摘　要：附植是指哺乳動(dòng)物囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞與母體子宮上皮細(xì)胞之間逐步建立組織生理上聯(lián)系的過程。成功的附植有賴于胚泡與母體相互識(shí)別，胚泡發(fā)育與母體子宮變化的同步以及抑制母體的免疫排斥反應(yīng)和母體接受性等一系列事件。這些事件又受到母體和胚泡的激素以及一些因子的調(diào)控。傳統(tǒng)中藥可通過提高孕酮的含量、類雌激素樣作用、治療子宮內(nèi)膜炎的作用以及影響白血病抑制因子和白細(xì)胞介素1的表達(dá)量來促進(jìn)山羊胚胎附植。文章主要論述了哺乳動(dòng)物胚胎附植的機(jī)制以及中藥對(duì)胚胎附植的影響，這有助于進(jìn)一步闡明中藥保胎的作用機(jī)理。

關(guān)鍵詞：哺乳動(dòng)物；胚胎附植；中藥；保胎

附植是指哺乳動(dòng)物囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞與母體子宮上皮細(xì)胞之間逐步建立組織生理上聯(lián)系的過程。附植是整個(gè)妊娠最重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，生產(chǎn)實(shí)踐和研究表明山羊的胚胎丟失主要發(fā)生在妊娠的早期，所以有關(guān)山羊以及其他哺乳動(dòng)物胚胎附植的研究受到國(guó)內(nèi)外的高度關(guān)注，并取得了一定進(jìn)展。傳統(tǒng)中藥在保胎促進(jìn)胚胎附植方面有其得天獨(dú)厚的療效，動(dòng)物保胎的臨床實(shí)踐和相關(guān)作用機(jī)理有許多研究報(bào)道。本文結(jié)合哺乳動(dòng)物胚胎附植機(jī)制的研究進(jìn)展和中藥保胎的研究探索，綜述了哺乳動(dòng)物胚胎附植機(jī)制、中藥保胎臨床與作用機(jī)理研究進(jìn)展。

1　哺乳動(dòng)物胚胎附植機(jī)制的研究進(jìn)展

成功的附植有賴于胚泡與母體相互識(shí)別，胚泡發(fā)育與母體子宮變化的同步以及抑制母體的免疫排斥反應(yīng)和母體接受性等一系列事件[1]。這些事件又受到母體和胚泡的激素的調(diào)控。在附植中主要涉及到的激素有雌激素、孕激素和前列腺素。此外，還包括一些因子，如白血病抑制因子和白細(xì)胞介素等。

1.1　雌激素

雌激素(estrogen)主要由卵巢皮質(zhì)的成熟卵泡內(nèi)膜細(xì)胞合成和分泌。在妊娠期間人、馬、牛、豬、綿羊和山羊的胎盤能分泌雌激素。此外，胚泡也可以分泌和合成雌激素，雌激素的主要作用是促進(jìn)雌性副性器官以及與生殖有關(guān)的其他器官的生長(zhǎng)、發(fā)育和功能成熟，其中對(duì)雌性生殖道的作用最為突出。首先，雌激素對(duì)子宮的作用是促進(jìn)子宮發(fā)育、肌層變厚、內(nèi)膜增生、腺體和血管增多[2]、子宮頸腺分泌加強(qiáng)以及增強(qiáng)子宮的收縮力[3]。此外，雌激素還可促進(jìn)輸卵管上的纖毛上皮增生和纖毛運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)。纖毛向子宮方向的擺動(dòng)有利于受精卵轉(zhuǎn)移到子宮。雌激素還可使輸卵管平滑肌蠕動(dòng)，特別是由子宮向卵巢方向的蠕動(dòng)。這種蠕動(dòng)有助于運(yùn)送精子到達(dá)輸卵管壺腹部和卵子結(jié)合。而對(duì)于受精卵向子宮移動(dòng)又起著延緩的作用，使受精卵在輸卵管中有足夠的時(shí)間完成胚泡的早期發(fā)育，為附植做好準(zhǔn)備。

