薄層色譜法(thin layer chromatography簡寫TLC)是一種物理化學(xué)的分離技術(shù)，常用于藥物的分離與分析。現(xiàn)對此方法的分析步驟及注意事項(xiàng)提點(diǎn)建議。
完成TLC分析通常需經(jīng)制板、點(diǎn)樣、展開、檢出4步操作。

⑴制板
在一平面支持物(通常為玻璃)上，均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測就在此薄層色譜板上進(jìn)行。
一般選用適當(dāng)規(guī)格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規(guī)格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱取適量硅膠，加入0.2％～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na），充分?jǐn)嚢杈鶆颍M(jìn)行制板。一般來說10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅膠/塊；硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平臺上，注意防塵。在空氣中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放涼，并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視，薄層板應(yīng)無花斑、水印，方可備用。

⑵點(diǎn)樣
用微量進(jìn)樣器進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣前，先用鉛筆在層析上距末端lcm 處輕輕畫一橫線，然后用毛細(xì)管吸取樣液在橫線上輕輕點(diǎn)樣，如果要重新點(diǎn)樣，一定要等前一次點(diǎn)樣殘余的溶劑揮發(fā)后再點(diǎn)樣，以免點(diǎn)樣斑點(diǎn)過大。一般斑點(diǎn)直徑大于2mm，不宜超過5mm.底線距基線1～2．5cm，點(diǎn)間距離為lcm左右，樣點(diǎn)與玻璃邊緣距離至少lcm，為防止邊緣效應(yīng)，可將薄層板兩邊刮去1～2cm，再進(jìn)行點(diǎn)樣。

⑶展開
將點(diǎn)了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中，由于毛細(xì)管作用，展開溶劑在薄層板上緩慢前進(jìn)，前進(jìn)至一定距離后，取出薄層板，樣品組分固移動(dòng)速度不同而彼此分離。
① 展開室應(yīng)預(yù)飽和。為達(dá)到飽和效果，可在室中加入足夠量的展開劑；或者在壁上貼兩條與室一樣高、
寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂?shù)纳w。
② 展開劑一般為兩種以上互溶的有機(jī)溶劑，并且臨用時(shí)新配為宜。
③ 薄層板點(diǎn)樣后，應(yīng)待溶劑揮發(fā)完，再放人展開室中展開。
④ 展開應(yīng)密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放入展開室時(shí)，展開劑不能沒過樣點(diǎn)。一般情況下，展開劑浸入薄層下端的高度不宜超過0.5cm。
⑤ 展開劑每次展開后，都需要更換，不能重復(fù)使用。
⑥ 展開后的薄層板用適當(dāng)?shù)姆椒ǎ谷軇]發(fā)完全，然后進(jìn)行檢視。
⑦ Rf值一般控制在0.3～0.8，當(dāng)Rf值很大或很小時(shí)，應(yīng)適當(dāng)改變流動(dòng)相的比例。

⑷ 斑點(diǎn)的檢出
展開后的薄層板經(jīng)過干燥后，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點(diǎn)。對于無色組分，在用顯色劑時(shí)，顯色劑噴灑要均勻，量要適度。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。
展開分離后，化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來表示。化合物斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離與溶劑前沿至原點(diǎn)的距離的比值就是該化合物的Rf值。