摘　要：用低毒力新城疫病毒LaSota株作為復合物疫苗抗原，與新城疫特異性中和抗體混勻配制了不同比例的8種復合物疫苗，用1日齡SPF雛雞進行免疫效果試驗。試驗1組～8組分別免疫復合物疫苗1～8，試驗9組免疫常規新城疫活疫苗，試驗10組為空白對照組。免疫后3周采血測定HI抗體效價，同時用新城疫強毒北京株F48E9攻擊。試驗1組～10組HI抗體效價分別為2^3.6、2^3.1、2^2.3、2^4.13、2^4.85、2^5.0、2^5.0、2^4.5、2^5.1、2^2.14。攻毒后1組～10組雞的死亡率分別為30%、50%、90%、10%、0%、0%、0%、0%、0%、100%。結果表明，低毒力新城疫病毒LaSota株與特異性抗體制備的復合物疫苗，可以減輕疫苗的毒副作用，提高疫苗的安全性，其免疫效果比常規活苗好。

關鍵詞：新城疫病毒；La Sota毒株；抗原抗體復合物疫苗；免疫效果

雞新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的雞呼吸道、消化道黏膜出血為典型病變的一種急性、高度接觸性及致死性傳染病。該病自1926年首次發現以來，已在全球許多國家傳播，目前已成為危害養雞業的主要疾病之一^[1]。在現有商品化新城疫疫苗的基礎上，更安全更高效的新疫苗一直是禽病研究的重要方向。20世紀60年代，研究人員發現特異性抗體可提高破傷風類毒素對小豬的免疫原性^[2]；20世紀90年代初，國外研究者研究豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒時，偶然發現病毒特異性抗體與抗原混合在一起免疫動物時能增強抗原的免疫原性，由此誕生了一種新的疫苗研制技術^[3]。目前利用該技術成功研制了雞傳染性法氏囊病病毒抗原抗體復合物疫苗，用于1日齡雛雞和18日齡胚卵內接種，該疫苗還可與其他胚胎接種產品混合使用(如馬立克病活毒疫苗)，并不影響同時接種疫苗的效果^[4-6]。抗原抗體復合物疫苗中抗體主要作用是延緩病毒的釋放，其優點在于安全性高和免疫效果比常規疫苗更好^[6-7]。本試驗以低毒力的NDV-LaSota株病毒作為抗原，通過試驗摸索其中抗原和抗體的最佳比例，配制新城疫抗原抗體復合物疫苗，并將其與常規ND活疫苗在安全性和免疫效果等方面進行比較。

1　材料與方法

1.1　制苗用毒種和攻毒用毒種

低毒力新城疫La Sota株，毒價為10^9.0EID₅₀/0.1 mL；雞新城疫強毒北京株F48E9，毒價為10^8.3ELD₅₀/0.1 mL，由北京市農林科學院畜牧獸醫研究所免疫與預防研究室保存。

1.2　SPF雞胚和1日齡SPF雛雞

由北京市實驗動物中心購進SPF種蛋和1日齡SPF雛雞，SPF種蛋在北京市農林科學院畜牧獸醫研究所研究室自行孵化至所需胚齡。

1.3　抗原的制備

低毒力新城疫La Sota株種毒用滅菌生理鹽水作10萬倍稀釋，經尿囊腔接種10日齡SPF雞胚，收獲72 h～120h的死胚尿囊液，低速離心后取上清分裝凍存于－30 ℃。經檢驗，制備的病毒抗原無菌，HA效價為2⁹，毒價為10^9.0EID₅₀/0.1 mL。

1.4　抗體的制備

用1.3制備的抗原配制油乳劑滅活疫苗免疫3周齡SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔3周，最后1次免疫3周后用活毒加強免疫1次，2周后心臟無菌采血分離血清，初步得到的血清首先在56℃水浴30 min滅活補體，在4 ℃以5 000 r/min離心10min，吸取淡黃色上清液作為制備疫苗的抗體。經檢驗，制備的抗體無菌，HI效價為2¹⁰，中和抗體為1∶512。

