蓽茇為胡椒科植物蓽茇Piper longum L.的干燥近成熟或成熟果實。2005《中國藥典》一部以胡椒堿為指標(biāo),二甲氨基苯甲醛為內(nèi)標(biāo),采用高效液相色譜法測定含量。文獻(xiàn)報道的方法基本上為高效液相色譜法。
一、高效液相色譜法
2005《中國藥典》蓽茇含量測定項下:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(77:23)為流動相,檢測波長為343nm。理論板數(shù)按胡椒堿峰計算應(yīng)不低于1500。
供試品溶液的制備:取本品中粉約0.25克,精密稱定,置100ml棕色量瓶中,加無水乙醇約80ml,超聲處理(功率250W,頻率20kHz)至少30分鐘,放置至室溫后,加無水乙醇至刻度,藥勻,濾過,取續(xù)濾液加內(nèi)標(biāo)溶液,搖勻,即得。
文獻(xiàn)報道的HPLC方法,采用的色譜條件基本上為藥典方法,現(xiàn)將實驗條件總結(jié)如下:
實驗儀器中較常用的HPLC儀為:
①FRANK-2000P 型高效液相色譜儀(配有色譜工作站),Kromasil C18色譜柱(4.6mm×200mm, 5μm) 大連依利特公司;
②Waters高效液相色譜儀,Nova-Pak C18柱(3.9×150mm,10μm)色譜柱;
供試品溶液的制備方法,常見的為采用超臨界CO2萃取法提取,也有有以無水乙醇、氯仿-濃氨試液等為提取溶劑,采用超聲法提取。
另外,韓文彬等采用一階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法測定蓽茇中胡椒堿的含量時,采用DP-A型微分脈沖極譜儀,實驗中將儀器功能置FDDPP處, 選用滴汞電極為工作電極, 滴汞間隔為16s;銀-氯化銀電極為參比電極, 內(nèi)裝110mol/LKCl參比溶液;微鉑電極為輔助電極, 以穩(wěn)定電極電壓, 使參比電極不受影響, 預(yù)置電壓為-0.160V, 掃描范圍為-0.16~-1.26V;電流靈敏度為5μA/V;掃描速度為100mV/s;脈沖振幅為40mV。蓽茇藥材取中粉,無水乙醇超聲處理后加入少許鹽酸。本方法是在差示脈沖極譜法基礎(chǔ)上建立起來的一種新技術(shù), 其特點是提高了方法的分辨率、分析速度和靈敏度, 基本上消除了空氣中氧的干擾, 不需事先通氮脫氧,用于蓽茇中胡椒堿的測試分析,簡便、經(jīng)濟、靈敏、快速,可做為胡椒堿的定性參考。
二、薄層掃描法
阿古拉等用雙波長薄層掃描法,對六味木香散中有效成分胡椒堿進(jìn)行含量測定。采用島津CS-9301 型雙波長薄層掃描儀(日本)。薄層展開條件:硅膠G板,展開劑為苯-醋酸乙酯-無水甲醇(8:2:0.5)。掃描條件:掃描方式為反射法鋸齒掃描,Sx=3 ,狹縫0.4×0.4mm,測定波長λs=335nm,參比波長λR=215nm。六味木香散以氯仿-氨水溶液為溶劑,浸漬提取。