摘　要：周齡的系小鼠只，分無處理的對照組、抗癌藥物巰基嘌呤腹腔注射組組、＋倍稀釋的飲水組飲水組、＋腹腔注射組注射組個組，每組只。試驗期間定期進行體重測定。周后處死小鼠，測定胸腺脾臟系數、骨髓含量、肝臟組織過氧化脂質含量。結果表明，能引起脫毛、體重增加率下降、脾臟系數下降、肝臟損傷等副作用，能有效抑制抗癌藥物副作用，增強機體自身免疫的能力。關鍵詞：巰基嘌呤；副作用；有效微生物發酵抽取液；小鼠

20世紀90年代及21世紀初我國每年死于癌癥的人數為150萬，居各類死因之首。近幾年死亡人數持續上升，成為現代醫學最大的課題。癌癥的治療主要有手術療法、化學療法(抗腫瘤藥物)、放射療法和免疫療法4種。癌癥的化療和放療是通過阻礙細胞分裂和蛋白質的合成損傷癌細胞，但對正常的細胞也帶來損傷，而且在治療過程中會引起惡心、嘔吐、體重下降、脫發、血液毒性、臟器損傷、免疫機能下降和二次癌變等副作用，成為癌癥治療中難以克服的問題^[1]。近年來，中藥及制劑在抗腫瘤機理方面的研究也有了一些進展。尹龍等^[2]研究表明，某些中藥多糖能激活T、B淋巴細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞等免疫細胞，增強機體免疫功能，提高小鼠脾臟T細胞增殖功能和血清抗體水平。有效微生物發酵抽取液(effectivemicroorganismextract，EMX)是將米糠、木瓜、海帶及多種日本沖繩特有的保健藥草，經過有用微生物的發酵培養，提取出抗氧化物質的復合物，具有很強的抗氧化能力，在農業、食品加工和建筑等行業已被廣泛使用。由于能大幅度提高自身免疫力，作為輔助治療手段也已用于現代醫學難以治愈的疾病方面^[3]。

6-巰基嘌呤(6-Mercaptopurine,6-MP)是核酸代謝頡頏劑，在急性淋巴性、急性粒性及慢性粒性白血病治療中經常使用。但因能阻礙細胞代謝，所以會引起肝、腎損傷和抑制免疫的副作用。

本試驗通過抗癌藥物6-MP對小鼠幾項生理指標的影響及EMX的緩解效果，探討EMX緩解6-MP治療副作用的部分機理。

1　材料與方法

試劑及其儀器EMX由株式會社EM研究機構提供，批號010505,500mL裝；UV-9100型分光光度計由美國BECKMAN公司制。

試驗用動物5周齡的DDY系小鼠由日本琉球大學醫學部動物室提供。

試驗分組將40只DDY系小鼠，分無處理的對照組、6-MP 25mg/kg/周分兩次腹腔注射組(6-MP組)、6-MP＋500倍稀釋的EMX飲水組(6-MP＋EMX飲水組)、6-MP＋EMX0.1mL/2次/周腹腔注射組(6-MP，EMX注射組)4個組，每組10只。實驗期間觀察小鼠癥狀并定期進行體重測定。8周后處死小鼠，測定各項指標。

胸腺、脾臟系數測定取胸腺、脾臟測重(臟器重量mg/10 g體重)。

骨髓含量測定取出右側大腿骨，剝除肌肉組織并切去兩端關節，用10 mL 5 nmolC_aCI₂洗出骨髓，4 ℃冷藏30 min后2 500 r/min離心15 min，取除上清，沉淀物用5 mL 0.2N HCIO₂混合，90 ℃熱水中加熱15 min再用流水冷卻至室溫，過濾。在分光光度計波長268 nm處測定。

法測定肝臟組織過氧化脂質測定分別取1 g各試驗組小鼠的肝臟，加9 mL 1.15%冷卻的KCI溶液，用玻璃研磨器研碎，加0.3 mL1%的磷酸和1.0 mL TBA試劑，混合后90 ℃熱水中加熱45 min，立即用流水冷卻至室溫。加4 mL丁醇，振動后3 000r/min離心10 min，取除丁醇測定吸光度。波長選535 nm和520 nm 2處測定吸光度，利用吸光度差(A_535-520)計算出過氧化脂質含量^[4]。

統計分析用Kruskal wallis，Scheffe多重檢驗法統計。

2　結果

各試驗組之間體重變化圖1所示，各試驗組之間體重變化沒有差異。但與對照組相比，6-MP組、6-MP＋EMX飲水組、6-MP＋EMX注射組的體重增加率分別為57.62%、86.58%、80.54%,6-MP組的體重增加率最低。

圖1　各試驗組之間體重變化

Fig.1　Body weight changesamong experiment groups

胸腺、脾臟系數、骨髓含量和肝臟組織過氧化脂質的值表1表明，4個試驗組的胸腺系數之間沒有差異，但從數據上看，抗癌藥物6-MP組的系數最低；脾臟系數6-MP組和對照組、EMX6-MP＋飲水組、EMX注射組差異顯著(P＜0.01)。骨髓DNA含量6-MP＋EMX注射組的含量明顯高于其他3組(P＜0.05）。肝臟TBA值各組之間沒有顯著差異。

表1　各試驗組幾項指標的測定結果

Table 1　Measure results of several indexes amongexperiment groups

注：不同字母表示各組間差異顯著。

Note：Different letters represent significant difference amonggroups.

