禽白血病，特別是J亞型白血病（俗稱血管瘤）近兩年來在我國肆虐橫行，給家禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，更給一些種禽企業(yè)帶來巨大的負(fù)面影響，一些地方養(yǎng)殖場(chǎng)戶的投訴事件屢屢發(fā)生，與種禽企業(yè)之間的糾紛不斷。為此，許多專家和企業(yè)都開展了對(duì)禽白血病特別是血管瘤型白血病的調(diào)查和研究，從而弄清了禽白血病的病因，并制定了許多科學(xué)有效的防控方案。目前許多種禽企業(yè)通過采取綜合性的生物安全措施，已對(duì)該病在本場(chǎng)內(nèi)實(shí)現(xiàn)了徹底的凈化。為了幫助廣大業(yè)內(nèi)同仁進(jìn)一步認(rèn)清禽白血病的流行和發(fā)病規(guī)律，還其本來面目，以便在今后的生產(chǎn)實(shí)踐中能夠防范本病的發(fā)生和蔓延，我們組織了有關(guān)這方面的文章，現(xiàn)予刊登，以饗讀者。
近兩年來，全國各地蛋雞場(chǎng)在開產(chǎn)后發(fā)生白血病/血管瘤的病例報(bào)告普遍顯著上升，且在互聯(lián)網(wǎng)上廣泛流傳。病毒分離鑒定表明，這兩年在蛋雞場(chǎng)開產(chǎn)后發(fā)生的白血病／血管瘤主要是由J亞群禽白血病毒引起，但同時(shí)有的也是由A、B亞群白血病毒感染引起。實(shí)際上，J亞群禽白血病毒引發(fā)髓樣細(xì)胞瘤早在上世紀(jì)90年代就已隨引種傳人我國，先是給我國白羽肉雞帶來了很大損失，又進(jìn)一步傳入我國地方品系三黃雞和蛋用型雞。下面就雞白血病及其在我國的流行狀態(tài)和防控措施作一個(gè)簡要的闡述。
1 禽白血病病毒及其流行特點(diǎn)
1.1禽白血病毒(ALV)的一般特點(diǎn)
ALV是一種基因組為單股RNA的反轉(zhuǎn)錄病毒，類似于人的艾滋病毒，但不感染人。不同的鳥類可能感染不同的ALV，根據(jù)病毒與宿主細(xì)胞特異性相關(guān)的囊膜蛋白的抗原性，ALV可分為A、B、C、D、E、F、G、H、I和J十個(gè)亞群。但自然感染雞群的只有A、B、C、D、E和J六個(gè)亞群。其中的J亞群致病性和傳染性最強(qiáng)，而E亞群是非致病性或者致病性很弱。
1.2外源性病毒和內(nèi)源性病毒
ALV與其他病毒不同的一個(gè)最大特點(diǎn)是，雞的ALV還可分為外源性ALV和內(nèi)源性ALV兩大類。雞的外源性ALV是指不會(huì)通過宿主細(xì)胞染色體傳遞的ALV，包括A、B、C、D和J亞群，致病性強(qiáng)的雞ALV都屬于外源性病毒。它們既可以象其他病毒一樣在細(xì)胞與細(xì)胞間以完整的病毒粒子形式，或個(gè)體與群體間通過直接接觸或污染物發(fā)生橫向傳染，也能以完整的病毒粒子形式通過雞胚從種雞垂直傳染給后代。內(nèi)源性ALV是指前病毒cDNA可整合進(jìn)宿主細(xì)胞染色體基因組、因而可通過染色體垂直傳播的ALV。它可能只是基因組的不完全片斷，不會(huì)產(chǎn)生傳染性病毒，一般也與致病性無關(guān)。但也可能是全基因組因而能產(chǎn)生傳染性病毒，不過這類病毒通常致病性很弱或沒有致病性。目前發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性ALV都屬于E亞群。雞細(xì)胞基因組某個(gè)特定位點(diǎn)含有(穩(wěn)定地整合)能復(fù)制可傳染性病毒粒子的E亞群ALV的全基因組，如性染色體Z上與決定快慢羽相關(guān)基因K緊密連鎖的ev21位點(diǎn)。從這個(gè)ev21可產(chǎn)生傳染性病毒EV21。E亞群內(nèi)源性ALV通常沒有致病性，但會(huì)干擾對(duì)白血病的鑒別診斷。種雞群凈化ALV，在現(xiàn)階段主要是凈化外源性病毒。我們了解雞群有無ALV感染。在現(xiàn)階段也僅是指外源性病毒感染。
1.3 ALV的流行特點(diǎn)和傳播途徑
