用，批號：879-200102)，水為重蒸餾水。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。金訶天根膠囊樣品5批(由青海省金訶藏藥藥業有限公司提供)。
2 實驗條件
2．1 供試品提取溶劑的選擇 由于方中的腺苷含量較低，干擾成分多，曾采用藥典方法及文獻報道的方法，用90％甲醇和15％甲醇提取，均分離不好，拖尾嚴重，，后經多次試驗，采用90％甲醇超聲提取后；蒸干；加0.O1 mol/L磷酸三鈉溶液溶解，進行檢測，峰形的對稱性比較好，并消除了腺苷峰的拖尾現象及干擾峰，取得了較好的分離效果。
2．2 測定波長的選擇 取腺苷對照品適量，加90％甲醇溶解后，蒸干，殘渣加0.01mol/L磷酸三鈉溶液制成25μg/mL對照品溶液，置紫外分光光度計記錄紫外吸收光譜。結果顯示，腺苷在260nm波長處有最大吸收，故選擇260nm為測定波長。
2．3 流動相的選擇 以藥典方法的流動相：磷酸鹽緩沖液(pH 6.5)[取0.01mol/L磷酸二氫鈉68.5mL與0.01 mol/L磷酸氫二鈉31.5mL，混合，調pH 6.5]-甲醇(17：3)，及文獻報道中的流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀-甲醇(87：13)，經這2種流動相的試驗，選擇0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇為流動相，以不同比例進行反復試驗，確定比例為(90：10)時峰形及出峰時間適宜。
3 試驗方法與結果
3．1 分析溶液的制備
3．1．1 對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓24h的腺苷對照品8mg，加入0.01mol/L的磷酸三鈉溶液溶解，并定容稀釋至25mL，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液4.0mL，加0.01mol/L磷酸三鈉溶液稀釋至25mL量瓶至刻度，搖勻，作為對照品溶液。
3．1．2 供試品溶液制備取本品內容物適量，研勻，精密稱取8g，精密加入90％甲醇50mL稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷，稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25mL，水浴上蒸干，殘渣加0.01 mol/L磷酸三鈉溶液溶解，置于5mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
3．1．3 陰性對照品溶液的制備
按處方比例稱取除去冬蟲夏草的其它藥材適量，依照金訶天根膠囊的制備工藝和供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。
3．2 色譜條件色譜柱：Exsil ODS 4.6mm×250mm，5μm。流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇(90：10)，檢測波長：260nm，柱溫：23℃，流速：1mL/min。
3．3 分析方法學考察
3．3．1 系統適應性試驗
在上述色譜條件下，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液各10μl，分別注入色譜儀。供試品色譜圖中，在與對照品色譜圖相應保留時間上，有一相同的色譜峰，而陰性對照品在此無干擾。
3．3．2 線性關系考察
分別精密吸取腺苷對照品貯備液1，2，4，6，8mL置25mL量瓶中，加0.01mol/L磷酸三鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取各10μl進樣，在上述色譜條件下，測定峰面積，求得回歸方程：Y=0.5193+4.0218X r=0.9999
實驗結果表明：腺苷在0.128mg/mL～1.024mg/mL范圍內有良好的線性關系。
3．3．3 精密度實驗
精密吸取腺苷對照品溶液10mg/mL，連續進樣5次，測得腺苷峰面積為2003.28，1984.48，1995.49，1993.47，2008.65，平均峰面積為1997.074，RSD=0.46％ 。
3．3．4 重復性實驗
取同一批號的樣品5份，按“3．1．2”項下的方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下，測定腺苷的含量分別為0.1135mg/mL、0.1178mg/mL 、0.1162mg/mL、0.1139mg/mL、0.1131mg/mL，平均含量為0.1149mg/mL、RSD=1.76％。
3．3．5 穩定性實驗
取同一供試品溶液10μl，每隔2h進樣，測得腺苷峰面積分別為3585.25，3625.67，3546.96，3577.17，3621.89，平均峰面積為3591.39，RSD=0.91％。結果表明：供試品溶液在8 h內所測得結果基本一致。
3．3．6 加樣回收率實驗
精密稱取已知腺苷含量
的樣品5份，約4g，分別加入一定量的腺苷對照品0.48 mg，按“3．1．2”項下的方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測定腺苷的含量，計算回收率。結果平均回收率為100.3％，RSD=0.79％(n=5)。
3．3．7 樣品測定
取批號不同的樣品5批，按“3．1．2”項下的方法制成供試品溶液。精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μl，分別注入色譜儀，按上述色譜條件測定，計算腺苷的含量。測定結果。
4 討論
4．1 與藥典和文獻相比，本實驗在提取方法上進行了優化，對超聲波法、回流提取法進行比較，結果本文選擇的超聲30min效果最好。曾對磷酸三鈉的濃度，甲醇提取的濃度進行了比較分析，結果表明90％甲醇比15％甲醇提取完全，然后改用磷酸三鈉溶液溶解進樣，可改善峰形，消除拖尾及干擾峰。但如果磷酸三鈉的濃度過大，對色譜柱的損害會比較大，故選用濃度0.01mol/L。
4．2 用磷酸三鈉溶液溶解供試品進樣檢測時，流動相的比例對腺苷的分離及峰形有一定的影響。經多次實驗，流動相中的0.05mol/L磷酸二氫鉀-甲醇的比例應控制在(90：10)比較好。
4．3 本方法簡單、穩定，為復方藏藥制劑的質量控制提供了一種有效的分析方法。