3　討論

試驗開始3周后，6-MP組的小鼠開始出現脫毛癥狀，8周后10只小鼠中7只出現CTCVersion2.0，grade1程度的脫毛癥狀。關于體重變化，各試驗組之間雖然沒有差異，但和對照組相比6-MP組的體重增加率僅為57.62%，說明化療藥物6-MP還是對體重增加有一定的影響。

胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，廉宜君等^[5]給小鼠灌服中藥復合多糖，能顯著提高小鼠免疫臟器指數，單核巨噬細胞系統的吞噬功能，可明顯提高機體的免疫功能。胡興昌等^[6]發現板藍根凝集素對小鼠胸腺發育和胸腺細胞的增殖具有促進作用，這必然會導致T淋巴細胞和TEC所分泌的胸腺素和多種細胞因子的增加，提高機體的免疫能力。孟慶勇等^[7]利用馬尾藻多糖，對輻射損傷小鼠巨噬細胞功能和胸腺的影響進行了研究，結果表明，馬尾藻多糖增加了淋巴細胞的轉化，對輻射的胸腺細胞起了保護作用?；熕幬锏母弊饔弥皇菗p傷免疫器官，使免疫機能下降。本試驗中，經過化療藥物處理胸腺系數各試驗組沒有明顯差異，但6-MP組的值偏低。脾臟作為血液儲藏、造血、免疫抗體產生的臟器容易受化療藥物的影響，脾臟系數6-MP組和對照組、6-MP＋EMX飲水組、6-MP＋EMX注射組差異顯著(P<0.01)。

DNA是生物體內的遺傳物質，它的穩定對生命體正常繁殖和生長是至關重要的。環境中各種理化及生物因子等，都可能影響到DNA的穩定性。本試驗中，骨髓DNA含量化療藥物6-MP組和對照組之間沒有差異，但EMX處理組的含量高于對照組和6-MP組，特別是6-MP＋EMX注射組顯著高于這兩組(P<0.05)。這和脾臟系數的結果基本一致，一般在骨髓制造的免疫細胞和血細胞在脾臟中儲藏，EMX有提高機體去除有害物質的能力，活化骨髓機能，減輕化療藥物對胸腺、脾臟、骨髓等的損傷，提高自身免疫能力。絞股藍制劑可減輕模型組小鼠大腦和肝臟組織細胞DNA的損傷程度^[8]。同樣，比嘉照夫等^[9]的研究中每日灌服EMX 10 mL和30 mL，連續灌服30d后，大鼠的骨髓DNA含量有增加的趨勢，而且胸腺皮質層的厚度增加，脾臟細胞的淋巴細胞濾泡及淋巴濾泡中B細胞區的面積增加，T淋巴細胞和B淋巴細胞的數量增加。

脂質是機體重要的自由基攻擊目標之一，其氧化生成物過氧化脂質的測定對肝臟功能的評定有重要的意義^[10]。多數化療藥物會引起肝功能的損害，肝腫大、黃疸，同時會誘發肝細胞壞死等。本試驗中肝臟組織過氧化脂質各試驗組間雖然沒有顯著差異，但3個試驗組的TBA值高于對照組，說明6-MP對肝臟組織有一定的損傷。

EMX中含有許多植物類黃酮、皂角苷化合物、輔酶Q、維生素E族類物質^[9]，這些物質能調節許多酶的活性，皂角苷化合物能增加紅細胞的SOD、LPO含量，抑制腦、肝臟組織的MDA，輔酶Q作為細胞生物氧化呼吸鏈中陽離子和電子的主要載體能改善和促進細胞代謝。以上各類物質的協同作用，加之各種微生物的代謝產物和生理活性物質，使機體的免疫功能增強。有研究發現^[11]，海參中的皂苷可提高小鼠胸腺體質量比，巨噬細胞對血液中碳粒的吞噬指數，提高體液、細胞免疫能力。GonamuM研究結果表明，EMX能顯著提高NK細胞、B細胞、T細胞活性和巨噬細胞吞噬能力^[5]。EMX能提高雞中性粒細胞對乳膠顆粒的吞噬活性和機體非特異性免疫功能^[12]。許多臨床醫生也報道EMX能明顯提高癌癥患者、糖尿病、特別是自身免疫缺陷病患者的免疫能力^[13]。所以，EMX作為癌癥的輔助治療手段，在世界各地廣為應用。有關EMX在提高機體免疫能力的機理方面還有待于進一步研究。