摘要：使用梯度洗脫高效液相色譜法，當以有機溶劑與緩沖鹽作流動相時，應關注流動相的耐用性試驗研究。
關鍵詞：高效液相色譜法，梯度洗脫；流動相耐用性試驗
高效液相色譜(HPI C)在藥品檢驗中使用越來越普遍，尤其是在藥品的含量測定和有關物質檢查方面。隨著低壓四元梯度HPLC儀的出現，使流動相的調整優化更加方便、快捷，更容易實現儀器的自動化操作，因此逐漸成為高效液相色譜儀的主流配置，給使用者帶來極大的便利。許多流動相中往往含有緩沖鹽，當使用低壓四元梯度高效液相色譜儀，儀器按設定比例，由比例閥控制相應比例混合后，進行洗脫時，如果流動相沒有考察耐用性，有時可能會在閥后有鹽析出，且在到達柱前仍沒有溶解，這樣極易損壞活塞桿及堵塞柱子。實驗中，作者發現：鹽酸雷諾嗪有關物質檢查及含量測定使用HPI C法，流動相為0．68 磷酸二氫鈉(用三乙胺調pH 至6．5±0．1)溶液一乙腈(50：5o)，使用比例閥將緩沖液和乙腈分別泵送時，實驗不能正常進行。經查，是因0．68 NaH。PO 緩沖鹽濃度偏高，當閥后二相相遇時NaH：PO 便析出。為此做了以下試驗：分別配制濃度為0．68 和0．1 0A磷酸二氫鈉水溶液，并用三乙胺調pH至6．5±0．1；取具塞帶刻度離心管，分別按乙腈一磷酸二氫鈉(pH6．5± 0．1)溶液不同比例混合，觀察溶液的澄清度，溶液在黑背景下觀察，以蒸餾水為空白對照。結果如下表：從表中可以看到，兩相相遇時，開始都出現渾濁；充分振搖后，有機相乙腈比例低的流動相可溶解至澄清，但當緩沖鹽的濃度偏高，即使振搖，析出的鹽也不可能完全溶解。另外，即使預先將兩相混合振搖后溶液澄清，但若緩沖鹽的濃度太高，如果使用低壓梯度泵分別泵送，有可能出現流動相混濁現象，而此時又不能被發現，此溶液進入到柱子中，輕者色譜圖會出現怪峰，實驗無法正常進行，嚴重時會堵柱子。通過上述討論，作者認為，在質量標準中建立HPI C方法時，應注意：
1．在優化流動相組成時，盡可能降低緩沖鹽濃度。
2．不同的實驗室，試驗條件有所差異，且柱子牌號不同，可能需要調整質量標準中規定的流動相的比例(這在質量標準中是允許的)。因此建議在耐用性實驗時，必須對緩沖鹽濃度在一定范圍內的變化對流動相澄清度的影響等色譜耐用性進行考察。
3．等度洗脫時，應預先將流動相混合好，并經脫氣后再使用。