化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮。2005版《中國藥典》對其含量測定是以柚皮苷為指標,采用高效液相色譜法測定。文獻報道的化橘紅及其制劑的含量測定方法主要為高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光度法等。
一、高效液相色譜法
⑴2005版《中國藥典》化橘紅含量測定項下:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-醋酸-水(35:4:61)為流動相,檢測波長為283nm。理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應不低于1000。
供試品溶液的制備 取本品粗粉約1克,精密稱定,置索氏提取器中,加石油醚(60--90℃)80ml,加熱回流2~3小時,棄去石油醚,藥渣揮去石油醚,加甲醇80ml,加熱回流3小時至提取液無色,放冷,濾過,濾液置100ml量瓶中,用少量甲醇分數(shù)次洗滌容器,洗液濾入同一量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。精密量取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。
⑵文獻報道的HPLC法
文獻報道的用HPLC法測定柚皮苷的含量,所用的流動相系統(tǒng)一般為甲醇-醋酸-水或乙腈-醋酸-水系統(tǒng),檢測波長為283nm。現(xiàn)舉兩例如下:
楊燕軍等測定廣東蛇藥主藥柚葉中有效成分柚皮苷的含量。采用RP-HPLC法,固定相為Hypersi1 BDS C18(5 μm,4.6mm×250mm);流動相為甲醇-水-醋酸(35:61:4);流速為1.0mL/min;檢測波長為283nm;柱溫為室溫;進樣量為10μL。供試品溶液的制備:石油醚加熱回流1 h,傾出石油醚,揮干,分別加入95%乙醇40 mL,回流提取2次,每次1h,用少量乙醇洗滌柚葉殘渣3次,合并乙醇回流提取液及洗滌液,揮去乙醇,殘渣用熱水少量多次溶解,過濾于10mL容量瓶中定容;精密吸取3mL于10mL容量瓶中,用水定容,0.45μm微孔濾膜過濾,即得。
毛春紅等測定橘紅止咳露中柚皮苷的含量。采用HPLC法以乙腈-水-冰醋酸為流動相,色譜柱為Kromasil C18柱,流速為1.0mL/min,檢測波長283nm。柚皮苷線性范圍為120ng~1960ng,加樣回收率為98.00%,RSD=1.02%(n=9)。
也有用其它色譜條件的,如:郝明虹等測定氣滯胃炎顆粒中柚皮苷的含量。采用YWG-C18柱,流動相:乙腈-水(20:80)再用磷酸調(diào)pH=3.0,檢測波長230nm。柚皮苷的線性范圍為0.1624~1.624μg,r=0.9998,回收率為98.25%,RSD=1.1%。供試品溶液的制備:用水溶解樣品,濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液3~5ml,加在已處理好的聚酰胺柱(50~8O目,2g,內(nèi)徑1.8cm,濕法裝柱),先用30ml水洗脫。棄去水液。再用甲醇50ml洗脫,收集洗脫液并定容至50ml,搖勻,過0.5μm 的微孔濾膜,即得。
二、薄層掃描法
何夏秋等用薄層法鑒別與測定千金救心膠囊中柚皮苷的含量。自制0.3%的羧甲基纖維素鈉的硅膠G板,厚度0.5mm,110℃活化lh;氯仿-乙酸乙酯-甲醇=水(15:40 :22:10)10℃以下分層的下層溶液為展開劑,2%的三氯化鋁乙醇試液為顯色劑。掃描條件:狹縫寬度Slit=0.4×0.4mm,線性化參數(shù)Sx=3;測定波長為295nm, 參比波長為400nm。柚皮苷的線性范圍在1.18~7.08μg。李曉光等采用薄層掃描法測定化橘紅藥材中柚皮苷的含量。展開劑:甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸(2:2.5:5:0.5:0.5)。線性掃描,單波長254nm,光束狹縫6.00mm×0.45mm,靈敏度中等。柚皮苷的線性范圍在5~25μg。
三、分光光度法
梁寶英采用紫外分光光度法測定柚枳實中柚皮苷含量。;檢測波長284nm。柚皮苷在5.0~30.0μg/ml范圍內(nèi)濃度與吸收度呈良好的線性關系,回歸方程:C=31.81A-0.0004,r=0.9997;平均回收率:100.6%,RSD:0.67%。供試品溶液的制備:乙醇索氏提取回流提取1.5小時,溶液于水浴上蒸干,殘留物加乙醇使溶解后,過濾,棄去初濾液。精密吸取續(xù)濾液lml,置lOOml量瓶中,加乙醇至刻度,精密吸取lOml,置50ml量瓶中,加乙醇至刻度,即得。
五、其它
楊瑛等以苯甲酸鈉為內(nèi)標物,采用膠束電動毛細管電泳法測定柑橘屬藥材中柚皮苷和橙皮苷的含量。電泳條件:石英毛細管,直徑50μm,長度64.5cm,有效長度56cm;緩沖液pH-9.0、0.02mol/L 的硼砂,0.05mol/L 十二烷基硫酸鈉(SDS),10%的乙腈,電壓20kV;溫度25℃;檢測波長入=213nm;進樣量為10kPa.s。在上述條件下,各藥材中柚皮苷、橙皮苷及內(nèi)標物遷移時間分別為6.5、6.8和10.4min。柚皮苷在200~l000μg、橙皮苷10O~600μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好.樣品溶液的配制:化橘紅、佛手剪成極細條,陳皮、青皮、枳實、枳殼等粉粹成細粉,過篩,分別稱約0.5g,置于50 mL容量瓶內(nèi).加50%甲醇超聲提取30min,放冷至室溫,補充損失的溶劑,用0.45μm 微孔濾膜過濾,即得