由于抗生素類藥物的大量應用,耐藥性菌株不斷產生,為疾病的防治帶來了困難;同時,畜產品中藥殘問題嚴重影響了我國肉雞產品的出口、危害人類健康。而中藥具有安全、低毒、低殘留、不易產生抗藥性等優點。因此為提高機體的免疫力和飼料轉化率,減少養禽業對抗菌藥物的過分依賴,降低藥物殘留,滿足消費者對優質畜產品的需求,開展對中藥的開發與利用,具有重要的意義。??
1 材料與方法
1.1 材料??
1.1.1 實驗動物 1日齡艾維茵肉用雛雞120只。 泰安市泰偉種雞廠提供。??
1.1.2 藥物 NDⅣ系疫苗,齊魯動物保健品廠生產(批號:210212);中藥添加劑組(中藥制劑):由黃芪、黨參、茯苓、甘草、山楂、麥芽、神曲組成。由山東農業大學中獸醫教研室提供,經水煎、過濾、濃縮成??1∶??1的水煎液;對照組1(US添加劑):美國某公司生產;對照組2(中藥對照組):由黃芪、淫羊藿和板藍根組成,選自《中國獸藥典》。
1.1.3 ND紅細胞凝集抗原 由山東農業大學動物科技學院預防醫學系提供。??
1.1.4 血細胞自動分析儀F820 日本希森美康株式會社生產。??
1.2 方法??
1.2.1 分組及投藥 將120只1日齡肉雞隨機分為4組,每組30只。中藥添加劑組、對照組1和對照組2從第2天開始投藥,分別按飼料量1%添加藥物??瞻讓φ战M不添加任何藥物,按常規方法飼養。??
1.2.2 檢測指標
(1)ND抗體水平:分別于7、21日齡用NDVⅣ系免疫,在19、28、35日齡時檢測ND抗體水平。
(2)免疫器官指數測定:飼養至45日齡時撲殺所有雞只,采集脾臟、法氏囊,用濾紙吸取表面的水分后,用精密天平稱重,根據與體重之比計算脾臟、法氏囊的器官指數。
(3)血細胞測定:45日齡時翅靜脈采血, 每只雞準確吸取鮮血20 μl, 置于稀釋液中混勻,用血細胞分類計數儀進行檢測。
(4)體重:分別于1、7、14、21、28、35、45日齡稱重,觀察各階段雞體重增長情況。??
1.2.3 統計方法 采用SPASS軟件進行數據處理。??
2 結果??
2.1 免疫效果??
2.1.1 各試驗組ND疫苗免疫后HI抗體效價 見表1。
表1 不同日齡血清ND抗體效價的變化(n log2)
日齡 中藥組 對照組1 對照組2 空白對照組
19 3.170±0.252 3.500±0.200 2.600±0.100 3.000±0.200
28 8.300±0.252 6.900±0.300 7.300±0.300 7.200±0.300
35 7.600±0.250 8.500±0.200 8.000±0.300 7.600±0.200
由表1可知,在二免前4組抗體水平相差不大,但是在二免疫后中藥添加劑組抗體水平明顯高于3個對照組,差異極顯著(P<0.01)。表明該中藥制劑能增強免疫效果,使抗體水平能夠迅速提高。??
2.1.2 免疫器官指數 見表2。??
由表2可知,中藥添加劑組法氏囊指數明顯高于對照組2和空白對照組,差異顯著(P<0.05),而與對照組1差異不顯著(P>0.05)。脾臟指數均高于3個對照組,差異極顯著(P<0.01)。??
2.1.3 血細胞計數 見表3。??
由表3可知,中藥添加劑組的WBC+RBC水平與3個對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。對照組1與對照組2和空白對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。中藥添加劑組的血液中HGB水平與3個對照組相比有顯著差異(P<0.05)。其WCH水平與對照組1和空白對照組相比差異顯著(P<0.05),與對照組2沒有顯著差異(P>0.05)。??
2.2 對肉雞增重的影響??
2.2.1 實驗雞體重的變化 見表4。??
