1780年意大利學者斯帕蘭滋尼用19克精液給母犬輸精,62天產出了3只小犬,揭開了動物人工授精的序幕。而后犬的人工授精并沒有得到充分認知。直到20世紀后期,人們為了充分利用優良犬的遺傳性狀,解決公母犬體型大小差異較大,以及犬的擇偶性較強,而產生的犬的繁殖障礙,逐漸開始重視犬的人工授精技術。
根據我們多年對犬人工授精的實踐與研究,現將犬人工授精技術歸納如下。
1 采精前的準備
1.1 操作室
操作室由采精室和精液處理室組成。一般采精室和精液處理室為相鄰的兩個小屋。各占15m2~20m2,外室為采精室,內室為精液處理室,要求清潔、干燥、明亮,室溫應為20℃左右。
1.2 儀器設備
1.2.1 輸精器材:鮮精可用注射器連接塑料輸精管輸精,也可將牛用塑料輸精導管折半或應用羊用輸精管。
1.2.2 其它儀器設備:煮沸消毒器、高壓滅菌器、蒸餾器、集精杯、輸精器、開膣器、冰箱、恒溫箱、顯微鏡、消毒器、溫度計等。
1.3 試劑
檸檬酸鈉、果糖、甘油、雞蛋、青霉素、鏈霉素等。
1.4 器械及人員的準備工作
器械使用前后應進行清洗、消毒。操作人員在操作之前應將指甲剪短、磨光,操作時應戴一次性手套。
2 采精
2.1 按摩采精
2.1.1 采精犬應選擇健康、無疾患、遺傳性穩定的公犬,防疫應符合GB/T893的規定。
2.1.2 保定公犬。
2.1.3 采精前用經0.1%~0.2%新潔爾滅溶液浸泡的毛巾拭擦被采精犬的腹部和會陰部。
2.1.4 采精方法
手握采精法:采精操作者一手握住犬的陰莖球部,并用手掌以脈沖式按壓球部刺激公犬射精,另一只手拿帶有刻度玻璃管收集精液。
假陰道法采精:首先通過包皮按摩陰莖。當犬的陰莖變硬并暴露以后,將人工陰道套在陰莖球上。操作者的一只手放在公犬兩后肢之間,使人工陰道緊圍在陰莖球上方,另一只手持37℃~38℃集精杯接取第二段射出的精液。
2.1.5 采出的精液應立即送到精液處理室,并放在37℃~38℃溫水中待檢。
2.1.6 采精后,將公犬放于檢查室內,牽公犬慢步行走,使陰莖回縮到包皮鞘內。
2.2 采精頻率
種公犬應每隔4d采精1次,并根據公犬的實際體況靈活掌握。
3 精液品質檢查
3.1 射精量
從犬集精杯上的刻度直接讀取。
3.2 氣味及色澤
犬正常精液應為無味或微腥,呈乳白色。
3.3 精子活力
犬精子活力檢查采取10分制方法。即100%精子呈直線前進運動評1級,90%精子直線前進運動評0.9級,以此類推。新鮮精液精子活力應≥0.7;液態保存精液精子活力≥0.6。
4 精液處理
4.1 配制稀釋液
4.1.1 盛裝稀釋液的用具洗凈、消毒。
4.1.2 準確稱量稀釋用的藥品并過濾。
4.1.3 稀釋液現用現配。
4.1.4 配制卵黃稀釋液先用70%酒精棉消毒,輕輕用鑷子打開卵殼氣室端,將卵清吸出,然后用注射器刺破卵黃膜,吸取卵黃,按需要量加入20℃~40℃稀釋液中,最后加入抗生素。配制含卵黃的稀釋液,應在無菌情況下冷卻到20℃~40℃時加入卵黃。
4.2 操作要求
4.2.1 稀釋液和精液等溫稀釋。
4.2.2 稀釋時應將稀釋液緩緩沿壁倒入精液杯,輕輕搖晃,混合均勻。
4.3 稀釋液
采用以下稀釋液效果較好:Tris:2.4%;檸檬酸黃:1.3%;果糖:1%;甘油:6.4%;卵黃:20%;青霉素、鏈霉素:各50萬IU。
5 母犬發情鑒定
5.1 外部觀察法
發情前期陰唇腫大,橫徑增大,此時觸診,深部較硬,至發情時變柔軟。在排卵前陰唇橫徑急劇縮小,之后再度增大和再度縮小。當陰唇橫徑再次縮小時,即是排卵時間。在發情前期,母犬陰道內流出血樣黏液,最初流出較少且比較稀薄,以后逐漸增多,到發情期血量減少,顏色變淡,應及時輸精。
5.2 試情法
如母犬接受公犬聞、嗅等調情活動,公犬爬跨時母犬站立不動,將尾歪向一側,接受公犬交配,就是發情的象征,可以輸精。試情后應及時將公母犬分開。
6 輸精
6.1 輸精方法
助手固定母犬頭頸,將母犬后軀提高與地面成60º。尾拉向一側,暴露陰門,食指和輸精管上涂少量潤滑劑,將食指插入陰道(小犬用小手指),翻轉食指并到達骨盆緣。將輸精管沿食指插入陰道,遇阻時,將輸精管后退4cm~6cm,調整角度后再推入。輸精深度大犬為25cm~30cm,中等犬為20cm~25cm,小型犬為15cm~20cm。然后將輸精管從陰道內抽出,輸完精后應將母犬的后軀繼續抬高5min~6min。
6.2 輸精量
液態精液輸精有效精子數應為0.5億~1.0億。
6.3 輸精次數
母犬發情旺期進行第1次輸精,24h后進行第2次輸精。
在犬的人工授精過程中,應嚴格按照以上操作規程,作好每個環節的工作,才能獲得較好的效果,提高受精率。