1.5　抗原抗體復合物疫苗的配制及檢測

固定每羽份抗原含量為10^6.0EID₅₀，分別加入不同量的抗體，在室溫下混勻中和，配制抗原抗體復合物疫苗，抗原與抗體的體積比分別為3∶1/4、3∶1/2、3∶1、3∶2、3∶4、3∶8、3∶12、3∶16，配制成復合物疫苗1～8，加入凍干保護劑后充分混勻，真空凍干。制備的抗原抗體復合物每頭份所含的抗原量與常規新城疫LaSota活苗所含的抗原量一樣，凍干疫苗用滅菌生理鹽水還原體積后，HA試驗測定疫苗血凝價，并按常規方法測定疫苗的EID。

1.6　免疫效力試驗

1日齡SPF雛雞200只分成10組，每組20只，分別飼養于隔離器內。第1組至第8組分別經頸部皮下接種復合物疫苗1～8；第9組免疫新城疫LaSota常規活疫苗；第10組是空白對照組。免疫后觀察記錄雞的疫苗反應情況，3周后采血檢測新城疫HI抗體水平，測得的HI數據以2^x表示，各組的HI效價為HI值的幾何平均數。

1.7　攻毒試驗

免疫接種3周后，用雞新城疫強毒北京株F48E9進行攻毒試驗，胸部肌肉注射，攻毒劑量每只為10^4.0ELD₅₀，攻毒后觀察2周，記錄雞群的發病癥狀和死亡情況，并剖檢觀察病死雞的病理變化。

2　結果

2.1　抗原抗體復合物的效價檢驗

用制備的抗原和抗體配制了8種不同比例的凍干復合物疫苗，凍干疫苗用滅菌生理鹽水還原體積后測定HA效價和EID₅₀。經試驗測定，與含10^6.0EID₅₀抗原的一羽份活苗相比，隨著復合物疫苗中抗體比例的增加，復合物疫苗的HA效價逐步也由2⁶變為0，毒價從10^6.0EID₅₀/0.1 mL下降至10^2.7EID₅₀/0.1 mL。

2.2　免疫試驗的結果

2.2.1　疫苗免疫后雞群的臨床癥狀　1組～8組雞接種復合物疫苗后均無任何反應，采食飲水正常；第9組雞接種疫苗后，有3只雞出現新城疫癥狀，表現有精神萎頓，羽毛松亂，輕微喘氣甚至張口呼吸，排青綠色稀糞，3d～4 d后癥狀消失；第10組雞一直保持健康，說明隔離器運轉正常。

2.2.2　疫苗免疫后雞群的HI抗體效價　免疫后3周測定HI抗體效價，試驗1組～10組HI抗體效價分別為2^3.6、2^3.1、2^2.3、2^4.13、2^4.85、2^5.0、2^5.0、2^4.5、2^5.1、2^2.14。試驗結果提示疫苗免疫組HI抗體水平的變化與疫苗中的抗體含量密切相關，隨著抗體的增加，疫苗效力先降低，疫苗免疫產生的抗體水平逐漸下降，直至完全中和時抗體水平降至2^2.3；抗體進一步增加，疫苗效力又開始回升，抗體水平逐步上升，并在一個范圍內維持最高水平，疫苗效力最好，這時疫苗與常規活苗的抗體水平相當；當超過這個范圍，疫苗效力又由于抗體過量開始下降。試驗10為空白對照組，HI抗體效價一直維持在2²左右，說明隔離器運轉正常，雞群沒有受到外來新城疫病毒的感染。

2.3　攻毒后各組雞發病和死亡情況

試驗1、2、3、4、10組在攻毒后第3天和第4天，雞出現新城疫發病癥狀，在觀察期內，第1組發病7只，死亡6只；第2組發病12只，死亡10只；第3組發病19只，死亡18只；第4組發病2只，死亡2只；第10組為空白對照組，攻毒后7d內全部發病死亡。剖檢死雞，病程急發病快的多無典型新城疫病變，病程長的死亡雞則呈現為典型的新城疫病變(表1)。

表1　試驗雞免疫后3周用新城疫強毒北京株F48E9攻毒試驗結果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　討論