由表4可知,4個試驗組初始重沒有顯著差異(P>0.05),出欄體重中藥添加劑組、對照組1與對照組2均高于空白對照組,差異極顯著(P<0.01)。平均日增重4個組之間沒有顯著差異(P>0.05)。
表2 各試驗組法氏囊指數和脾臟指數
中藥組 對照組1 對照組2 空白對照組
法氏囊(mg/g) 1.012±0.012 0.996±0.100 0.748±0.100 0.797±0.047
脾(mg/g) 1.517±0.027 1.230±0.030 1.378±0.078 1.363±0.033
注:法氏囊指數=法氏囊重(mg)/體重(g);脾臟指數=脾臟重(mg)/體重(g)
表3 各試驗組血細胞分類計數結果
中藥組 對照組1 對照組2 空白對照組
WBC+RBC(×1012/Q) 7.29±1.00 6.68±1.80 5.88±2.00 5.96±2.00
HGB(g/Q) 103.30±2.85 91.60±1.60 97.00±4.00 96.50±6.50
WCH(pg) 4.26±0.26 3.57±0.17 4.10±0.20 3.68±0.20
表4 各試驗組體重增長情況(g)
中藥組 對照組1 對照組2 空白對照組
4日齡 56.00±3.00 55.00±2.00 57.00±3.00 56.80±1.42
45日齡 1845.00±5.00 1827.00±17.00 1832.00±12.00 1704.00±4.00
平均日增重 40.00±3.00 39.00±3.00 39.33±4.51 36.00±6.00
2.2.2 料肉比 見表5。
表5 各試驗組料肉比
中藥組 對照組1 對照組2 空白對照組
料肉比 2.28±0.07 2.30±0.08 2.29±0.06 2.47±0.07
由表5可知,中藥添加劑組、對照組1和對照組2料肉比明顯低于空白對照組,差異顯著(P<0.05)。而該3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。
2.3 發病情況 15日齡時,空白對照組死亡1只,體重80 g。對照組2死亡1只,體重120 g。剖檢均為典型的大腸桿菌引起的心包炎、肝周炎。其他雞群生長良好,未見異常。
3 討論與分析
3.1 該中藥方劑由黃芪、黨參、山楂、麥芽等組成。其中黃芪補氣健脾為主藥,具有免疫增強作用。已有試驗證明,黃芪多糖可增強紅細胞免疫功能、顯著提高雛雞T淋巴細胞轉化率,加速免疫器官發育完善,還能顯著增強雛雞外周血中NK細胞活性,具有免疫促進作用。近年來研究發現,紅細胞不僅運送氧氣和二氧化碳,同時也具有重要的免疫功能。它具有識別、黏附、濃縮、殺傷抗原、清除免疫復合物的能力,參與機體免疫調控。而白細胞在對病原體的吞噬方面和免疫過程中起著重要的作用。本試驗中,在血細胞分類記數時,由于雞的紅細胞有核,因此WBC和RBC計數在一起。結果表明,細胞總數比空白對照組高1.33×1012/Q,說明紅細胞與白細胞數量明顯增多。參與機體免疫調控的細胞數量增多,有利于提高機體免疫力和清除體內的病原微生物。說明該中藥制劑對于肉雞的細胞免疫具有增強作用。
3.2 據報道,法氏囊、脾臟、胸腺的重量可用來評價雛雞的免疫狀況。法氏囊是禽類重要的中樞免疫器官,是誘導淋巴干細胞成為免疫活性細胞,并將其輸送給外周免疫器官的場所。來自于骨髓的多能干細胞,經血流進入法氏囊后分化成為B細胞,經淋巴和血液循環移至外周免疫器官的非胸腺依賴區并繼續增殖,參與體液免疫。研究證明,如雛雞法氏囊萎縮則雛雞不能產生抗體,如果法氏囊發育良好,則有利于抗體水平的提高。脾臟是體內最大的免疫器官,是產生抗體的主要基地。本試驗中,中藥添加劑組肉雞的法氏囊指數和脾臟指數均高于其他3個對照組,表明其中樞及外周免疫器官發育正常,參與免疫應答的作用強。在ND疫苗二免7天后抗體水平比對照組高1個滴度,并且所采樣品中各個雞產生抗體水平比較均一。同時WBC和RBC水平也高于對照組,表明該中藥添加劑對肉雞的體液免疫和細胞免疫均有促進作用。
3.3 本方劑中黃芪補氣健脾為主藥,輔以山楂和麥芽,助其行氣化積、消食、健脾胃之功效,特別適合于禽類消化道較其他動物短的特點。試驗結果表明該中藥添加劑組平均體重均高于對照組;料肉比明顯低于空白對照組。說明本方的確具有明顯提高肉雞飼料利用率、促進增重的效果。??
3.4 中藥制劑對于疾病的預防是一個整體水平的提高。本試驗中藥添加劑組肉雞未見任何異常,而對照組2和空白對照組有2只雞死于大腸桿菌, 表明其在提高機體抵抗力的同時,對體內的大腸桿菌有明顯抑制作用。