豬圓環病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環病毒科圓環病毒屬的成員，根據抗原性及基因組成，分為PCVl和PCV2兩種，其中PCV2對豬具有致病性，于1998年首次從患斷奶后多系統衰竭綜合征(pcst-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的病豬體內分離出來。近年來，豬圓環病毒病的發生呈上升趨勢，加拿大、美國、法國、英國等國家都報道了PMWS的發生和流行國內也不斷有關于PCV2以及與其他病原體混合感染的報道。PCV2主要侵害免疫系統，導致感染豬免疫抑制，降低機體對其他病原體的抵抗力和疫苗的反應性，容易導致其他病毒和細菌的繼發感染，使死亡率明顯升高，給養豬業造成巨大的經濟損失。

為了解該病在河北省尤其冀東地區及其臨壤京津地區的流行情況，在2006年9月至2007年10月期間，采用間ELISA方法對遷安、灤南、撫寧、廊坊、寧河、大興等9個縣(市)的22個豬場的398份豬血清檢測了PCV2抗體并進行了分析，同時用PCR方法對部分樣品進行了病原學檢測。

1 材料與方法

1．1 待檢血清樣品

樣品采自冀東、北京、天津部分地區的11個規模豬場和11個散養戶，共采集血清398份，其中繁殖母豬、后備母豬86份，種公豬17份，育肥豬149份，斷奶仔豬146份。耳靜脈或前腔靜脈采血，分離血清，—20℃存備用。

1．2 主要試劑

豬圓環病毒病ELISA診斷試劑盒，購自華中農業大學動物醫學院動物病毒研究室；蛋白酶K，購自Merck公司；Tris飽和酚，購自鼎國生物技術公司；TaqDNA聚合酶、dNTPs等購自北京天為時代科技有限公司。

1．3 引物

上游引物U：5，—AGT GAG CGG GAA AAT GCAGA-3，，下游引物L：5，-TCCTCC GTGGATTGTTCTGT-3，，由上海生工生物技術有限公司合成。

1．4 血清抗體的ELISA檢測

按照豬圓環病毒病間接ELISA檢測試劑盒說明進行抗體檢測。

1，5 血清樣品中PCV2核酸的PCR檢測

1．5．1 DNA的提取

從ELISA檢測陽性的血清樣品中隨機取14份用于PCV2 DNA提取。DNA提取過程如下取3001zL血清，加入等體積的組織裂解緩沖液，再加入蛋白酶K(20 mg／mL)至終濃度50ug／mL，于50 ℃消化2h；取出消化產物，加入等體積的Tris飽和酚，充分振蕩混勻后，4 ℃ 12 000 r/min，離心10 min；取上層水相500 ul轉入1支1．5 mLEppendorf管中，加入等體積的酚-氯仿-異戊醇混合液，混勻后，4 ℃12 000r／min，離心10min；取上層水相400 ul轉入另1支1．5 mLEppendorf管中，加入800 1&L預冷無水乙醇和3 mol／LNaAc(pH 5．2)40 uL，在—20℃放置1-2 h或室溫放置30 min以沉淀病毒DNA；4℃ 12 000r／min，離心10min，棄去上清，用70％乙醇洗滌沉淀，自然干燥后溶于20 uL滅菌蒸餾水中，立即用于PCR反應或—20℃保存備用。

1．5．2 PCR擴增

PCR反應體系為50 ul，包括10XPCR緩沖液5ul，10mmol／LdNTPs 4 ul，5 U／ul Taq DNA聚合酶1／ul，25 pmol／L上、下游引物各1 ul+DNA模板3 ul，無菌去離子水38 uL。PCR擴增條件為94 ℃預變性3 min；94℃變性45 s，56 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，32個循環；72℃延伸10min。DNA產物用1．2％瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2 結果