抗原抗體復合物疫苗是一種新型疫苗，當抗原與抗體混勻結合后，抗體能保護活病毒免受機體免疫系統的攻擊，同時延緩病毒釋放。制備抗原抗體復合物疫苗的關鍵是抗體和抗原的最佳復合比例，PokricB等^[10]認為，抗原抗體復合物中抗原和抗體的比例對復合物疫苗效果最為重要，復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，抗原稍過量或抗原抗體等價，復合物才能產生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通過固定抗原含量為10^6.0EID₅₀/羽份，逐步增加抗體的量配制了8種不同比例的抗原抗體復合物疫苗，免疫1日齡SPF雛雞3周后攻毒，測定了HI抗體效價，并分析了各組免疫雞的發病和死亡情況。試驗結果表明，復合物疫苗中抗體太少，降低了疫苗的免疫效力，隨著抗體的增加，配制的疫苗效力逐漸降低，最后幾乎達到了不免疫無抗體水平；抗體進一步增加，疫苗效力又開始逐步升高，并在一定范圍內維持高效力水平；當抗體再增加時，疫苗由于含有過多的抗體其效力再次出現下降。當抗原抗體比例在3∶4至3∶12之間，即復合物疫苗5、6和7免疫雞后能產生較高的抗體水平，免疫效力最好，抗體滴度比較均一，攻毒保護率達到100%，疫苗毒價在10^3.2EID₅₀/0.1mL～10^3.5EID₅₀/0.1mL之間，HA效價均為0。

復合物疫苗免疫的雞群中，第1、2和3組分別有1或2只雞發病最后沒有死亡，但表現出神經癥狀，如歪脖，頭部震顫等癥狀，推測發病雞雖有抗體但不能完全保護強毒的攻擊，耐過后有新城疫神經后遺癥。復合物疫苗5、6和7對1日齡SPF雛雞免疫產生的抗體水平與常規活苗免疫的相當，并且抗體水平比較均勻，對強毒攻擊都能提供100%的保護，但常規活苗免疫1日齡SPF雛雞時伴有疫苗反應，雛雞較弱可導致雞只的死亡，而復合物疫苗對雛雞沒有明顯的毒副作用，接種1日齡SPF雛雞不受任何影響。試驗結果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相應的特異性抗體按一定比例和一定的感作時間混勻結合后，可以明顯降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同時，提高了疫苗的安全性。

目前，雞傳染性法氏囊抗原抗體復合物疫苗已成功應用于市場，在防控商品雞傳染性法氏囊病發揮了重要作用。使用抗原抗體復合物疫苗可增強家禽的免疫反應，加強保護性免疫，但其作用機理仍不十分清楚，一般認為抗原抗體復合物疫苗的作用機制與復合物能直接與濾泡樹突狀細胞(FDC)結合的特異能力有關^[11-12]。Jeurissen H M等^[13]調查了IBD復合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情況，結果表明，接種疫苗后，免疫復合物與FDC結合后可長時間滯留在細胞表面，FDC不能內化復合物，因而疫苗中的活病毒也得到保護，可以免受淋巴細胞的攻擊。但部分傳染性病毒被FDC轉運至淋巴結并定居，在淋巴結內誘導產生更多的生發中心，使得疫苗病毒復制的效率更高。由于復合物疫苗中抗體分子Fc片段與APC的Fc受體有很高的親合性，因而使得與疫苗中病毒更易更有效地與APC結合。復合物易被APC吞噬和內化，因而病毒不會被殺滅，且還能復制，最后激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫反應和細胞免疫應答。本試驗的結果也顯示，當復合物疫苗中抗原抗體在恰當比例時，接種后機體也能產生高水平的抗體，雖然其獨特的作用機制與常規活苗的不一樣，但復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較常規活苗更好。

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試驗1、2、3、4、10組在攻毒后第3天和第4天，雞出現新城疫發病癥狀，在觀察期內，第1組發病7只，死亡6只；第2組發病12只，死亡10只；第3組發病19只，死亡18只；第4組發病2只，死亡2只；第10組為空白對照組，攻毒后7d內全部發病死亡。剖檢死雞，病程急發病快的多無典型新城疫病變，病程長的死亡雞則呈現為典型的新城疫病變(表1)。

表1　試驗雞免疫后3周用新城疫強毒北京株F48E9攻毒試驗結果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　討論

