摘 要：選用兩種在山東省普遍使用的中等毒力IBD活疫苗，將240只試驗(yàn)用商品雞隨機(jī)分成12組，分別在12日齡和19日齡兩次免疫，同時在11日齡時用復(fù)合中草藥提取物飲水，連用7d，二免后13 d人工接種vvIBDV，連續(xù)觀察14d。結(jié)果表明，無論從抗體水平、囊指數(shù)、BBIX值、B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)形成率、T淋巴細(xì)胞α-醋酸萘酯酶素(ANAE)陽性率、紅細(xì)胞(RBC)免疫黏附功能，還是從病理組織學(xué)檢查、臨床保護(hù)率、病理保護(hù)率等指標(biāo)來看，都充分表明該復(fù)合中草藥提取物對中等毒力IBD活疫苗具有顯著的免疫增強(qiáng)作用，而且對提高法氏囊等免疫器官的保護(hù)作用及疫苗對其損傷后的修復(fù)作用也有顯著效果。
關(guān)鍵詞：復(fù)合中草藥提取物；中等毒力IBD活疫苗；IBDV超強(qiáng)毒；保護(hù)率
雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectiousbursal diseasevirus，IBDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病常發(fā)生于3周齡～12周齡雛雞與青年雞，主要破壞雞的中樞免疫器官——法氏囊，使法氏囊中的B淋巴細(xì)胞分化增殖受阻，造成機(jī)體的免疫抑制，導(dǎo)致感染雞對其他致病因子的感染性增加和對其他疫苗的免疫應(yīng)答能力下降，對養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的危害。1987年一種以高發(fā)病率和高病死率為特征的IBDV超強(qiáng)毒(veryvirulent infectious bursal disease virus，vvIBDV)或高致病力IBDV(highlyvirulent infectious bursal diseasevirus，hvIBDV)陸續(xù)在荷蘭、英國、比利時、德國、日本等國家報(bào)道，辛桂香等報(bào)道我國也存在著這種vvIBDV。目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為vvIBDV是引起雞IBD免疫失敗的主要因素。
中等毒力IBD疫苗雖能在一定程度上突破母源抗體的干擾，減少vvIBDV所導(dǎo)致的臨床死亡，但由于其本身對家禽免疫器官有一定程度的損傷，從而影響機(jī)體的免疫功能，再加上環(huán)境中各種致病因子尤其是免疫抑制性致病因子和應(yīng)激因素等的相互作用，使得該病的防控更加困難。
為了克服以上這些弊端，提高免疫效果，國內(nèi)外許多學(xué)者普遍開展了對免疫增強(qiáng)劑的研究，而且涉及范圍也較廣[1-3]。免疫增強(qiáng)劑的種類很多，如卡介苗、植物血凝素等生物制劑，左旋咪唑等化學(xué)合成類物質(zhì)，維生素E、微量元素硒等營養(yǎng)類物質(zhì)，這些物質(zhì)雖然具有一定的免疫增強(qiáng)作用，但其毒副作用及藥物殘留也不容忽視。目前，中草藥的免疫增強(qiáng)作用成為研究的熱點(diǎn)，但多是一些散劑或單一中草藥的提取物，并不適合家禽各種體質(zhì)和當(dāng)前群體給藥的特點(diǎn)，為此，我們從益氣、補(bǔ)血、滋陰、壯陽等四個方面用正交試驗(yàn)法優(yōu)選了一種復(fù)合中草藥提取物，為了進(jìn)一步驗(yàn)證其在IBD疫苗免疫上的應(yīng)用效果，進(jìn)行了本項(xiàng)試驗(yàn)。
1 材料與方法
1.1 IBD疫苗
在山東省較為普遍使用的兩種中等毒力疫苗，均為國產(chǎn)，甲種疫苗為NF8株，乙種疫苗為BJ836株，按照疫苗使用說明書分別點(diǎn)眼進(jìn)行免疫。
1.2 試驗(yàn)用雞
商品海蘭白蛋雞，10日齡時，AGP檢測母源抗體陽性率小于50%。
1.3 復(fù)合中草藥提取物
中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院獸藥研究所制備，主要成分為黃芪多糖、枸杞多糖、淫羊藿多糖和當(dāng)歸多糖，飲水濃度為1 g/L，連用7 d。
1.4 超強(qiáng)毒株
vvIBDV SD-1/97株，其ELD50為10－3.50.1 mL，每只雞接種病毒液(30倍稀釋)0.2 mL，點(diǎn)眼、滴鼻各0.1 mL。
1.5 分組及處理
將11日齡海蘭白蛋雞隨機(jī)分成12組，分別隔離飼養(yǎng)，飼養(yǎng)管理完全相同。
1組為空白對照組，不做任何處理，共10只雞。