胚泡分泌的雌激素是控制附植的一個(gè)必不可少的因素，因?yàn)樵陬A(yù)期的附植位點(diǎn)處，附植前呈現(xiàn)出一種炎癥反應(yīng)(如毛細(xì)血管的通透性增加)。業(yè)已證明的是孕酮可以起到抗炎劑的作用，對(duì)于全子宮來說，由于孕酮占優(yōu)勢(shì)而使附植局部的炎癥反應(yīng)受到抑制。因此，只有降低附植局部的孕酮優(yōu)勢(shì)，才有可能出現(xiàn)附植前的炎癥反應(yīng)。而這種頡頏孕酮作用的物質(zhì)就是雌激素[4]。胚泡含有的雌激素可使附植局部的毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，降低孕酮的作用，出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，從而促進(jìn)胚泡附植。

在著床前，子宮內(nèi)膜中表達(dá)雌激素受體的時(shí)間與胚胎分泌雌激素的時(shí)間同步[5]。可能胚胎來源的雌激素直接和子宮內(nèi)膜表達(dá)的雌激素受體相互作用從而啟動(dòng)了著床。

1.2　孕激素

孕激素(progestogen)是由卵巢內(nèi)的成熟卵泡排卵后所形成的黃體分泌和合成。在妊娠期間，人、馬和綿羊的胎盤也可分泌孕激素。體內(nèi)分泌和存在于血漿中的天然孕激素主要是孕酮，另外還有17α羥孕酮，20β羥孕酮和20α羥孕酮。所以我們常常用孕酮來表示孕激素，它是妊娠維持的必要條件。孕激素總的作用是在雌激素作用的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步作用于生殖道。使這些器官適于受精卵的附植，并有利于維持妊娠。沒有雌激素的預(yù)先作用，孕激素就不能發(fā)揮作用。但是，單有雌激素的作用，生殖道也不能完成受孕和妊娠活動(dòng)。孕激素對(duì)子宮的作用主要表現(xiàn)在使子宮內(nèi)膜增厚，積聚水分，子宮腺體增生并分泌被稱為“子宮乳”的黏液[6]，為胚泡提供營(yíng)養(yǎng)和為附植做準(zhǔn)備。其次，使子宮內(nèi)膜發(fā)生蛻膜反應(yīng)[7]。當(dāng)胚泡與處于孕前期的子宮的子宮內(nèi)膜接觸時(shí)，局部會(huì)迅速增生，把胚泡包圍起來，馬的子宮還會(huì)形成特殊的子宮“內(nèi)膜杯”。這是胚泡附植的重要過程。因?yàn)檫@部分內(nèi)膜在分娩時(shí)將隨胎兒排除，所以把這部分包住胚泡的內(nèi)膜叫蛻膜。靈長(zhǎng)類和肉食類等有比較典型的蛻膜反應(yīng)；牛、羊、豬等沒有真正的蛻膜反應(yīng)。此外，孕激素還可降低子宮肌的興奮性。使其對(duì)雌激素、催產(chǎn)素等雌激素的敏感性大大降低，從而使動(dòng)物的妊娠得以維持。

雌激素、孕酮分泌的調(diào)節(jié)，主要是通過下丘腦-垂體-性腺軸這個(gè)途徑進(jìn)行的。下丘腦促垂體區(qū)分泌的促性腺激素釋放激素(gonadotropinreleasing hormone，GnRH)作用于垂體，從而使垂體分泌促性腺激素，促性激素包括卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)和黃體生成素(luteinizing hormone，LH)。FSH促進(jìn)卵泡的成熟，從而作用于卵巢使卵巢內(nèi)的卵泡成熟分泌雌激素。LH促進(jìn)排卵和黃體生成從而使孕激素分泌增多。同時(shí)，雌激素、孕酮在不同條件下對(duì)下丘腦-垂體的相應(yīng)促激素起正或負(fù)反饋?zhàn)饔谩］^大量的雌激素持久作用，可抑制FSH和LH的分泌。這種負(fù)反饋調(diào)節(jié)的作用部位主要在下丘腦，即抑制GnRH的分泌。發(fā)情周期中期排卵前，血漿中雌激素濃度迅速升高，對(duì)下丘腦起正反饋?zhàn)饔茫偈笹nRH的分泌增多。后者，再促使FSH和LH的分泌，導(dǎo)致排卵和黃體的形成。如果動(dòng)物妊娠，大量的孕激素的持久刺激對(duì)下丘腦產(chǎn)生負(fù)反饋?zhàn)饔茫璧K卵泡成熟和排卵，從而使動(dòng)物的妊娠得以維持。

