摘要：考察了填充柱超臨界流體色譜法(SFC)中的樣品溶劑及連續進樣等因素對化音物懾留行為變化的影響規律。 以超臨界C02或者低體積分散甲醇的CO2為流動相時，氨基柱上組分的保留時間隨著樣品溶劑的極性增大而增大，而溶劑對CO2柱上組分的保留時間影響不大；在CO2柱上，溶劑對連續進樣的后續效應不強，而在氨基柱上，甲醇溶液的后續效應比丙酮、氧仿溶液的后續教應強 當甲醇的體積分數大于1.0%時，溶劑的效應明顯減弱，這種變化規律對填充柱SFC的合理進樣并獲得重現性良好的色譜數據具有實際意義。
關鍵詞：超臨界流體色譜法；溶劑效應；填充柱
1 前言
在超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography，SFC)中最常用的流動相是CO2或含少量改性劑(如甲醇)的CO2，填充桂SFC采用硅膠、氨基、氰基、二醇基鍵臺相等填料作固定相．選使填充柱SFC成為一種正相色譜方法。正相色譜存在著選擇性、分離度等色譜參數對流動相中改性劑的含量敏感(因此重現性相對較差)、柱平衡體積大(約300～1000倍的桂體積)。時間長等缺點，這些在填充柱SFC中也有所體現，一般認為選是因為樣品溶劑或改性劑(通常是甲醇)吸附在固定相表面形成一層液膜，或者改性劑覆蓋了固定相表面的活性點位，成為固定相的一部分，而這層“準”固定相不易洗脫下來所造成的。有時即使表面上所有的組分都已洗脫。但在用1O～ 2O倍柱體積的流動相沖洗后，溶劑的殘余效應仍然存在。這就對樣品溶劑的選擇、后續進樣的時間把握提出了較高的要求。
本文考察了進樣溶劑、連續進樣、流動相中的改性劑用量．色譜拄類型等因索對化臺物保留行為變化的影響規律，為填充拄SFC的合理進樣并產生可信的色譜結果提供依據。
2 儀器與試劑
超臨界流體色譜儀配置有100DM 注射泵、泵控制器．Eppendorf柱加熱器、V4 MWD紫外檢測器(ISCO，NE，USA)。本室設計的井聯裝置 在線添加改性劑。
150mm×1mm i．d．，3μm的Spherlsorb氨基，C18拄(Alltech，USA)，Valco進樣閥(定量環0.5μL)，40cm×15 μm i．d．石英毛細限流管。甲苯、間氟甲苯、氯苯、對二甲苯、對氯甲苯、氯芐為AR級，補骨脂索對照品購自中國藥品生物制品檢定所。SFC級CO2購自上海比歐西氣體有限公司，甲醇、丙酮。氯仿均為色譜純。
3 結果和討論
氯苯、對二甲苯等化臺物的甲醇、丙酮、氯仿溶液在C18和氨基色譜柱上，以CO2為流動相得到的保留時間。可知。在C18柱上，不同的溶劑對組分的保留時間影響并不太；而在氨基柱上。組分的保留時間隨著溶劑的極性增大而增大。選是因為授性溶劑與氨基柱上的活性點位之間的作用比C18柱的作用強，因此甲醇的覆蓋作用最大，經覆蓋后固定相與組分之間的作用就最弱．保留時間就最小，而選種作用在C18柱上不明顯。圖中沒有列出氯芐的保留時間，相應條件下氯芐在30min內不洗脫。
選種覆蓋效應可以通過連續進樣方式下的保留時間變化來驗證。表列出了氯苯的甲醇、丙酮和氯仿溶液在首次進樣分別間隔5，10，15min后再次進樣所得的保留時間 (色譜條件同圖)。在C18柱上，溶劑對連續進樣的后續效應不強}在氨基柱上。丙酮、氯仿的后續效應也不強，但甲醇的后續效應較強。由于甲醇暫時覆蓋了固定相表面的活性點位，間隔5，10min進樣時，氯苯的保留時回分別比首次進樣縮短了0.35與0.14min。以流速0.08mL／min、色譜柱體積0.12mL×[π×(0.05cm)2×15cm≈0.118cm3]計算．首次進樣約15min后，即流過10(O.08mL／min×15min÷0.118mL≈1O倍)體積的流動相后，這種覆蓋效應基本清除，也就是說對后續進樣沒有影響。這種效應對太置樣品測定時的重現性有一定影響，需要注意并避免。
溶劑的覆蓋效應在以純CO2作流動相時比較明顯，但加入一定置的改性劑(通常是甲醇)后，由于改性劑本身就對固定相存在持久的覆蓋效應，因此溶劑以及連續進樣對組分的保留時間影響較小。補骨脂紊的甲醇溶液連續進樣的色譜圖可知，間隔時間較短的第2次進樣，組分的保留時問提前較多(間隔10min，提前0.73min)，反之較少(間隔20min，提前0.4min)。也就是說，即使整個樣品(包括溶劑、樣品)在10min內都已洗脫完，但溶劑的覆蓋效應仍將持續一段時間 當有了足夠的間隔時間(>10倍柱體積的流動相流過后)，則恢復到首次進樣的效果。當甲醇的體積分散太于1.0%時，不同溶劑引起的溶劑效應以及連續進樣時的覆蓋效應都減弱，幾乎可以忽略不計。
4 結論
在填充柱SFC中，以純CO2或含少量(<1.0%)甲醇的CO2作流動相時，由于存在溶劑的覆蓋效應，故應合理選擇溶劑及進樣時間間隔。改性劑濃度較高時，這種效應可以忽略不計。本實驗結果對獲得良好的色譜數據，尤其是良好的重現性具有實際意義。