2組為攻強(qiáng)毒對照組，飼養(yǎng)至32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
3組為疫苗對照組，12日齡時首免，19日齡時二免甲種疫苗，共10只雞。
4組為疫苗對照組，12日齡時首免，19日齡時二免乙種疫苗，共10只雞。
5組為疫苗免疫攻強(qiáng)毒對照組，12日齡時首免，19日齡時二免甲種疫苗，32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
6組為疫苗免疫攻強(qiáng)毒對照組，12日齡時首免，19日齡時二免乙種疫苗，32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
7組為增強(qiáng)劑對照組，在19日齡時，用增強(qiáng)劑飲水，連用10 d，共10只雞。
8組為增強(qiáng)劑攻強(qiáng)毒對照組，在19日齡時，用增強(qiáng)劑飲水，連用10 d，在32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
9組為免疫增強(qiáng)劑對照組，12日齡時首免，19日齡時二免甲種疫苗，在11日齡時用增強(qiáng)劑飲水，至第21日齡時結(jié)束即連用10d，共10只雞。
10組為免疫增強(qiáng)劑對照組，12日齡時首免，19日齡時二免乙種疫苗，在11日齡時用增強(qiáng)劑飲水，至第21日齡時結(jié)束即連用10d，共10只雞。
11組為試驗(yàn)組，12日齡時首免，19日齡時二免甲種疫苗，在11日齡時用增強(qiáng)劑飲水，至第21日齡時結(jié)束即連用10d,32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
12組為試驗(yàn)組，12日齡時首免，19日齡時二免乙種疫苗，在11日齡時用增強(qiáng)劑飲水，至第21日齡時結(jié)束即連用10d,32日齡時攻強(qiáng)毒，共30只雞。
1.6 發(fā)病情況、病理及免疫學(xué)檢測
病理剖檢，測其囊指數(shù)即法氏囊重(mg)/體重(g)，用常規(guī)AGP方法檢測IBD抗體，取法氏囊、胸腺、脾臟等，常規(guī)方法制備石臘切片，蘇木素-伊紅染色，顯微鏡下觀察。做B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)試驗(yàn)，測定EAC花環(huán)形成率(%)，并做T淋巴細(xì)胞ANAE陽性率試驗(yàn)，檢測ANAE陽性率(%)。按文獻(xiàn)[4]做紅細(xì)胞C3bR花環(huán)試驗(yàn)和免疫復(fù)合物(IC)花環(huán)試驗(yàn)，測定C3bR和IC花環(huán)形成率(%)。計(jì)算各疫苗保護(hù)率。
2 結(jié)果
2.1 發(fā)病情況及病理剖檢
空白對照組在整個試驗(yàn)過程中沒有異常變化，病理剖檢基本正常。
攻強(qiáng)毒對照組在攻毒后第2天，出現(xiàn)臨床癥狀，發(fā)病率100%，第3天開始死亡，截止到第14天時共死亡25只，死亡率為83.3%，耐過雞消瘦，生長緩慢。剖檢死亡雞可見典型IBD病理變化特征。
疫苗對照兩組在整個試驗(yàn)過程中有輕微臨床癥狀，第22日齡時分別剖檢2只，可見法氏囊稍水腫，偶見出血點(diǎn)，脾臟、胸腺偶見出血點(diǎn)。第32日齡時已基本恢復(fù)正常。
疫苗免疫攻毒對照兩組在整個試驗(yàn)過程中無一死亡，其中第5組有2只、第6組有3只出現(xiàn)IBD特征性臨床癥狀。剖檢可見第5組有3只、第6組有4只出現(xiàn)IBD特征性病變。
增強(qiáng)劑對照組在整個試驗(yàn)過程中，雞群精神狀態(tài)良好，羽毛整齊，光澤度高，身體健壯，剖檢無肉眼可見病理變化。
增強(qiáng)劑攻毒對照組在攻毒后第4天開始發(fā)病，發(fā)病率100%，截止到第14天時，死亡率為63.3%，有11只雞耐過。剖檢病死雞可見典型IBD病變。
免疫增強(qiáng)劑對照兩組在整個試驗(yàn)過程中沒有明顯變化，剖檢未發(fā)現(xiàn)肉眼可見病理變化。
試驗(yàn)兩組在整個試驗(yàn)過程中沒有異常情況，剖檢中發(fā)現(xiàn)第12組有1只雞出現(xiàn)輕微法氏囊病理變化。
2.2 病理組織學(xué)檢查
空白對照組無異常組織學(xué)變化。
攻強(qiáng)毒對照組死亡雞法氏囊病變較重，淋巴細(xì)胞大量變性、壞死，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，炎性細(xì)胞浸潤(圖1)。
圖1 疫苗免疫攻強(qiáng)毒對照組的法氏囊病理切片