由于ALV在外界的抵抗力很弱，所以ALV的這種橫向傳播能力比其他病毒弱得多。在雞舍內(nèi)的溫度下，特別是在夏天，排出體外在環(huán)境中的ALV，即使不做任何清洗和消毒措施，病毒也會(huì)全部失去傳染性。該病毒對(duì)各種消毒劑也都非常敏感。ALV主要是由種雞通過雞蛋(胚)向下一代垂直傳播，即祖代雞場(chǎng)直接傳給父母代及商品代，帶病毒的雛雞出殼后在孵化廳及運(yùn)輸箱等高度密集狀態(tài)下通過與其他雛雞的直接接觸，可造成嚴(yán)重的橫向感染。此外，被ALV污染的弱毒疫苗也是重要的傳播途徑。因此，在ALV傳播問題上。種雞場(chǎng)要對(duì)下一代雞場(chǎng)承擔(dān)重要的責(zé)任。
2雞ALV感染、雞白血病及雞白血病腫瘤
在已知的多種不同的病毒感染中，ALV感染在雞群引起的病理變化和表現(xiàn)是最為多種多樣的。白血病不僅僅表現(xiàn)為內(nèi)臟腫瘤或體表皮膚血管瘤，更多的雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋下降、免疫抑制或生長遲緩。實(shí)際上。由ALV感染后的亞臨床病理作用帶來的經(jīng)濟(jì)損失可能大于臨床上顯示腫瘤性死亡帶來的損失。其中，一些亞臨床表現(xiàn)在雞場(chǎng)是很難作出判斷的，除非雞場(chǎng)長期保持著系統(tǒng)的生產(chǎn)記錄及有規(guī)律的定期血清檢測(cè)記錄做比較研究。值得注意的是，并不是每一只感染的雞都表現(xiàn)同等的免疫抑制、生長遲緩和產(chǎn)蛋下降，這與感染的年齡、感染毒株的亞群與毒力及雞的遺傳性密切相關(guān)。但一般來說，越是早期感染、特別是垂直傳染，其致病作用越強(qiáng)，而且腫瘤多在性成熟時(shí)才發(fā)生。更重要的是ALV可引起雞的多種內(nèi)臟器官不同組織不同表現(xiàn)的腫瘤，肝臟、脾臟、腎臟、心臟、卵巢都是常見的發(fā)病臟器。有些腫瘤呈大塊腫瘤結(jié)節(jié)，有的則呈彌漫性細(xì)小結(jié)節(jié)。有的形狀規(guī)則，有的形狀不規(guī)則。特別是，發(fā)生腫瘤的細(xì)胞類型也不一樣。如淋巴細(xì)胞瘤、髓樣細(xì)胞瘤、成紅細(xì)胞瘤、纖維肉瘤、血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤等，這主要與病毒的不同特性及雞的遺傳性相關(guān)。但一般來說，AB亞群多引發(fā)淋巴細(xì)胞腫瘤，且形成較大的腫瘤塊，而J亞群多引起髓樣細(xì)胞瘤，多在腫大的肝臟中呈現(xiàn)大量彌漫性分布的白色細(xì)小的腫瘤結(jié)節(jié)。在其他臟器也會(huì)引發(fā)不規(guī)則的腫瘤。從群體角度，這可作為鑒別診斷的重要依據(jù)之一。
雖然E亞群ALV感染本身不一定會(huì)引起腫瘤，但是先天感染或出殼即感染ALV-E的雞往往死淘率較高，對(duì)外源性ALV感染更易感。這可能與早期感染ALV-E后容易產(chǎn)生對(duì)ALV的免疫耐受性有關(guān)，從而在外源性ALV感染后不易產(chǎn)生相應(yīng)特異性抗體。
3我國雞白血病發(fā)生和流行歷史
雞群中發(fā)現(xiàn)雞白血病已有一百多年歷史了，最初是經(jīng)典的A、B、C、D亞群白血病。由于采取了嚴(yán)格的凈化措施，從1987年以后國際發(fā)達(dá)國家的大型種雞公司中就已宣布將外源性雞白血病毒凈化了。但我國從來沒有對(duì)ALV采取過凈化措施，因此我國地方品系雞群中可能一直存在著經(jīng)典雞白血病。只不過由于飼養(yǎng)規(guī)模小，看不出危害。一九八八年，英國從白羽肉用型雞中發(fā)現(xiàn)了新的J-亞群ALV，它的腫瘤發(fā)病率比經(jīng)典ALV要高得多。在幾年內(nèi)傳遍全世界幾乎所有白羽肉用型雞群。我國在引進(jìn)白羽肉用型種雞時(shí)也就同時(shí)引進(jìn)了J亞群ALV。2004年后，世界上幾個(gè)主要種雞公司已把ALV-J基本凈化，從2005年后，ALV-J腫瘤不再成為我國白羽肉雞生產(chǎn)中的嚴(yán)重問題了。然而在這期間，由于不當(dāng)引種和種雞場(chǎng)在繁育過程中不適當(dāng)?shù)慕?jīng)營管理。J亞群ALV也已被帶進(jìn)我國自繁自養(yǎng)的黃羽肉雞(每年飼養(yǎng)有20～30億羽的)及年飼養(yǎng)量12～15億羽的蛋用型雞中。蛋雞中白血病的普遍流行更成為目前危害養(yǎng)雞業(yè)特別是蛋雞業(yè)的最主要疫病之一。
