摘　要：為檢驗豬鏈球菌滅活疫苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)免疫效果，研制了5批疫苗，對妊娠母豬、保育豬等進行免疫攻毒試驗，檢驗疫苗的主動免疫和被動免疫效果，結果表明，對哺乳仔豬的平均保護率達到88.09%(SS2)和79.06%(SeZ)，對保育豬的平均保護率達到90%(SS2)和76.7%(SeZ)。

關鍵詞：豬；鏈球菌；疫苗；免疫效果

豬鏈球菌病由多種豬源鏈球菌引起，臨床表現為急性敗血癥、關節炎、腦膜炎及急性死亡，是豬的主要傳染病之一。近年來豬鏈球菌病在我國流行日趨嚴重，病原亦發生變化，其中最為重要的是豬鏈球菌2型呈世界范圍分布，是一種人獸共患病原菌，該病曾先后在江蘇南通、四川資陽等地引發公共衛生事件，造成極大的社會恐慌，嚴重危害養豬業的發展和人民的身體健康^[1]。摸清該病的流行規律，闡明致病機理，建立快速檢測方法，研制高效安全、針對性強的豬鏈球菌疫苗，解決生產實際問題已成為迫切需要。

由上海市動物疫病預防控制中心、南京農業大學組成的課題組自1998年以來，對我國豬鏈球菌病進行了系統地研究，并研制了豬鏈球菌滅活苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)^[2-3]。本試驗的目的是為了檢驗豬鏈球菌滅活苗實驗室產品的免疫效果，為疫苗的大批生產及推廣應用提供參考數據。

1　材料與方法

1.1　試驗用動物

試驗用健康母豬和21日齡健康仔豬由上海市兩個種豬場提供，兩個豬場未接種鏈球菌疫苗，近兩年也無鏈球菌病發生。15 g～20 gBalb/c小鼠購自上海復旦大學醫學院。

1.2　試驗用疫苗

實驗室研制生產豬鏈球菌滅活疫苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)5批，批號分別為20000125、20001214、20010226、20010312、20010327。經純檢、細菌計數及無菌檢查合格后用于試驗^[4-6]。

1.3　攻毒菌株

C74-63馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcusequisubsp.zooepidemicus，SeZ)，屬蘭氏分群C群，購自中國獸藥監察所；HA9801豬鏈球菌2型(Streptococcussuistype 2，SS2)分離株，1998年8月從江蘇省急性敗血癥死亡豬的實質器官中分離^[7]，中國獸醫藥品監察所鑒定，上海市動物疫病預防控制中心保存。

1.4　免疫效力檢驗

1.4.1　小鼠效力檢驗　每批疫苗皮下注射15 g～20 g Balb/c小鼠20只，每只0.2 mL,15d后加強免疫1次，每次0.2 mL，間隔14d后，與對照小鼠10只，每組再分成2組(每組5只)，分別用HA9801和C74-63攻毒，攻毒方法：腹腔注射2 LD₅₀(5.5×10²cfu)劑量的C74-63強毒菌液，腹腔注射2 LD₅₀(1.2×10⁸cfu)劑量的HA9801強毒菌液。觀察10 d。

1.4.2　仔豬效力檢驗　每批疫苗取妊娠母豬2頭，分別于產前35 d～40 d和15 d～20 d各肌肉注射1次，每頭3mL。產仔后隨機選出4頭～5頭仔豬人工哺乳作為對照。其余仔豬在吮食免疫母豬乳，仔豬3日齡時連同對照組，攻擊2 LD₅₀(4×10⁷cfu)劑量的C74-63強毒菌液、2 LD₅₀(1.5×10⁹cfu)劑量的HA9801強毒菌液，觀察10 d。

1.4.3　保育豬效力檢驗　20000125批疫苗肌肉注射21日齡健康豬20頭，其他批次疫苗各接種10頭，每頭2 mL,20d后加強免疫1次，免疫劑量及免疫途徑與首免一樣。間隔15 d后，連同對照組，攻擊2 LD₅₀(4×10⁷cfu)劑量的C74-63強毒菌液、2 LD₅₀(1.5×10⁹cfu)劑量的HA9801強毒菌液，觀察10 d。

2　結果

2.1　小鼠效力檢驗

Balb/c小鼠經5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接種試驗后，用豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒，疫苗平均保護率分別為90%(45/50)、74%(37/50)對照組全部死亡或發病(表1)。

表1　Balb/c小鼠的攻毒保護試驗

Table 1　Protective test againstStreptococcusin Balb/c mice

2.2　仔豬效力檢驗

哺乳仔豬經豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒后觀察10d,5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327的平均保護率分別為88.09%(37/42)、79.06%(34/43)，對照組全部死亡(表2)。

表2　哺乳仔豬免疫效力試驗

Table 2　Immune efficacy test againstStreptococcusin sucklingpiglets

2.3　保育豬效力檢驗

經5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接種試驗后，用豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒，疫苗對保育豬的平均保護率分別為90%(27/30)、76.7%(23/30)，對照組全部死亡(表3)。

表3　保育豬免疫效力

Table 3　Immune efficacy test againstStreptococcusin nursing pigs

3　討論

R群豬鏈球菌2型與C群馬鏈球菌獸疫亞種是當前我國豬鏈球菌病的兩種主要病原^[7-8]。隨著養豬業規模化程度的不斷提高，同時由于近年來豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環病毒2型感染等疫病的發生與流行，使豬鏈球菌病呈明顯的上升趨勢，嚴重威脅養豬業的發展^[9-10]。國內已有商品化的C群馬鏈球菌獸疫亞種弱毒疫苗，而豬鏈球菌病滅活苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)目前尚無產品面市。

本研究利用從江蘇病豬體內分離的R群豬鏈球菌2型強毒株HA9801與C群馬鏈球菌獸疫亞種強毒株ATCC35246，共制備了5批豬鏈球菌病滅活苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)。滅活疫苗二次免疫后用豬鏈球菌2型及其馬鏈球菌獸疫亞種強毒攻擊，對哺乳仔豬的保護率分別達到88.09%(37/42，SS2)和79.06%(34/43，SeZ)，對保育豬的保護率分別達到90%(27/30，SS2)和76.7%(23/30，SeZ)，表明滅活疫苗對哺乳仔豬、保育豬均有良好的免疫保護作用。用Balb/c小鼠進行了免疫攻毒保護平行試驗，結果對小鼠的保護率分別達到90%(45/50，SS2)和74%(37/50，SeZ)，與哺乳仔豬、保育豬顯示了良好的一致性，表明豬鏈球菌滅活苗(豬鏈球菌2型＋馬鏈球菌獸疫亞種)的免疫效果良好。