Fig.1 The bursal pathological section of the vaccine immunizedcontrol group challenged with the vvIBDV
疫苗對照組可見法氏囊濾泡皮質(zhì)、髓質(zhì)分界不明顯，淋巴細(xì)胞少而小，有的淋巴細(xì)胞崩解、死亡，淋巴濾泡間質(zhì)增寬，部分濾泡萎縮。二免后第13天，即第32日齡時已基本恢復(fù)正常。
疫苗免疫攻強(qiáng)毒對照組可見部分法氏囊淋巴小結(jié)漸進(jìn)性壞死，炎癥細(xì)胞浸潤，有的見殘核碎屑。
增強(qiáng)劑對照組可見法氏囊黏膜皺壁較大且明顯，淋巴濾泡大而密集，皮質(zhì)與髓質(zhì)分界明顯。脾小體較多，脾索淋巴細(xì)胞密集，脾中央動脈周圍淋巴組織鞘豐富且細(xì)胞密集。胸腺小葉大，皮質(zhì)較厚(圖2)。
增強(qiáng)劑攻強(qiáng)毒對照組法氏囊淋巴細(xì)胞小而少，皮質(zhì)與髓質(zhì)分界不明顯，淋巴細(xì)胞崩解、死亡。脾臟白髓較少、網(wǎng)狀細(xì)胞增生，紅髓脾索淋巴細(xì)胞減少。胸腺淋巴細(xì)胞減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生。
免疫增強(qiáng)劑對照組可見法氏囊皺壁較大且明顯，濾泡發(fā)育良好，脾小體較多，脾索淋巴細(xì)胞密集，胸腺發(fā)育良好(圖3)。
試驗(yàn)組鏡檢可見法氏囊組織結(jié)構(gòu)發(fā)育良好，皮質(zhì)、髓質(zhì)淋巴細(xì)胞排列比較緊密，其他沒有發(fā)現(xiàn)異常病理變化?！?/p>
圖2 使用免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)第11組的法氏囊病理切片
Fig.2 The bursal pathological section of 11th group usedimmunostimulants
圖3 使用免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)第12組的法氏囊病理切片
Fig.3 Thebursal pathological section of 12th group\'s usedimmunostimulants
2.3 抗體檢測結(jié)果
2.3.1 疫苗免疫后抗體陽性率 試驗(yàn)雞在試驗(yàn)前用AGP法抽檢抗體，結(jié)果分析差異不顯著。分別于表1所示時間隨機(jī)抽取3只雛雞的血清(由翅靜脈采血)，用AGP法檢測，可見首免后第7天，對照3、4兩組抗體陽性率不足10%，在二免后第10天才90%左右，而使用免疫增強(qiáng)劑的對照9、10兩組在首免后第7天就達(dá)到了17.2%和15.8%，二免后第10天抗體陽性率就已全部達(dá)到100%，兩者差異顯著(P<0.05)，對照3、4兩組在二免后13d才接近這一水平。可見，使用免疫增強(qiáng)劑后，抗體陽性率明顯提高，抗體產(chǎn)生的時間也明顯提前。
表1 不同疫苗免疫后抗體陽性率
Table 1 The results of antibody positive rate after immunization%
免疫后天數(shù) Days post immunization | 組別 Groups | ||||
1 | 3 | 4 | 9 | 10 | |
首免后第7天 7 d after 1st immunization | 0 | 9.1±0.85 | 7.2±0.79 | 17.2±0.80 | 15.8±0.81 |
2免后第10天 10 d after 2nd immunization | 0 | 91.1±0.79 | 86.3±0.80 | 100±0.82 | 100±0.85 |
2免后第13天 13 d after 2nd immunization | 0 | 98.2±0.75 | 96.0±0.69 | 100±0.73 | 100±0.72 |
2.3.2 IBD疫苗免疫后AGP抗體幾何均值 由表2可以看出，免疫后第10天，使用免疫增強(qiáng)劑的9、10兩組分別比3、4兩組高出1.3和1.0個滴度，在免疫后13d，分別高出了1.7和1.6個滴度，兩者差異顯著(P<0.05)。可見，使用免疫增強(qiáng)劑后，抗體滴度明顯提高。
表2 二免后AGP抗體幾何均值(GMT)
Table 2 The difference of AGP antibody titres in each group aftersecond immunization
0
2免疫后天數(shù)/d Days after 2nd immunization | 組別 Groups | ||||
1 | 3 | 4 | 9 | 10 | |
10 | 0 | 2.3±0.8 | 1.9±0.5 | 3.6±0.7 | 2.9±0.8 |