抗原抗體復合物疫苗是一種新型疫苗，當抗原與抗體混勻結合后，抗體能保護活病毒免受機體免疫系統的攻擊，同時延緩病毒釋放。制備抗原抗體復合物疫苗的關鍵是抗體和抗原的最佳復合比例，PokricB等^[10]認為，抗原抗體復合物中抗原和抗體的比例對復合物疫苗效果最為重要，復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，抗原稍過量或抗原抗體等價，復合物才能產生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通過固定抗原含量為10^6.0EID₅₀/羽份，逐步增加抗體的量配制了8種不同比例的抗原抗體復合物疫苗，免疫1日齡SPF雛雞3周后攻毒，測定了HI抗體效價，并分析了各組免疫雞的發病和死亡情況。試驗結果表明，復合物疫苗中抗體太少，降低了疫苗的免疫效力，隨著抗體的增加，配制的疫苗效力逐漸降低，最后幾乎達到了不免疫無抗體水平；抗體進一步增加，疫苗效力又開始逐步升高，并在一定范圍內維持高效力水平；當抗體再增加時，疫苗由于含有過多的抗體其效力再次出現下降。當抗原抗體比例在3∶4至3∶12之間，即復合物疫苗5、6和7免疫雞后能產生較高的抗體水平，免疫效力最好，抗體滴度比較均一，攻毒保護率達到100%，疫苗毒價在10^3.2EID₅₀/0.1mL～10^3.5EID₅₀/0.1mL之間，HA效價均為0。

復合物疫苗免疫的雞群中，第1、2和3組分別有1或2只雞發病最后沒有死亡，但表現出神經癥狀，如歪脖，頭部震顫等癥狀，推測發病雞雖有抗體但不能完全保護強毒的攻擊，耐過后有新城疫神經后遺癥。復合物疫苗5、6和7對1日齡SPF雛雞免疫產生的抗體水平與常規活苗免疫的相當，并且抗體水平比較均勻，對強毒攻擊都能提供100%的保護，但常規活苗免疫1日齡SPF雛雞時伴有疫苗反應，雛雞較弱可導致雞只的死亡，而復合物疫苗對雛雞沒有明顯的毒副作用，接種1日齡SPF雛雞不受任何影響。試驗結果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相應的特異性抗體按一定比例和一定的感作時間混勻結合后，可以明顯降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同時，提高了疫苗的安全性。

目前，雞傳染性法氏囊抗原抗體復合物疫苗已成功應用于市場，在防控商品雞傳染性法氏囊病發揮了重要作用。使用抗原抗體復合物疫苗可增強家禽的免疫反應，加強保護性免疫，但其作用機理仍不十分清楚，一般認為抗原抗體復合物疫苗的作用機制與復合物能直接與濾泡樹突狀細胞(FDC)結合的特異能力有關^[11-12]。Jeurissen H M等^[13]調查了IBD復合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情況，結果表明，接種疫苗后，免疫復合物與FDC結合后可長時間滯留在細胞表面，FDC不能內化復合物，因而疫苗中的活病毒也得到保護，可以免受淋巴細胞的攻擊。但部分傳染性病毒被FDC轉運至淋巴結并定居，在淋巴結內誘導產生更多的生發中心，使得疫苗病毒復制的效率更高。由于復合物疫苗中抗體分子Fc片段與APC的Fc受體有很高的親合性，因而使得與疫苗中病毒更易更有效地與APC結合。復合物易被APC吞噬和內化，因而病毒不會被殺滅，且還能復制，最后激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫反應和細胞免疫應答。本試驗的結果也顯示，當復合物疫苗中抗原抗體在恰當比例時，接種后機體也能產生高水平的抗體，雖然其獨特的作用機制與常規活苗的不一樣，但復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較常規活苗更好。

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試驗1、2、3、4、10組在攻毒后第3天和第4天，雞出現新城疫發病癥狀，在觀察期內，第1組發病7只，死亡6只；第2組發病12只，死亡10只；第3組發病19只，死亡18只；第4組發病2只，死亡2只；第10組為空白對照組，攻毒后7d內全部發病死亡。剖檢死雞，病程急發病快的多無典型新城疫病變，病程長的死亡雞則呈現為典型的新城疫病變(表1)。

表1　試驗雞免疫后3周用新城疫強毒北京株F48E9攻毒試驗結果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　討論