1.3　前列腺素

子宮內(nèi)膜來源的前列腺素F2α(prostaglandin，PGF2α)，是大多數(shù)哺乳動(dòng)物特別是家畜和嚙齒類動(dòng)物的主要溶黃體物質(zhì)。功能性和結(jié)構(gòu)性退化似乎都由PGF2α聯(lián)協(xié)同其他因子引起的。在家畜等許多動(dòng)物中，子宮內(nèi)膜分泌的PGF2α聯(lián)是影響黃體退化的主要因素，而嚙齒類、兔和靈長(zhǎng)類黃體來源的PGF2α聯(lián)是主要的溶黃體物質(zhì)[8]。在反芻類家畜，黃體退化是由黃體分泌的催產(chǎn)素(oxytocin，OT)協(xié)同PGF2α，并在雌孕激素的調(diào)節(jié)下以旁分泌相互作用的結(jié)果。OT由大黃體細(xì)胞產(chǎn)生并以分泌顆粒的形式貯存于細(xì)胞質(zhì)，在子宮陣發(fā)性分泌的PGF2α刺激下脈沖式釋放。OT與子宮內(nèi)膜OT受體結(jié)合后激活磷酸肌醇-PKC信號(hào)系統(tǒng)，促進(jìn)子宮吸收Ca2＋，刺激子宮內(nèi)膜分泌更多的PGF2α，兩者形成的正反饋環(huán)路使黃體迅速退化[9]。在大鼠黃體退化中，PGF2α可以促進(jìn)卵巢一氧化氮合酶(NOS)活性，而一氧化氮(NO)也促進(jìn)卵巢PGF2α表達(dá)，兩者呈正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制[10]。此外，OT也能增加大鼠卵巢組織中NOS活性[11]。因此，PGF、NO和OT間的相互調(diào)節(jié)可促使哺乳動(dòng)物黃體退化。

如果動(dòng)物妊娠，胚胎和胎膜分泌某些激素，例如干擾素(interferon，IF)，可作用于子宮和黃體，抵消PGF2α聯(lián)的作用[12]，使黃體繼續(xù)保持正常功能。例如，豬11 d～13d的胚泡分泌的雌激素是一種促黃體物質(zhì)，具有維持黃體的作用。而黃體所分泌的孕酮又可被胚泡利用，轉(zhuǎn)為雌激素。這樣胚泡和黃體之間就發(fā)生互相促進(jìn)和互相依賴的關(guān)系。從而使妊娠得以繼續(xù)。

1.4　白血病抑制因子

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)屬表皮生長(zhǎng)因子家族，因其能促進(jìn)骨髓M1型白血病細(xì)胞的分化，抑制白血病的發(fā)展而得名。LIF是一種多功能細(xì)胞因子，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、生存都有重要的作用。1992年Stew等用小鼠LIF基因敲除試驗(yàn)證實(shí)[13]，LIF是小鼠胚胎著床不可缺少的因子。LIF在綿羊胚泡著床前期和著床期的子宮中也有表達(dá)。羊胚胎在妊娠第16天時(shí)發(fā)生胚胎著床。在其著床前后的子宮內(nèi)LIF的表達(dá)出現(xiàn)一個(gè)峰值。羊妊娠第16天～第20天時(shí)子宮內(nèi)膜LIFmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量最高，主要分布在子宮肉阜及子宮肉阜間區(qū)的內(nèi)膜腔上皮。而子宮內(nèi)膜腺體及子宮肉阜間的基質(zhì)內(nèi)表達(dá)量較低，在妊娠第17天時(shí)胚泡外周的滋養(yǎng)層細(xì)胞上也有LIF的表達(dá)[14]，LIF可能在羊的胚胎著床過程中也起著重要的調(diào)節(jié)作用。

1.5　白細(xì)胞介素1

白細(xì)胞介素1(interleukin-1，IL-1)系統(tǒng)包括IL-1α、IL-β、IL-1受體頡頏劑(IL-1rα)和信號(hào)傳導(dǎo)受體(IL-1RtI)。IL-1系統(tǒng)在圍著床期間內(nèi)膜上皮和滋養(yǎng)葉細(xì)胞都有表達(dá)，通過IL-1α、IL-β與受體的連接機(jī)制，使胚胎與內(nèi)膜黏附，但各成員之間表達(dá)量的比例影響著床率。IL-1α、IL-β認(rèn)為與促進(jìn)著床有關(guān)，IL-1rα通過影響內(nèi)膜整合素α4、αv、β3，表達(dá)從而抑制著床。IL-β是一重要調(diào)節(jié)因子，它可以使子宮內(nèi)膜上皮瘦素(1eptin)、瘦素受體以及整合素β3等表達(dá)上調(diào)，對(duì)著床有促進(jìn)作用，而瘦素進(jìn)一步能正向調(diào)節(jié)IL-1系統(tǒng)表達(dá)，啟動(dòng)子宮內(nèi)膜接受性和滋養(yǎng)葉細(xì)胞的浸潤(rùn)性[15]。