13 | 3.0±1.2 | 2.5±0.6 | 4.7±1.1 | 4.1±1.0 |
2.4 二免后對法氏囊的影響
由表3可以看出，二免后第13天，對照3、4兩組囊指數(shù)分別是2.16和2.02，與空白對照組差異顯著(P<0.05)，而使用免疫增強(qiáng)劑的9、10兩組與空白對照組差異不顯著(P>0.05)。而對照7組囊指數(shù)卻達(dá)到了4.07，比空白對照組高出了0.41。根據(jù)文獻(xiàn)[5]記載，若BBIX<0.7，則判法氏囊為萎縮，如果按照這個標(biāo)準(zhǔn)，對照3、4兩組法氏囊處于萎縮狀態(tài)，而9、10兩組則已基本正常。另外，只使用免疫增強(qiáng)劑的對照7組，其BBIX值達(dá)到1.11，比空白對照組還高出0.11。說明我們所用復(fù)合中草藥提取物具有免疫增強(qiáng)作用。
表3 二免后第13天對法氏囊的影響結(jié)果
Table 3 The result of the ratios of chicken bursal of fabricious tobody weight after second immunization
組別 Groups | 1 | 3 | 4 | 7 | 9 | 10 |
平均囊指數(shù)/(mg·g－1) Average bursal index | 3.66±1.6 | 2.16±1.1 | 2.02±1.4 | 4.07±1.7 | 2.87±1.3 | 2.52±1.2 |
BBIX | 1 | 0.59 | 0.55 | 1.11 | 0.78 | 0.69 |
注：BBIX：試驗(yàn)組囊指數(shù)/空白對照組囊指數(shù)。
Note：Bursal index in the experimental group/bursal index in theblank control group.
2.5 復(fù)合中草藥提取物對雛雞B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)率的影響
復(fù)合中草藥提取物對雛雞B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)形成率的影響結(jié)果見表4。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，使用增強(qiáng)劑的第7組B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)形成率極顯著高于空白對照組(P<0.01)，說明該復(fù)合中藥提取物具有促進(jìn)體液免疫功能的作用。使用增強(qiáng)劑的9、10兩組與未使用增強(qiáng)劑的3、4兩組相比，兩者差異極顯著(P<0.01)，提示該復(fù)合中藥提取物對雛雞接種IBD疫苗產(chǎn)生的特異性免疫具有顯著的促進(jìn)和增強(qiáng)作用。
表4 復(fù)合中草藥提取物對雛雞B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)率的影響
Table 4 The influence of compound Chinese medicine extraction to Blymphocyte EAC rosette rate %
2免后天數(shù) Days after 2nd immunization | 組別 Groups | |||||
1 | 3 | 4 | 7 | 9 | 10 | |
10 | 15.26±2.12 | 25.23±1.72 | 26.18±2.03 | 30.23±2.16 | 40.36±1.42, | 41.23±2.09 |
13 | 18.14±1.72 | 28.21±1.90 | 30.28±2.14 | 33.19±2.05 | 43.29±2.52 | 45.27±2.12 |
2.6 復(fù)合中草藥提取物對雛雞T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)率的影響
復(fù)合中草藥提取物對雛雞T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)形成率的影響結(jié)果見表5。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，使用增強(qiáng)劑的第7組T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)形成率極顯著高于空白對照組(P<0.01)，說明該復(fù)合中藥提取物具有促進(jìn)細(xì)胞免疫功能的作用。使用增強(qiáng)劑的9、10兩組與未使用增強(qiáng)劑的3、4兩組相比，兩者差異極顯著(P<0.01)，提示該復(fù)合中藥提取物對雛雞接種IBD疫苗產(chǎn)生的細(xì)胞免疫具有顯著的促進(jìn)和增強(qiáng)作用。
