摘要 目的：建立薄層掃描法分離測定荷葉中荷葉堿的含量。方法：采用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(30：40：20：10)為展開劑，檢測波長272 nm。結果：荷葉堿在0.5～5μg 范圍內呈現良好線性關系，平均回收率為97.4％，RSD=3.83％(n=5)。結論：該方法簡便準確，穩定性高，可作為其質量控制依據。
關鍵詞:薄層掃描法;荷葉堿;荷葉
荷葉為睡蓮科植物蓮Lelumbo nucifera Gaertn的干燥葉，具有清熱解暑、升發清陽、涼血止血之功效，現代藥理研究證明其具有調節血脂、鎮咳祛痰、降低血壓、平滑肌解痙等作用，臨床用于治療高脂血癥、肥胖、肺炎、夏季熱等癥。荷葉中的生物、堿成分具有明顯的降脂生理活性，但其含量測定方法尚未見報道，本文采用薄層掃描法，對其中的荷葉堿進行了定量分析，為更好地開發利用荷葉資源和完善提高荷葉質量標準提供參考。
1 儀器與試藥
CAMAG TLC SCANNER 3薄層掃描儀(瑞士CAMAG公司)；定量點樣毛細管(美國DrummondScientific Co．)；荷葉堿(中國藥品生物制品檢定所)；荷葉(市購三批，經本所鑒定)；硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)；試劑均為分析純。
2 薄層色譜及掃描條件
薄層板：0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板。展開劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(30：40：20：10)10℃以下放置12 h的下層溶液。紫外光254nm下定位，經光譜測定，確定λs=272nm。單波長線性掃描。此色譜條件下，荷葉堿與其他成分分離良好，色譜掃描圖見圖。
3 方法與結果
3．1 對照品溶液的制備
精密稱取荷葉堿對照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻。
3．2 供試品溶液的制備
精密稱取荷葉藥材粉末約1g，置索氏提取器中，加入濃氨水約1ml使潤濕，再加氯仿適量，回流提取至提取液無色，取氯仿液蒸干，殘渣加氯仿溶解定量轉移并至10ml量瓶中定容至10ml。
3．3 線形關系考察
用定量毛細管精密吸取對照品溶液0.5，1，2，3，4，5μl，分別點于同一用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板上，按上述層析及掃描條件測定，以斑點峰面積值為縱坐標，點樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=2.37×1000X+5.90×1000，r=0.9991，表明荷葉堿在0.5～5μg間線形關系良好。
3．4 穩定性試驗
精密吸取荷葉堿對照品溶液2μl，按上述條件點樣，展開，掃描，每隔30min測定1次，結果表明，斑點在5h內穩定(RSD=1.1％)。
3．5 精密度試驗
分別精密吸取荷葉堿對照品溶液2μl，在同一薄層板上點l0個點，展開，掃描，結果峰面積RSD=0.9％。
3．6 重復性試驗
取粉碎后混合均勻的荷葉樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備供試液，依法測定，結果RSD=1.2％。
3．7 回收率試驗
精密稱取已知含量荷葉樣品約0.5g，分別加入一定量的荷葉堿對照品，按上述方法提取并測定，計算回收率。
3．8 樣品測定
精密稱取荷葉樣品約1g，按供試液制備方法制備，分別精密吸取供試液5 l，對照品溶液2μl，4μl，點于同一薄層板上，按上述條件測定，外標兩點法計算含量。
4 討論
4．1 薄層掃描法測定生物堿含量，通常采用生物堿專屬顯色劑稀碘化鉍鉀試液顯色，但顯色后斑點的穩定性稍差，本文以熒光板(硅膠GF254)替代硅膠G板，在保證分離效果的同時，也解決了顯色穩定性的問題，可供其它生物堿檢測借鑒。
4．2 提取方法的選擇：曾試用甲醇或乙醇超聲處理法，同樣可得到較好的提取效果，考慮到堿性氯仿回流法為生物堿的一般提取方法，且索氏提取器具有良好的提取效率，故本文采用此方法。
4．3 薄層色譜系統的選擇：經篩選優化，結果以本文展開系統對荷葉中生物堿分離最好。展開后的薄層板噴以稀碘化鉍鉀試液驗證分離效果，得到的色譜軌跡與254nm紫外光下檢測到的相同。
4．4 由表看出，不同批次荷葉中荷葉堿的含量相差較大，其與產地栽培、采收加工、貯藏時間等因素間的關系，尚有待進一步考察。