抗原抗體復合物疫苗是一種新型疫苗，當抗原與抗體混勻結合后，抗體能保護活病毒免受機體免疫系統的攻擊，同時延緩病毒釋放。制備抗原抗體復合物疫苗的關鍵是抗體和抗原的最佳復合比例，PokricB等^[10]認為，抗原抗體復合物中抗原和抗體的比例對復合物疫苗效果最為重要，復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，抗原稍過量或抗原抗體等價，復合物才能產生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通過固定抗原含量為10^6.0EID₅₀/羽份，逐步增加抗體的量配制了8種不同比例的抗原抗體復合物疫苗，免疫1日齡SPF雛雞3周后攻毒，測定了HI抗體效價，并分析了各組免疫雞的發病和死亡情況。試驗結果表明，復合物疫苗中抗體太少，降低了疫苗的免疫效力，隨著抗體的增加，配制的疫苗效力逐漸降低，最后幾乎達到了不免疫無抗體水平；抗體進一步增加，疫苗效力又開始逐步升高，并在一定范圍內維持高效力水平；當抗體再增加時，疫苗由于含有過多的抗體其效力再次出現下降。當抗原抗體比例在3∶4至3∶12之間，即復合物疫苗5、6和7免疫雞后能產生較高的抗體水平，免疫效力最好，抗體滴度比較均一，攻毒保護率達到100%，疫苗毒價在10^3.2EID₅₀/0.1mL～10^3.5EID₅₀/0.1mL之間，HA效價均為0。

復合物疫苗免疫的雞群中，第1、2和3組分別有1或2只雞發病最后沒有死亡，但表現出神經癥狀，如歪脖，頭部震顫等癥狀，推測發病雞雖有抗體但不能完全保護強毒的攻擊，耐過后有新城疫神經后遺癥。復合物疫苗5、6和7對1日齡SPF雛雞免疫產生的抗體水平與常規活苗免疫的相當，并且抗體水平比較均勻，對強毒攻擊都能提供100%的保護，但常規活苗免疫1日齡SPF雛雞時伴有疫苗反應，雛雞較弱可導致雞只的死亡，而復合物疫苗對雛雞沒有明顯的毒副作用，接種1日齡SPF雛雞不受任何影響。試驗結果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相應的特異性抗體按一定比例和一定的感作時間混勻結合后，可以明顯降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同時，提高了疫苗的安全性。

目前，雞傳染性法氏囊抗原抗體復合物疫苗已成功應用于市場，在防控商品雞傳染性法氏囊病發揮了重要作用。使用抗原抗體復合物疫苗可增強家禽的免疫反應，加強保護性免疫，但其作用機理仍不十分清楚，一般認為抗原抗體復合物疫苗的作用機制與復合物能直接與濾泡樹突狀細胞(FDC)結合的特異能力有關^[11-12]。Jeurissen H M等^[13]調查了IBD復合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情況，結果表明，接種疫苗后，免疫復合物與FDC結合后可長時間滯留在細胞表面，FDC不能內化復合物，因而疫苗中的活病毒也得到保護，可以免受淋巴細胞的攻擊。但部分傳染性病毒被FDC轉運至淋巴結并定居，在淋巴結內誘導產生更多的生發中心，使得疫苗病毒復制的效率更高。由于復合物疫苗中抗體分子Fc片段與APC的Fc受體有很高的親合性，因而使得與疫苗中病毒更易更有效地與APC結合。復合物易被APC吞噬和內化，因而病毒不會被殺滅，且還能復制，最后激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫反應和細胞免疫應答。本試驗的結果也顯示，當復合物疫苗中抗原抗體在恰當比例時，接種后機體也能產生高水平的抗體，雖然其獨特的作用機制與常規活苗的不一樣，但復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較常規活苗更好。

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試驗1、2、3、4、10組在攻毒后第3天和第4天，雞出現新城疫發病癥狀，在觀察期內，第1組發病7只，死亡6只；第2組發病12只，死亡10只；第3組發病19只，死亡18只；第4組發病2只，死亡2只；第10組為空白對照組，攻毒后7d內全部發病死亡。剖檢死雞，病程急發病快的多無典型新城疫病變，病程長的死亡雞則呈現為典型的新城疫病變(表1)。

表1　試驗雞免疫后3周用新城疫強毒北京株F48E9攻毒試驗結果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　討論