表5 復(fù)合中草藥提取物對雛雞T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)率的影響
Table 5 The influence of compound Chinese medicine extraction to Blymphocyte ANAE rosette rate %
2免后天數(shù) Days after 2nd immunization | 組別 Groups | |||||
1 | 3 | 4 | 7 | 9 | 10 | |
10 | 18.36±2.10 | 22.23±1.76 | 26.19±2.00 | 29.23±2.14 | 38.16±1.49 | 41.33±2.01 |
13 | 23.24±2.12 | 28.14±1.64 | 32.18±2.07 | 33.13±2.06 | 40.36±1.63 | 45.38±1.99 |
2.7 復(fù)合中草藥提取物對雛雞RBC免疫功能的影響
復(fù)合中草藥提取物對雛雞RBC免疫功能的影響結(jié)果見表6。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，未使用增強(qiáng)劑的3、4兩組其C3bR花環(huán)率小于空白對照組，兩者差異不顯著(P>0.05)，增強(qiáng)劑對照7組極顯著高于空白對照組(P<0.01)，而使用增強(qiáng)劑的9、10兩組與空白對照組相比，其C3bR花環(huán)率顯著高于空白對照組(P<0.05)，極顯著高于3、4兩組(P<0.01)，說明該中草藥提取物具有一定的提高紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率的作用。
未使用增強(qiáng)劑的3、4兩組其IC花環(huán)率25日齡時顯著小于空白對照組(P<0.05),32日齡時兩者差異不顯著(P>0.05)。增強(qiáng)劑對照7組高于空白對照組，但兩者差異不顯著(P>0.05)。而使用增強(qiáng)劑的9、10兩組在25日齡時顯著高于空白對照組(P<0.05)，極顯著高于未使用增強(qiáng)劑的3、4兩組(P<0.01)，在32日齡時略高于空白對照組，但兩者差異不顯著(P>0.05)，也高于3、4兩組，但兩者差異不顯著(P>0.05)。說明該中草藥提取物具有一定的提高紅細(xì)胞IC花環(huán)率的作用。
表6 復(fù)合中草藥提取物對雛雞RBC免疫功能的影響
Table 6 Theinfluence of compound Chinese medicine extraction to RBCimmunologic function%
組別 Groups | C3bR花環(huán)率/% C3bR rosette rates | IC花環(huán)率/% IC rosette rates | |||
2免后第10天 10 d after immunization | 2免后第13天 13 after immunization | 2免后第10天 10 d after immunization | 2免后第13天 13 after immunization | ||
1 | 10.90±1.10 | 11.66±0.98 | 8.43±1.16 | 8.59±1.08 | |
3 | 9.24±1.23 | 9.84±1.25 | 5.27±1.05 | 7.89±1.28 | |
4 | 9.01±1.31 | 9.15±1.19, | 5.84±1.13 | 8.16±1.20 | |
7 | 15.25±2.13 | 18.84±1.20, | 9.24±1.23 | 9.84±1.16 | |
9 | 14.24±1.47 | 17.67±1.27 | 10.64±1.38 | 8.95±1.29 | |
10 | 14.95±1.36 | 18.20±1.31 | 11.23±1.22 | 9.83±1.15 |
2.8 兩種IBD疫苗的免疫效力測定
表7中臨床保護(hù)率表示臨床上無任何IBD癥狀者，判為100%臨床保護(hù)。病理保護(hù)率表示法氏囊，胸腺和脾臟等免疫器官無典型IBD剖檢病變和其他肉眼可見病理變化者，判為100%病理保護(hù)。