2　中藥保胎作用機(jī)制的研究

2.1　通過影響母體孕酮水平促進(jìn)附植

如上所述，孕酮是維持妊娠的基本激素，可促使子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化成蛻膜細(xì)胞，它含有大量糖原顆粒，為孕卵提供營(yíng)養(yǎng)，有利于胚泡附植。著床后對(duì)妊娠子宮收縮有抑制作用，使孕卵不致排出體外，從而起到維持妊娠的作用。胡也莉等[16]證明，蓮地合劑能增強(qiáng)妊娠大鼠體內(nèi)黃體和胎盤功能，提高孕激素和胎盤催乳激素含量。同時(shí)能降低妊娠大鼠外周血NK細(xì)胞活性，增強(qiáng)機(jī)體免疫抑制的作用，從而起到治療先兆性流產(chǎn)和保胎效果。

周蜻等[17]證明，安胎合劑對(duì)妊娠大鼠孕激素水平無顯著影響，但是該方劑可能使米非司酮(Ru486)與孕激素受體(progesteronereceptor，PR)的結(jié)合率降低，增加了靶細(xì)胞PR的含量，即安胎合劑可能有對(duì)妊娠大鼠子宮蛻膜孕激素受體增加含量促進(jìn)黃體功能的作用，從而起到治療先兆性流產(chǎn)和保胎效果。

徐麗君等[18]報(bào)道，補(bǔ)腎益氣活血湯具有孕激素樣作用，可使子宮上皮的腺體增生、間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生蛻膜樣改變以及使間質(zhì)血管豐富，從而起到促進(jìn)小鼠胚胎著床的效果。

2.2　通過母體影響雌激素水平促進(jìn)附植

植物性雌激素主要指植物中所含有的類似雌激素樣作用的化合物，它們具有雌激素作用，能與雌激素受體結(jié)合，產(chǎn)生一系列雌激素所應(yīng)有的生理反應(yīng)[19]。常見的植物性雌激素有黃酮類化合物、木脂素和香豆素等。黃酮類化合物種類繁多，大部分以苷的形式存在。許多中藥如黃芪、黃芩、三七、柴胡、白果、麥冬、仙鶴草、蘆薈、木賊、虎杖、羅布麻、金錢草、魚腥草、陳皮、葛根、銀杏葉、桑寄生、桑葉、槐米、高良姜等都含有黃酮或異黃酮類成分；桑白皮、陳皮、甘草、滿山紅、紫花杜鵑中含有二氫黃酮；槐花、紫菀、銀杏葉、滿山紅葉中含有黃酮醇。木脂素在植物體內(nèi)多數(shù)是游離的，也有少量與糖結(jié)合成苷而存在。中藥如五味子、連翹、牛蒡子、細(xì)辛等含木脂素。香豆素在植物體內(nèi)多以游離狀態(tài)或與糖結(jié)合成苷的形式而存在補(bǔ)骨脂、蛇床子、白芷、前胡、獨(dú)活、茵陳、秦皮等都含有這類成分[20]。此外，現(xiàn)代研究表明，具補(bǔ)腎強(qiáng)筋功效的淫羊藿、補(bǔ)骨脂均具有雌激素樣作用[21]。趙丕文等試驗(yàn)結(jié)果顯示[22]，紅花、川牛膝、丹參、枸杞、肉蓯蓉、淫羊藿、補(bǔ)骨脂和菟絲子等中藥含藥血清均可表現(xiàn)出雌激素樣作用。臨床上通過合理利用這些具有雌激素樣作用的中藥，可以達(dá)到促進(jìn)胚胎附植以及保胎的目的。

此外，張曉軍等[23]研究表明中藥方劑排卵助孕湯能使血清性激素含量明顯變化，LH、FSH、P4均較治療前明顯升高，泌乳激素(PRL)明顯降低，并使LH、FSH在排卵前形成高峰，從而促進(jìn)排卵著床，說明該方主要通過調(diào)整生殖內(nèi)分泌功能而起治療作用。

