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銀杏葉片含量測定方法

放大字體  縮小字體 發布日期:2008-01-17  來源:中國獸藥114網  作者:樂天  瀏覽次數:263

銀杏葉片為銀杏葉提取物經加工制成的片。
2005版《中國藥典》含量測定項下:
總黃酮醇苷
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)為流動相;檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計應不低于2500。
供試品溶液的制備:取本品10片,除去包衣,精密稱定,研細,取約相當于總黃酮苷19.2mg的粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇20ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率33kHz)20分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液10ml,置100ml錐形瓶中,加甲醇10ml,25%鹽酸溶液5ml,搖勻,置水浴中加熱回流30分鐘,迅速冷卻至室溫,轉移至50ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。
萜類內酯
色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以正丁醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動相;用蒸發光散射檢測器。理論板數按白果內酯峰計應不低于2500。
供試品溶液的制備:取本品10片,除去包衣,精密稱定,研細,取約相當于萜類內酯19.2mg的粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率33kHz)20分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液20ml,回收甲醇,殘渣加水10ml,置水浴中溫熱使溶散,加2%鹽酸2滴,用醋酸乙酯振搖提取4次(15ml,10ml,10ml,10ml),合并提取液,用5%醋酸鈉溶液20ml洗滌,分取醋酸鈉液,用醋酸乙酯10ml洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液,用水洗滌2次,每次20ml,合并水液,用醋酸乙酯10ml洗滌,合并醋酸乙酯液,回收至干,殘渣喲功能甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。
測定總黃酮苷含量時常用的流動相系統一般加入磷酸調節pH值,如:李芳等用HPLC法測定銀杏葉片劑中總黃酮苷的含量,采用Waters 高效液相色譜儀。色譜柱為 Spherisorb C18φ(100mm×4.6mm,5μm),檢測波長:370mm,流動相:甲醇-0.3%H3PO4 溶液(40:60),流速:1ml/min,柱溫:40℃。樣品用甲醇超聲處理。結果槲皮素在0.28~2.52μg之間線性關系良好,相關性顯著,平均加樣回收率為101.1%,RSD=2.69%。
測定黃酮含量時有采用HPLC法,也有紫外分光光度法,如:陶巧鳳等采用HPLC測定了11個制藥公司的15批銀杏葉片的黃酮(槲皮素 、山奈酚 、異鼠李素)的含量,采用Waters 高效液相色譜儀。色譜柱為Nova-pak C18(4μ) 200×4mm(大連化物所),流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液(1:1),檢測波長360nm,柱溫為室溫。樣品用甲醇超聲處理后,用4%硫酸溶液水解。丁青龍等用紫外分光光度法,以蘆丁為對照品測定銀杏葉片劑中總黃酮的含量,測定波長為500nm,樣品用70%乙醇回流提取。
測定內酯含量時,如:張雪琴等用HPLC法測定銀杏葉片中銀杏內酯的含量,采用HP1100高效液相色譜儀,色譜柱為Hypersil ODS2( 250mm×410mm, 5μm ),流動相:23%CH3OH水溶液,體積流量1.0mL/min,柱溫25℃。理論塔板數以銀杏內酯B計算不低于5000。樣品用5%雙氧水回流提取,濾過, 濾液用醋酸乙酯萃取多次, 萃取液用1%NaHCO3水溶液萃取多次后, 再用1%Na2SO3水溶液萃取, 醋酸乙酯層繼續用蒸餾水和5%NaCl溶液萃取,醋酸乙酯萃取液回收溶劑,用50%CH3OH定容。

 
 
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