2．1 血清抗體的ELISA檢測

共檢測了22個豬場(含散養戶)，除了2個散養戶外，被檢養豬場均有不同程度的PCV2感染，陽性豬場數為90．9％；被檢測的398份血清中，檢出PCV2抗體陽性血清335份，PCV2抗體的平均陽性率為84．2％，豬場最高感染率達93．2％，最低為62．2％。被檢的血清樣品中種母豬抗體陽性率為86％，種公豬抗體陽性率為88．2％，育肥豬抗體陽性率為85．2％，斷奶仔豬抗體陽性率為76．7％，呈現出PCV2感染隨豬年齡增長而升高的趨勢，這與郎洪武等的報道相一致。抗體檢測結果詳見表1、2。

2．2 PCV2的PCR檢測

對隨機選取的14份PCV2抗體陽性的豬血清進行了PCR檢測。結果，從6份血清中擴增出了預期長度為417 bp片段。結果見圖1。

3 討論

本試驗主要從秦皇島、唐山、北京及天津地區的11個規模養殖場和11個散養戶中隨機采集豬血清樣本進行PCV2病原和抗體檢測，涉及到了不同類型的豬場，具有一定的區域代表性。從不同豬場不同年齡段豬的PCV2抗體檢測結果來看，被檢豬場有不同程度的PCV2感染，平均抗體陽性率為84．2％，其中種母豬抗體陽性率86％，種公豬抗體陽性率88．2％，育肥豬抗體陽性率85．2％，斷奶仔豬抗體陽性率76．7％，斷奶豬的陽性率隨年齡增長而升高。母豬的陽性檢出率明顯高于斷奶仔豬、育肥豬，但是否與種豬帶毒、持續感染、垂直傳播以及抗體消長等有關還有待進一步揭示。平均抗體陽性率高于2004年李鵬等報道的河北省規模養豬場PCV2總抗體陽性率76．8％的結果，這在一定程度上反映了PCV2感染率上升的趨勢。

近年來豬價居高不下，養豬效益高，大量從外地引進豬只，貿易交流頻繁，檢疫不嚴，加之飼養管理較粗放，獸醫衛生制度不健全是本病廣泛存在和流行的主要原因。散養戶的抗體陽性率較高(92．6％，50／54)，這與筆者在乎時豬病檢驗中發現的規律相吻合。散養戶進豬途徑較廣，往往將不同來源仔豬混合飼養，容易將病原引進并造成擴散。因此，應提倡自繁自養、全進全出的飼養方式，或采用美國的分點式和合同式養豬生產模式更有利于對圓環病毒感染和豬繁殖與呼吸綜合征等疾病的控制。

鑒于目前豬病容易混發、病原復雜的實際情況，在對上述豬場進行流行病學調查基礎上，選取調查豬場中具有疑似PCV2感染臨床表現且PCV2血清抗體陽性的豬只，采用PCR方法對病原進行了檢測。結果顯示，在14份被檢血清中檢出陽性樣品6份，分布在6個豬場。這一檢測結果進一步證實了PCV2感染引起的豬病的客觀性及危害性，也在一定程度上表明了PCV2感染中抗體陽性率與PCV2持續性感染之間的關系，二者的相關性有待進一步研究。但據有關資料介紹，豬單純感染PCV2病毒，僅產生溫和的臨床癥狀，很少死亡，臨床上多與PRRSV或PPV等混合感染，這可能由于圓環病毒使機體免疫功能受到抑制，從而引起其他病的繼發感染或并發感染，但究竟PCV2與PRRSV、PPV發病機理上的相關性如何，尚需進一步研究。

PCV2在豬群中的高感染率已經對養豬業的發展構成了威脅，應盡快研究有效防治措施。目前還沒有切實可行的能夠完全控制和消滅PCV2感染的方案，采取一般防疫措施可以降低該病造成的損失。例如科學飼養管理，減少各種應激；嚴格檢疫制度，定期監測，及時淘汰陽性豬只；商品豬場盡量從同一個健康繁殖豬場進豬并合理分群，以減少和降低豬群之間PCV-2及其他病原的接觸感染機會；有效預防和控制其他感染性疾病，做好豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征等疫苗的免疫接種，提高豬群整體的免疫水平。