2.3　通過影響母體子宮內(nèi)膜炎癥因子來影響附植

子宮內(nèi)膜炎，通常是子宮黏膜發(fā)生黏液性或化膿性炎癥，由于子宮內(nèi)膜炎導(dǎo)致孕卵不能附植是母牛不孕的主要原因之一。中藥“激妊保”在治療母畜子宮內(nèi)膜炎引起的屢配不孕病方面有其獨(dú)特的療效[24]。該配方以下幾個(gè)方面的作用提高患牛的受胎機(jī)會(huì)。①?gòu)?qiáng)壯興奮的作用。刺激調(diào)動(dòng)患牛“機(jī)體本身的機(jī)能反應(yīng)狀態(tài)”，強(qiáng)化生殖器官功能，提高炎性子宮抗病力。②去淤生新的作用。促進(jìn)子宮內(nèi)膜的血液循環(huán)，腺體的分泌，使子宮內(nèi)炎性環(huán)境有所改善。為受精卵著床作準(zhǔn)備。③根據(jù)“精子在受精前需要在母牛生殖道內(nèi)經(jīng)過一系列生理、生化改變后，才具備受精的能力”和“母牛發(fā)情開始后大約經(jīng)過20h才排卵”這些特點(diǎn)，將“激妊保”安排在配種前服用，以提高精子在母牛炎性生殖道內(nèi)保持受精能力的時(shí)間，和促進(jìn)母畜排卵或促進(jìn)激素的分泌。

此外，中藥新促孕液在治療母畜子宮內(nèi)膜炎方面也有其獨(dú)特的療效。該方劑能顯著減輕子宮內(nèi)膜炎的臨床癥狀，顯著降低子宮組織中TNF-α的含量以及減少子宮內(nèi)膜中炎性細(xì)胞數(shù)量[25]。

2.4　通過影響母體子宮內(nèi)膜LIF表達(dá)來影響附植

1992年Stew等用小鼠LIF基因敲除試驗(yàn)證實(shí)，LIF是小鼠胚胎著床不可缺少的因子。中藥通過上調(diào)LIF的表達(dá)，進(jìn)而影響胚胎的著床。蔣曉芳等[26]證實(shí)，服用健胎液組小鼠子宮內(nèi)膜LIF的表達(dá)增加可能是以旁分泌的形式促進(jìn)上皮分泌LIF。前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)健胎液可促進(jìn)前列腺素合成酶的表達(dá)，促進(jìn)前列腺素PGI的合成，促進(jìn)血管的通透性及間質(zhì)蛻膜化反應(yīng)。間質(zhì)旁分泌因子增多，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforminggrowth factor， TGF)，肝素結(jié)合樣生長(zhǎng)因子(heparin-binding EGF-like growthfactor，HB-EGF)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等通過促進(jìn)上皮的分化，促進(jìn)上皮的分泌反應(yīng)，以促進(jìn)LIF的分泌。同時(shí)IL-6可部分補(bǔ)償LIF的功能[27]，隨著LIF的表達(dá)量的增加，小鼠胚胎著床數(shù)也相應(yīng)的增加。總之，健胎液可以通過上調(diào)LIF的表達(dá)量這一途徑，促進(jìn)小鼠的胚胎著床。

2.5　通過影響母體子宮內(nèi)膜IL表達(dá)來影響附植

黃桂香等[24]，添加當(dāng)歸芍藥散后，劑量依賴性促進(jìn)雌二醇分泌，中性白細(xì)胞游走因子(CINC)的產(chǎn)生量呈劑量依賴性增加，IL-1β、TNF-α也呈劑量依賴性增加。結(jié)果表明，當(dāng)歸芍藥散對(duì)黃體酮沒有影響，但可激活促黃體生成激素，使IL-1β、TNF-α增加，進(jìn)而增強(qiáng)CINC的活性。CINC增加后，使中性白細(xì)胞聚集并產(chǎn)生膠原酶和前列腺素，溶解卵泡膜，調(diào)整適于排卵的環(huán)境，促進(jìn)卵子從卵泡中排出。

此外，補(bǔ)腎益氣活血湯中丹參所含有的丹參素，為一水溶性成分，不僅能激活單核吞噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8，還能抑制由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的上述因子的分泌，所以丹參素對(duì)TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8可能具有“雙向性”的調(diào)節(jié)作用[28]。而TNF-α、IL-8是一種化學(xué)趨化性因子，可以促進(jìn)血管生成，從而可以促進(jìn)胚胎的附植。