在過去十年中，我們已從各地各種類型雞群的腫瘤病例中已分離鑒定出60多株ALV-J。在此同時(shí)也分離到A、B、C亞群，但加在一起也還只有10株左右。國內(nèi)其他單位報(bào)道的也大多是ALV-J。顯然，近十多年來，我國雞白血病主要是由ALV-J引起的。這不僅是2005年前白羽肉雞的主要問題，也是我國地方品系中的主要問題。而這二年中又突出地成為蛋用型雞群中的問題。
4 我國近幾年各類雞群中AIV感染和流行現(xiàn)狀
4.1 全國不同類型雞群中AIV感染的總體狀況
在2007年由農(nóng)業(yè)部科技司和獸醫(yī)局立項(xiàng)的農(nóng)業(yè)公益性科技研究專款項(xiàng)目——“雞白血病學(xué)的流行病學(xué)調(diào)查和防控示范性研究”的實(shí)施過程中，我們已對(duì)我國不同地區(qū)不同類型的雞群中的ALV感染狀態(tài)做了血清學(xué)調(diào)查。我們的結(jié)果表明，對(duì)AB亞群ALV抗體呈陽性的群體為237／468群(50.6％)、個(gè)體為1201／28853只(4.2％)，對(duì)J亞群ALV感染呈陽性的雞群分別占231／476群(48.5％)、個(gè)體為l 817／29914只(6.1％)。這一結(jié)果表明，ALV感染在我國雞群中是相當(dāng)普遍的，但是隨不同類型的雞群，感染率的高低差別也很大。
4.2我國雞群中J亞群禽白血病
J-ALV是80年代末期英國首次從肉雞中發(fā)現(xiàn)和分離鑒定的白血病病毒的新亞群，最初主要發(fā)生于肉用型雞。蛋雞雖可感染，但自然發(fā)病率很低。我國在1999年首次從市場(chǎng)肉雞及肉種雞場(chǎng)腫瘤病雞中分離檢出J-ALV。隨后在多個(gè)省份確定了J-ALV的流行。
我國ALV-J感染狀態(tài)表現(xiàn)在：①白羽肉種雞，2003年前很普遍，現(xiàn)在顯著減少。2005年就沒有再分離到ALV-J，這是因?yàn)榻?jīng)過十多年嚴(yán)格凈化，國外大型種雞場(chǎng)已基本不再有ALV-J感染，而我國祖代白羽肉雞全部進(jìn)口。只要保持生物安全，就不會(huì)再感染；②蛋用型雞，過去主要關(guān)心經(jīng)典型白血病，但近四五年，經(jīng)常分離到的是ALV-J；③地方品系雞，廣東、廣西的三黃雞和山東及其他省份的地方品系雞中的腫瘤中大多分離到的也是ALV-J。
4.3近年來蛋雞中的腫瘤/血管瘤問題
商品代蛋雞中由雞白血病引發(fā)的很高的死淘率帶來的經(jīng)濟(jì)損失是很大的。因?yàn)檫@種死亡都是在性成熟后開始產(chǎn)蛋時(shí)才發(fā)生。一般一個(gè)農(nóng)戶飼養(yǎng)2000～3000羽蛋雞，但養(yǎng)到6個(gè)月全開產(chǎn)時(shí)，已投入了很大的成本和資源，每只死亡雞帶來直接經(jīng)濟(jì)損失將是100元。由此。不斷引發(fā)了商品代蛋雞場(chǎng)與種雞公司之間的經(jīng)濟(jì)糾紛，有的發(fā)生了群體投訴或上訪。例如，在2009年4月，北方4個(gè)省的37個(gè)父母代蛋種雞公司聯(lián)合上訪投訴由一家外國公司獨(dú)資的蛋用型祖代雞場(chǎng)。因?yàn)橛善涮峁┑母改复胺N雞及其商品代蛋雞群的白血病腫瘤死淘率很高，有的高于20％，造成了極大經(jīng)濟(jì)損失。
為了了解我國蛋用型雞中腫瘤／血管瘤究竟是什么亞群ALV引起，我們重點(diǎn)調(diào)查了發(fā)生腫瘤／血管瘤的蛋用型雞群的血清抗體狀態(tài)。在客戶有投訴的種雞群中，既有對(duì)AB亞群抗體陽性，也有對(duì)J-亞群抗體陽性，也有的對(duì)二類亞群均有陽性，但是從病毒分離結(jié)果看，還是以J亞群ALV感染為主。這可能與J亞群的致病性較強(qiáng)有關(guān)。
