來源:作者:盧麗萍，王俊華 摘要　目的: 建立珍視明滴眼液中天然冰片的含量的測定方法。方法: 以萘為內標, 采用內標法測定; 選擇0V -17填充柱、FID檢測器、程序升溫氣相色譜法測定珍視明滴眼液中天然冰片的含量。結果: 冰片在0.109～1.090μg 范圍內線性關系良好(r=0.9996),方法回收率為99.6% (RSD=1.91% ) ; 本品中冰片含量為0.047～0.049%。結論: 方法簡便, 快速, 準確, 可用于該藥品中天然冰片的定量測定。
關鍵詞：天然冰片;龍腦;珍視明滴眼液;GC法;含量測定
珍視明滴眼液是由珍珠層粉、天然冰片、硼砂、硼酸等制成。具有明目去翳、清熱解痙之功, 用于青少年假性近視, 緩解眼疲勞。其中冰片具有開竅醒神, 清熱止痛, 去翳明目的作用, 常用于閉癥神昏, 目赤腫痛, 喉痹口瘡等癥治療。由于冰片具有易揮發的物理特性, 我們采用氣相色譜法對珍視明滴眼液中冰片含量進行定量和測定方法的研究, 為該藥品和含冰片滴眼液質量標準和控制方法提供實驗依據。結果表明本方法操作簡便, 快速, 重現性好, 結果準確。
1 儀器與試藥
1.1 　儀器: GC214B氣相色譜儀(日本島津) ;CR27A數據處理器(日本島津) ; Sartorius BP211D電子天平。
1.2　試藥: 冰片對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號74328902) ; 內標物: 萘(分析純) ; 試劑:乙酸乙酯(分析純) ; 珍視明滴眼液: 江西施康中藥股份有限公司珍視明藥業分公司生產(市售)
21 方法與結果
2.1　色譜條件: OV-17 (10%) 不銹鋼柱(2m×3mmi.d.) ; 柱溫: (105℃(9min) 10℃/min160℃初始溫度105℃維持9分鐘,以每分鐘升溫10℃的速率升至160℃) 維持5min) ; FID檢測器: 溫度250℃; 汽化室溫度:200℃; 載氣(N2)流速:30ml/min; 氫氣流速:50ml/min; 空氣流速:500ml/min;供試液進樣量0.6μl。
2.2　標準溶液制備
2.2.1　內標溶液　取萘356.1mg 于50ml 容量瓶中, 用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度, 搖勻。
2.2.2 　對照品儲備液　取冰片對照品54.41mg 于25ml 量瓶中, 用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度, 搖勻。
2.2.3　對照品溶液　精密量取5ml 蒸餾水,1ml對照品儲備液, 分別精密加入1ml內標溶液、2ml乙酸乙酯于15m l帶塞試管中, 渦漩混合5min后放置, 待分層后取上層乙酸乙酯液作為對照品溶液。
2.2.4　供試液　取珍視明滴眼液5支倒出內容物, 混勻, 精密量取5ml于15ml帶塞試管中, 分別精密加入1ml 內標溶液, 3ml乙酸乙酯, 渦漩混合5min后放置,待分層后取上層乙酸乙酯液作為供試液。
2.3　系統適應性　在上述色譜條件下取對照品溶液1.0μl進樣測定,理論板數按萘計算應大于1500,異龍腦峰與龍腦峰的分離度應大于1.5。
2.4　線性關系試驗　精密量取對照品儲備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置于6個10ml量瓶中,分別精密加入1ml內標溶液,用乙酸乙酯稀釋至刻度搖勻。分別進樣1.0μl, 測定各組分的保留時間和峰面積。以冰片質量為Y,冰片峰面積( 異龍腦與龍腦峰總面積) 與內標峰面積的比值為X,進行線性回歸分析,得回歸方程為Y=0.1903+4.6782X(r=0.9996),結果表明冰片進樣量在0.109～1.09μg 范圍內有良好線性關系。
2.5　精密度試驗　取對照品溶液進樣, 按本法連續進樣測定6次, RSD=0.66% (n=6)。
2.6　重復性試驗　對樣品(031015) 的供試液按本法平行測定5次, RSD=0.97% (n=5)。
2.7　穩定性試驗　對樣品(030936) 的供試液按本法每隔1h 測定1次, 檢測至7h,RSD=1.20%,表明供試液至少在7h內穩定。
2.8　加樣回收試驗　精密量取5份已知含量的珍視明滴眼液(031015)各5ml, 分別精密加入適量冰片對照品, 1ml內標溶液, 3ml乙酸乙酯, 渦漩混合5m in 后放置, 待分層后取上層乙酸乙酯液, 按本法測定, 用內標法計算冰片含量并計算加樣回收率。
2.9 　樣品測定: 取珍視明滴眼液5支, 按21214 項方法制備供試液后, 按本法測定, 用內標法計算。
31 討論
3.1　色譜條件的選擇　①柱溫的選擇:根據恒溫測定的色譜流出曲線,顯示供試液中的防腐劑苯氧乙醇保留時間長, 而且是較嚴重的拖尾峰,為取得較高的柱效和保證龍腦和萘兩者有較好的分離,采用適宜的低溫分離; 然后升溫加速清洗除雜質苯氧乙醇等,縮短實驗分析周期,因而采用程序升溫法。②固定液的選擇:比較OV -17和PEG220M固定液對樣品組分的保留作用, 發現PEG220M的保留作用強, 保留時間太長,雜質苯氧乙醇難以洗出易污染色譜柱,因而選擇弱極性的OV-17,適當調節柱溫,可保證樣品中各組分達到較好的分離。③內標的選擇:參考以往的文獻,內標物一般選擇正烷烴,由于價格昂貴和缺乏,給實驗開展帶來困擾。萘價平易買,在一般色譜條件下能與冰片完全分離,此外萘具有冰片一樣的升華特性, 可減少樣品供試液制備和測定過程中回收率的不穩定性, 這現象在微量分析中特別明顯。建議在樣品組分與萘出峰不重疊的前提下可選擇萘作內標測定冰片。④高效毛細管色譜柱由于其高效性, 分離效果比填充柱好, 但價格高,有條件的用戶建議使用高效毛細管色譜柱測定。
3.2　由文獻可知, 天然冰片有龍腦冰片、艾片兩種,龍腦冰片主含右旋龍腦(d-龍腦),艾片主含左旋龍腦(L-龍腦);但兩者均不含異龍腦。冰片對照品是人工合成,由龍腦(d1)、異龍腦組成。在本法實驗條件下,冰片對照品GC圖有異龍腦和龍腦兩個峰;本品有一個峰,比較保留時間,可確定為龍腦峰,因此珍視明滴眼液中冰片是天然冰片。
3.3　中國藥典中本品檢測項有: 總氮量測定和TLC法鑒別冰片。沒有建立天然冰片的含量測定方法, 我們參考有關文獻, 建立了珍視明滴眼液中天然冰片的氣相色譜測定法。本法不但可用于“珍視明滴眼液”中天然冰片的定量測定, 還可定性鑒別冰片原料的來源, 防止用價廉的合成冰片充當價格高的天然冰片使用。
實驗結果表明,用萘作內標,選擇弱極性的固定液OV-17填充柱,FID檢測器,采用程序升溫方法測定“珍視明滴眼液”中的冰片含量是可行的, 該方法操作簡便, 快速, 結果準確, 可作為該藥品中天然冰片含量測定和定性鑒別, 并用于生產和藥品質量標準控制。