3　試驗過程

3.1　樣品采集與處理

在擠奶時間采集擠后奶樣用于培養。采集用于培養的乳樣之前，清潔和干燥乳頭很重要。所有乳樣必須以正確的方式采集，污染乳樣沒有任何檢驗價值。乳樣必須采自用單個紙巾擦干、采樣前用700 mL/L酒精棉球用力擦拭過的干凈、干燥的乳頭，之后采集乳樣。乳區乳樣每個乳頭采集2.5 mL，用乳頭消毒液浸泡乳頭。樣品采集后，將取樣試管放在試管架上，以便運往實驗室。乳樣應當放置在用冰塊降溫至5 ℃的便攜式冷藏箱中送往實驗室。

3.2　樣品的微生物學鑒定

引起奶牛乳房炎的致病菌包括金黃色葡萄球菌(SA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)、無乳鏈球菌(SAG)、犬鏈球菌(SC)、其他鏈球菌(OS)、大腸埃希菌(EC)、牛棒狀桿菌(CB)、其他(OTH)。

圖1標明了鑒定這些致病菌的實驗操作過程，非常方便亞臨床乳房炎致病菌的鑒定，使用材料少，成本低、時間短。亞臨床乳房炎致病菌鑒定的基本要點是菌落的特征。葡萄球菌為小至中等大小清晰白色或黃色菌落，鏈球菌為小型無色、濕潤、隆起、半透明菌落。

如果憑菌落特征不能區分葡萄球菌(Staphylococci)和鏈球菌(Streptococci)，那么接觸酶試驗結果非常方便區分。如果憑菌落特征也不能區分大腸埃希菌(EC)和葡萄球菌(Staphylococci)，則可用KOH試驗結果非常方便區分。葡萄球菌的接觸酶試驗為陽性，而鏈球菌的接觸酶試驗為陰性；大腸埃希菌的氫氧化鉀試驗為陽性；凝固酶陰性葡萄球菌的氫氧化鉀試驗為陰性。

金黃色葡萄球菌(SA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)、無乳鏈球菌(SAG)、犬鏈球菌(SC)、其他鏈球菌(OS)、大腸埃希菌(EC)、牛棒狀桿菌(CB)、其他(OTH)。

4　小結

許多乳房炎致病菌有時能夠從奶牛生活的環境中分離到，因而如果發現5個以上同樣大小和顏色的菌落，就可做出明確診。對于葡萄球菌，如果僅發現1個菌落，對診斷也有重要意義。混合感染并不常見，如果乳區乳樣中經常發現2種或更多種細菌，那么有可能取樣方法不正確[12]。

培養20 h后，觀察培養結果。此時能夠觀察到的幾乎都是革蘭氏陽性球菌，所以，必須按照菌落的大小、顏色來區分葡萄球菌、鏈球菌，很少能檢測到大腸埃希菌，因為如果大腸埃希菌侵入乳腺，就會迅速繁殖并出現臨床癥狀。培養20 h尚不能檢測到牛棒狀桿菌，要檢測牛棒狀桿菌，培養時間應在36 h以上。

健康、正常乳腺的未污染乳樣不含有細菌。當乳區乳樣出現3種或更多種不一致的菌落，那么這個乳樣最有可能已被污染，該乳樣也應該按污染乳樣記錄。