攻毒后14 d，剖檢部分雞只結(jié)果如表7所示，試驗(yàn)結(jié)束時對照5、6兩組，其囊指數(shù)分別是2.98和2.65，與空白對照組差異極顯著(P<0.01)，BBIX值均小于0.7，法氏囊仍處于萎縮狀態(tài)，雖然其臨床保護(hù)率在90%左右，但其病理保護(hù)率卻很不理想，而使用免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)11、12兩組在試驗(yàn)結(jié)束時，其囊指數(shù)分別是3.87和3.49，與空白對照組差異不顯著(P>0.05)，BBIX值大于0.7，說明法氏囊已恢復(fù)正常，無論臨床保護(hù)率還是病理保護(hù)率都達(dá)到100%，顯著優(yōu)于對照5、6兩組，二者差異極顯著(P<0.01)。
表7 兩種IBD疫苗的免疫效力測定結(jié)果
Table 7 The result of the immunity of two IBD vaccines in chickens
組別 Groups | 囊指數(shù)/(mg·g－1) Bursal index | BBIX | 臨床保護(hù)率/% Clinical protection rate | 病理保護(hù)率/% Pathological protection rate |
1 | 4.57±0.20 | 1 | 0 | 0 |
2 | 1.42±0.18 | 0.31 | 0 | 0 |
5 | 2.98±0.14 | 0.65 | 93.3(28/30) | 83.3(25/30) |
6 | 2.65±0.21 | 0.58 | 90(27/30) | 76.7(23/30) |
8 | 1.83±0.16 | 0.40 | 0 | 0 |
11 | 3.87±0.19 | 0.85 | 100(30/30) | 100(30/30) |
12 | 3.49±0.21 | 0.76 | 100(30/30) | 96.7(29/30) |
3 討論
用SD-1/97毒株接種32日齡商品雞后，第2天開始發(fā)病，病死率為83.3%。剖檢可見典型的IBD病變，如法氏囊顯著腫大，呈“紫葡萄”樣等，與英國、荷蘭等國家的學(xué)者和我國學(xué)者辛桂香等所報(bào)道的vvIBDV感染情況基本一致，從而也進(jìn)一步證明本試驗(yàn)所用毒株確為超強(qiáng)毒株。
用常規(guī)AGP方法檢測IBD抗體，結(jié)果表明，使用免疫增強(qiáng)劑的對照9、10兩組在二免后第10天抗體已全部陽性且抗體水平較高，而對照3、4兩組在二免后第13天才接近全部陽性且抗體水平也不是很高，兩者差異顯著(P<0.05)，可見，使用免疫增強(qiáng)劑后，抗體產(chǎn)生的時間不僅早，而且水平也高，表明免疫增強(qiáng)劑能夠促進(jìn)法氏囊的生長發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，加快抗體的生成。
法氏囊是家禽的中樞免疫器官，是B細(xì)胞分化成熟的場所。法氏囊指數(shù)是法氏囊生長發(fā)育程度的一個重要指標(biāo)，它代表著機(jī)體免疫狀態(tài)的水平。從試驗(yàn)結(jié)果看，二免后第13天，使用免疫增強(qiáng)劑的9、10兩組其囊指數(shù)與對照3、4兩組相比差異顯著(P<0.05)，增強(qiáng)劑對照7組的囊指數(shù)為4.07，比正?？瞻讓φ战M高出0.41。對照3、4兩組BBIX值均小于0.7，法氏囊處于萎縮狀態(tài)，而9、10兩組法氏囊已恢復(fù)正常。此外也可看出，各組間BBIX值的大小與它們相對應(yīng)組間的抗體水平有一定的對應(yīng)關(guān)系，即抗體水平較高者，其BBIX值也較大。上述結(jié)果都表明了復(fù)合中草藥提取物不僅能促進(jìn)法氏囊等免疫器官的發(fā)育，提高機(jī)體的免疫功能，而且對于IBD中等毒力疫苗所造成的法氏囊損傷有很強(qiáng)的修復(fù)作用，并且對這種損傷后的恢復(fù)再生也有明顯地促進(jìn)作用。
在家禽體內(nèi)的免疫活性細(xì)胞中，T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的數(shù)量與機(jī)體免疫功能的高低有著非常密切的關(guān)系，兩者數(shù)量的增加反映了機(jī)體免疫力的提高，因此，T、B淋巴細(xì)胞的多少是機(jī)體全身免疫機(jī)能強(qiáng)弱的一個具體表現(xiàn)。T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)率顯著升高，可增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，它除能產(chǎn)生更多的淋巴因子提高機(jī)體免疫力外，還具有輔助體液免疫的意義。B淋巴細(xì)胞EAC花環(huán)率的提高，可增強(qiáng)體液免疫功能，使抗體水平提高，充分說明該復(fù)合中草藥提取物能明顯提高家禽機(jī)體T、B淋巴細(xì)胞的數(shù)量，同時也可以看出，T淋巴細(xì)胞ANAE花環(huán)率與IBD的抗體效價有相應(yīng)的消漲趨勢。