抗原抗體復合物疫苗是一種新型疫苗，當抗原與抗體混勻結合后，抗體能保護活病毒免受機體免疫系統的攻擊，同時延緩病毒釋放。制備抗原抗體復合物疫苗的關鍵是抗體和抗原的最佳復合比例，PokricB等^[10]認為，抗原抗體復合物中抗原和抗體的比例對復合物疫苗效果最為重要，復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，抗原稍過量或抗原抗體等價，復合物才能產生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通過固定抗原含量為10^6.0EID₅₀/羽份，逐步增加抗體的量配制了8種不同比例的抗原抗體復合物疫苗，免疫1日齡SPF雛雞3周后攻毒，測定了HI抗體效價，并分析了各組免疫雞的發病和死亡情況。試驗結果表明，復合物疫苗中抗體太少，降低了疫苗的免疫效力，隨著抗體的增加，配制的疫苗效力逐漸降低，最后幾乎達到了不免疫無抗體水平；抗體進一步增加，疫苗效力又開始逐步升高，并在一定范圍內維持高效力水平；當抗體再增加時，疫苗由于含有過多的抗體其效力再次出現下降。當抗原抗體比例在3∶4至3∶12之間，即復合物疫苗5、6和7免疫雞后能產生較高的抗體水平，免疫效力最好，抗體滴度比較均一，攻毒保護率達到100%，疫苗毒價在10^3.2EID₅₀/0.1mL～10^3.5EID₅₀/0.1mL之間，HA效價均為0。

復合物疫苗免疫的雞群中，第1、2和3組分別有1或2只雞發病最后沒有死亡，但表現出神經癥狀，如歪脖，頭部震顫等癥狀，推測發病雞雖有抗體但不能完全保護強毒的攻擊，耐過后有新城疫神經后遺癥。復合物疫苗5、6和7對1日齡SPF雛雞免疫產生的抗體水平與常規活苗免疫的相當，并且抗體水平比較均勻，對強毒攻擊都能提供100%的保護，但常規活苗免疫1日齡SPF雛雞時伴有疫苗反應，雛雞較弱可導致雞只的死亡，而復合物疫苗對雛雞沒有明顯的毒副作用，接種1日齡SPF雛雞不受任何影響。試驗結果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相應的特異性抗體按一定比例和一定的感作時間混勻結合后，可以明顯降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同時，提高了疫苗的安全性。

目前，雞傳染性法氏囊抗原抗體復合物疫苗已成功應用于市場，在防控商品雞傳染性法氏囊病發揮了重要作用。使用抗原抗體復合物疫苗可增強家禽的免疫反應，加強保護性免疫，但其作用機理仍不十分清楚，一般認為抗原抗體復合物疫苗的作用機制與復合物能直接與濾泡樹突狀細胞(FDC)結合的特異能力有關^[11-12]。Jeurissen H M等^[13]調查了IBD復合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情況，結果表明，接種疫苗后，免疫復合物與FDC結合后可長時間滯留在細胞表面，FDC不能內化復合物，因而疫苗中的活病毒也得到保護，可以免受淋巴細胞的攻擊。但部分傳染性病毒被FDC轉運至淋巴結并定居，在淋巴結內誘導產生更多的生發中心，使得疫苗病毒復制的效率更高。由于復合物疫苗中抗體分子Fc片段與APC的Fc受體有很高的親合性，因而使得與疫苗中病毒更易更有效地與APC結合。復合物易被APC吞噬和內化，因而病毒不會被殺滅，且還能復制，最后激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫反應和細胞免疫應答。本試驗的結果也顯示，當復合物疫苗中抗原抗體在恰當比例時，接種后機體也能產生高水平的抗體，雖然其獨特的作用機制與常規活苗的不一樣，但復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較常規活苗更好。

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試驗1、2、3、4、10組在攻毒后第3天和第4天，雞出現新城疫發病癥狀，在觀察期內，第1組發病7只，死亡6只；第2組發病12只，死亡10只；第3組發病19只，死亡18只；第4組發病2只，死亡2只；第10組為空白對照組，攻毒后7d內全部發病死亡。剖檢死雞，病程急發病快的多無典型新城疫病變，病程長的死亡雞則呈現為典型的新城疫病變(表1)。

表1　試驗雞免疫后3周用新城疫強毒北京株F48E9攻毒試驗結果

Table 1　Expertimental results of chicks challenged with highvirulent NDV Beijing strain F48E9 at three weeks post-vaccination

