提要 列舉了不同制劑中黃連、黃連素薄層層析(TLC)鑒別方法及條件,為令后在制劑中有效成分黃連青的分析及測定提供參考。
黃連來源于毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖。性苦寒,歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經,為常用清熱燥濕、瀉火解毒藥。黃連古多種生物堿成分,黃連索為其重要的化學成分之一。TLC鑒別方法在中藥制劑中常用于黃連的定性
檢驗,但因中藥劑型與制劑較多,黃連應用廣泛,定性檢測方法也有不同,為了便于查閱與選擇.覡將黃連索的TLC鑒別方法及條件選擇摘錄如下。
1 方法
取黃連粉束50mg.加甲酵5ml,承褡回流15min,濾過,濾液補甲酵使成5 ml.供試.鹽酸小檗堿對照品制成量含0.5 mg/ml的溶液。點樣各1μL,以葷-醋酸乙酯-甲酵-異丙酵-水(6:3:1.5 : 1.5: 0.3)為展開劑.并置蒸氣飽和的層析缸內展開.紫外燈(365nm)下,檢視黃連、黃連素的黃色黃光斑點。
取黃連養肝丸10g.剪碎,加硅藻土15g.研碎,加甲酵30ml,濾過,濾液作供試品溶液。另取黃連藥材O.1g,加甲酵l0ml,超聲處理15min,濾藏為對照藥材溶液。上兩種溶液各點樣l0μL于硅膠G 薄層板上,以苯-醋酸乙醇:甲酵:異丙酵-濃氨試藏(12:6:3:31)為展開劑.置氨蒸氣預飽和15min的層析缸內展開,置紫外燈(365nm)下.檢視與對照藥材色譜相應位置上的黃色熒光斑點.
取小兒暑感寧糖漿3O m1.用乙酸乙醇萃取2次,20 ml/次,合并萃取液,揮干,殘渣加O.5 ml溶解為供試液。另取鹽酸小檗堿加乙醇制成含量lmg/ml的溶藏.為對照品液。取樣品液5μl,對照品藏1~2μl.點于同一硅膠G薄層板上,以正丁酵-冰醋酸-水(7:l:2)為展開劑展開,置紫外光燈(365nm)下觀察,用于檢視黃連、鹽酸小檗堿(黃色熒光斑點)。
取葛根芩連膠囊2粒.加術l00 ml,煮沸30min,濾取上清液l0ml.水浴蒸干,殘留物用5ml甲醇溶液濾過,得供試品液。取黃連素以甲醇配制lmg/ml的溶液為對照品藏。用硅膠G-CMC板.以乙酸乙酯-丁酮-醋酸-水(10:7:5:3)為展開劑展開,噴以改良碘化鉍鉀溶被.置紫外燈(365nm)下觀察,以檢視黃連、黃連素黃綠色熒光斑點。
取復方黃連索片5片.去糖衣研細,取粉末約1g,加甲酵索氏提取至近無色.為供試品液。另取鹽酸小檗堿配成l mg/ml的溶液為對照品溶液。兩溶被各取2μl點于硅膠G-CMC扳上,以正丁醇-冰醋酸-水(7:l:2)為展開劑,日光下檢視黃連、鹽酸小檗堿(黃色斑點):紫外燈(254nm或365nm)下檢視小檗堿(黃綠色熒光斑點) 。
取香連九60mg,研碎,加甲醇5ml,水浴加熱提取15min濾過.濾液補加甲醇使成5ml為供試藏。另取小檗堿以甲醇制成O.5 mg/ml的溶液為對照品液。各點樣lμl于同一硅膠G薄層板上,以苯-醋酸乙醇-甲酵-異丙酵-濃氨試液(6:3 :1.5 :1.5:O.5)為展開劑展開,置紫外燈(365nm)下觀察,檢視黃連、小檗堿(黃色熒光斑點)。
取導赤丸l丸,剪碎,加硅藻土1g,研勻,置具塞三角瓶中.加甲醇lOml冷浸lh,濾過,濾液為供試品液。另取鹽酸小檗堿以甲醇配成每O.5 mg/ml的溶液為對照品溶液 點樣品液2~ 3μl,對照品液10μl于同一硅膠G 薄層板上,以正丁醇-冰醋酸一水(7:1:2)為展開劑,展開.置紫外燈(365nm)下觀察,檢視黃連中小檗堿(黃色斑點)。
取朱砂安神丸10g,8O℃下干燥,研細,加乙醇回流lh.濾過,濾液濃縮至lml.為供試品液。另取鹽酸小檗堿,用適量乙醇溶解,點樣2μl于同一硅膠G薄層板上,以正丁酵-36% 醋酸-水(7:2:1)為展開劑展開,于紫外燈(254nm)下觀察,用于檢視黃連中小檗堿(黃綠色熒光斑點)。
取黃連解毒湯粉末4.5g置錐形瓶中,加木30ml,加熱30min,濾過,濾液蒸干殘渣加甲醇2Oml溶解,作供試品藏。取黃連藥材2g,置錐形瓶中,以下同上述方法制備對照藥材溶藏。吸取上述各濾液lOμ1,點于同一硅膠GF254.薄層板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7:2:1)為展開劑展開.于紫外燈(254nm)下觀察,用于檢視黃連中小檗堿(黃綠色熒光斑點)。
取黃連解毒湯粉末4.5g置錐形瓶中,加水30ml加熱3Omin,濾過.濾液蒸干殘渣加甲醇2Oml溶解,作供試品藏。取黃連藥材2g,置錐形瓶中,以下同上述方法制備對照藥材溶液。吸取上述各溶液l0μ1,點于同一硅膠GF254.薄層板上.以正丁醇-冰醋酸-水(7:l:2)為展開劑展開,置(365nm)紫外燈下,檢視黃連中的黃色熒光斑點。
薄層層析法l將樣品的甲酵提取液點于硅膠G板上.以苯-乙酸乙醇-甲醇-異丙醇濃氨試液(12:6:3:3:1)展開,(須先用氨蒸汽飽和),紫外燈(365nm)下檢枧,黃連、小檗堿呈黃色熒光斑點。
薄層層析法2 將樣品的甲酵提取藏點于硅膠G板上,以氯仿-甲醇-氨水(15:4:1)展開,天然光下小檗堿呈黃色,紫外光(254 m)下顯亮黃綠色斑點。用改良碘化鉍鉀試藏顯色,斑點顯紅色 。
2 小結
綜上有關黃連的TLC方法及條件,可見制劑不同,方法有別在應用中.可根據實際狀況及所具備的條件,進行取樣、展開劑等靈活選擇。使TLC方法更方便的為黃連質量檢測服務,使中藥質量跨上新的臺階。