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，該中草藥免疫增強(qiáng)劑配合IBD疫苗使用，可以明顯提高家禽紅細(xì)胞的免疫功能，對C3bR花環(huán)率的提高的效果要好于對IC花環(huán)率的影響，在25日齡即二免后第6天影響更為顯著，32日齡即二免后第13天時差別不大。通過本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，使用IBD疫苗免疫后，可引起家禽C3bR花環(huán)率和IC花環(huán)率明顯降低，在32日齡時，降低幅度減小，與空白對照組差異不顯著(P>0.05)，說明IBD疫苗免疫后會引起機(jī)體紅細(xì)胞免疫功能短暫性下降。可見，該復(fù)合中草藥提取物能夠明顯增強(qiáng)機(jī)體紅細(xì)胞C3bR花環(huán)率和IC花環(huán)率，并可激發(fā)機(jī)體在免疫后很快產(chǎn)生較高濃度的抗體。同時，還能夠消除IBD疫苗引起的紅細(xì)胞免疫功能降低，提高疫苗的免疫效果。
自從Siegel提出了“紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)(RCIS)”概念以來，國內(nèi)外學(xué)者對多種動物RBC免疫功能進(jìn)行了測試，并將其作為反映機(jī)體免疫機(jī)能狀態(tài)的指標(biāo)之一。近年的一些研究表明，RBC可借助膜上的C3bR介導(dǎo)的RBC免疫黏附反應(yīng)發(fā)揮各種免疫機(jī)能，即識別和攜帶Ag清除血液中免疫復(fù)合物(IC)，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率并促進(jìn)IgG、IgA生成；增強(qiáng)T細(xì)胞依賴性反應(yīng)，促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，增強(qiáng)NK細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)LAK細(xì)胞對腫瘤的殺傷力[6]。本試驗(yàn)利用紅細(xì)胞C3bR花環(huán)試驗(yàn)和IC花環(huán)試驗(yàn)，檢測了雛雞RBC免疫功能，證實(shí)了雛雞RCIS的存在，并證明該復(fù)合中草藥提取物有顯著的促進(jìn)雛雞RBC免疫功能的作用。
病理組織學(xué)結(jié)果表明，使用免疫增強(qiáng)劑后，法氏囊皺壁大且明顯，淋巴濾泡大且密集，脾索淋巴細(xì)胞密集，脾中央動脈周圍淋巴組織鞘厚且細(xì)胞密集，胸腺小葉大，皮質(zhì)較厚等，而未使用免疫增強(qiáng)劑的，則不同程度的出現(xiàn)法氏囊的濾泡皮、髓質(zhì)分界不明顯，濾泡萎縮，淋巴細(xì)胞壞死或減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生等，由此可以看出，復(fù)合中草藥提取物可以促進(jìn)機(jī)體免疫器官(如法氏囊、胸腺、脾臟)的生長發(fā)育，對抗vvIBDV和IBD疫苗對免疫器官的損傷，促進(jìn)受損器官的修復(fù)，使免疫器官的組織結(jié)構(gòu)保持或恢復(fù)至正常水平。
免疫效力測定結(jié)果表明，使用免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)11、12兩組，其囊指數(shù)與對照5、6兩組相比差異顯著(P<0.05)，BBIX值均大于0.7，說明法氏囊已恢復(fù)正常，而其對照組則處于萎縮狀態(tài)。此外，沒有使用免疫增強(qiáng)劑的對照5、6兩組，雖然其臨床保護(hù)率較好，但其病理保護(hù)率卻很不理想，而使用免疫增強(qiáng)劑的試驗(yàn)11、12兩組不僅臨床保護(hù)率100%，病理保護(hù)率也達(dá)到了100%和96.7%，與對照組相比差異顯著(P<0.05)，充分說明了復(fù)合中草藥提取物具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，進(jìn)而提高IBD疫苗免疫效力的作用。
綜上所述，可見該復(fù)合中草藥提取物不僅能夠促進(jìn)法氏囊等免疫器官的生長發(fā)育，激活機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，顯著提高IBD疫苗的免疫效果，而且對于IBD中等毒力疫苗所造成的法氏囊等免疫器官的病理性損傷有很強(qiáng)的修復(fù)作用，并且對這種損傷后的恢復(fù)再生也有明顯地促進(jìn)作用。