3　討論

抗原抗體復合物疫苗是一種新型疫苗，當抗原與抗體混勻結合后，抗體能保護活病毒免受機體免疫系統的攻擊，同時延緩病毒釋放。制備抗原抗體復合物疫苗的關鍵是抗體和抗原的最佳復合比例，PokricB等^[10]認為，抗原抗體復合物中抗原和抗體的比例對復合物疫苗效果最為重要，復合物中抗體過量會抑制復合物對免疫淋巴細胞的刺激作用，抗原稍過量或抗原抗體等價，復合物才能產生有效的免疫刺激。本研究采用低毒力新城疫LaSota株病毒，通過固定抗原含量為10^6.0EID₅₀/羽份，逐步增加抗體的量配制了8種不同比例的抗原抗體復合物疫苗，免疫1日齡SPF雛雞3周后攻毒，測定了HI抗體效價，并分析了各組免疫雞的發病和死亡情況。試驗結果表明，復合物疫苗中抗體太少，降低了疫苗的免疫效力，隨著抗體的增加，配制的疫苗效力逐漸降低，最后幾乎達到了不免疫無抗體水平；抗體進一步增加，疫苗效力又開始逐步升高，并在一定范圍內維持高效力水平；當抗體再增加時，疫苗由于含有過多的抗體其效力再次出現下降。當抗原抗體比例在3∶4至3∶12之間，即復合物疫苗5、6和7免疫雞后能產生較高的抗體水平，免疫效力最好，抗體滴度比較均一，攻毒保護率達到100%，疫苗毒價在10^3.2EID₅₀/0.1mL～10^3.5EID₅₀/0.1mL之間，HA效價均為0。

復合物疫苗免疫的雞群中，第1、2和3組分別有1或2只雞發病最后沒有死亡，但表現出神經癥狀，如歪脖，頭部震顫等癥狀，推測發病雞雖有抗體但不能完全保護強毒的攻擊，耐過后有新城疫神經后遺癥。復合物疫苗5、6和7對1日齡SPF雛雞免疫產生的抗體水平與常規活苗免疫的相當，并且抗體水平比較均勻，對強毒攻擊都能提供100%的保護，但常規活苗免疫1日齡SPF雛雞時伴有疫苗反應，雛雞較弱可導致雞只的死亡，而復合物疫苗對雛雞沒有明顯的毒副作用，接種1日齡SPF雛雞不受任何影響。試驗結果也提示，用低毒力新城疫LaSota株病毒和相應的特異性抗體按一定比例和一定的感作時間混勻結合后，可以明顯降低疫苗的毒副作用，在保持其良好免疫原性的同時，提高了疫苗的安全性。

目前，雞傳染性法氏囊抗原抗體復合物疫苗已成功應用于市場，在防控商品雞傳染性法氏囊病發揮了重要作用。使用抗原抗體復合物疫苗可增強家禽的免疫反應，加強保護性免疫，但其作用機理仍不十分清楚，一般認為抗原抗體復合物疫苗的作用機制與復合物能直接與濾泡樹突狀細胞(FDC)結合的特異能力有關^[11-12]。Jeurissen H M等^[13]調查了IBD復合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情況，結果表明，接種疫苗后，免疫復合物與FDC結合后可長時間滯留在細胞表面，FDC不能內化復合物，因而疫苗中的活病毒也得到保護，可以免受淋巴細胞的攻擊。但部分傳染性病毒被FDC轉運至淋巴結并定居，在淋巴結內誘導產生更多的生發中心，使得疫苗病毒復制的效率更高。由于復合物疫苗中抗體分子Fc片段與APC的Fc受體有很高的親合性，因而使得與疫苗中病毒更易更有效地與APC結合。復合物易被APC吞噬和內化，因而病毒不會被殺滅，且還能復制，最后激活B淋巴細胞和T淋巴細胞，刺激B淋巴細胞成為抗體分泌細胞，從而引起強烈的體液免疫反應和細胞免疫應答。本試驗的結果也顯示，當復合物疫苗中抗原抗體在恰當比例時，接種后機體也能產生高水平的抗體，雖然其獨特的作用機制與常規活苗的不一樣，但復合物疫苗安全性高，免疫效果總體上較常規活苗更好。