如果以上述典型調(diào)查的結(jié)果對(duì)我國2008~2009年期間全國蛋雞中由腫瘤/血管瘤造成的危害作一粗略的估計(jì)。全國一年將由該病死淘5000～6000萬羽性成熟開始產(chǎn)蛋的蛋雞。
5蛋雞中J亞群ALV的傳染來源和傳播途徑分析
確實(shí)，我國境內(nèi)雞群中的ALV-J最初是在上世紀(jì)80年末90年代隨引進(jìn)的白羽肉種雞帶入我國的，并傳入華南地區(qū)的三黃雞。但是，現(xiàn)在還沒有任何證據(jù)證明歷來引進(jìn)的蛋用型種雞帶有ALV-J感染。在實(shí)施“十一五”農(nóng)業(yè)公益性科技專款項(xiàng)目中，分別由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)和中國農(nóng)業(yè)大學(xué)對(duì)白羽肉雞和蛋雞進(jìn)行了檢測(cè)，還沒有發(fā)現(xiàn)有ALV-J感染。實(shí)際上。國際上所有關(guān)于分離ALV-J的報(bào)道都來自白羽肉雞，而在蛋雞，從來沒有發(fā)生J亞群白血病的報(bào)道。顯然，目前ALV-J在蛋雞中的普遍流行主要原因可能在于我國某些公司沒有完全按科學(xué)規(guī)則實(shí)施生產(chǎn)和相應(yīng)的擴(kuò)種繁育。實(shí)際上，早在2003年中國農(nóng)業(yè)大學(xué)就已報(bào)道了蛋雞中的J-亞群白血病，我們也已在2005年從蛋雞白血病患雞分離到ALV-J。這很可能是在過去有些雞場(chǎng)將白羽肉種雞與蛋用型種雞在同一雞場(chǎng)飼養(yǎng)，或在同一孵化場(chǎng)孵化雛雞，由此從白羽肉雞橫向傳播到一些蛋雞群。而有些種雞場(chǎng)在繁育擴(kuò)大種群的過程中，不加檢疫隨意從其他種群引進(jìn)種雞時(shí)就會(huì)導(dǎo)致ALV-J的傳播和擴(kuò)散。另外，很多種雞公司對(duì)國外引進(jìn)的種雞隨意擴(kuò)大使用的代次，且每一代也不做檢測(cè)來凈化雞群，也同樣會(huì)引發(fā)雞白血病擴(kuò)散。
雞群使用的弱毒疫苗污染是另一個(gè)原因。作為實(shí)施農(nóng)業(yè)行業(yè)科研專款項(xiàng)目，相關(guān)的雞各參加單位已對(duì)國內(nèi)市場(chǎng)上收集到的不同弱毒疫苗做了檢測(cè)，確實(shí)發(fā)現(xiàn)有AB亞群ALV和ALV-J污染。實(shí)際上，在2003年以前，在美國市場(chǎng)上銷售的3個(gè)疫苗廠商的馬立克氏病疫苗中。有2個(gè)廠家的疫苗中檢測(cè)出ALV-A病毒的污染。至于我國市場(chǎng)上銷售的雞用弱毒活疫苗中是否ALV-J污染。還有待進(jìn)一步確證。
6雞群中ALV-J和REV共感染是普遍現(xiàn)象
ALV是一種溫和病毒，國內(nèi)外過去報(bào)道的自然感染和腫瘤死淘率都不高。但近幾年來，我國一些蛋雞群和部分三黃雞群中ALV的發(fā)病率和死淘率很高，分析其原因可能是有如下幾方面：①不同亞群共感染；②與REV共感染；③與其他免疫抑制性病毒共感染。
ALV-J與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)的共感染及其危害。在過去十年中，我們分別對(duì)大量疑似樣品做了病毒分離，我們發(fā)現(xiàn)，在檢出ALV-J的樣品中，有相當(dāng)高的比例還同時(shí)有REV感染，而且在雞群中也可能存在ALV-J與REV的二重垂直感染。顯然，在雞群中ALV-J和REV共感染是普遍現(xiàn)象。我們?cè)囼?yàn)已證明，REV感染誘發(fā)的免疫抑制將顯著干擾ALV感染后的抗體反應(yīng)，這就可能導(dǎo)致ALV病毒血癥顯著延長。從而提高腫瘤的發(fā)病率。
7雞白血病的預(yù)防和控制措施
雖然雞白血病在我國雞群中將是個(gè)長期問題，但只要采取有力措施，是有可能在2～3年內(nèi)把我國蛋雞中目前很高的白血病／血管瘤死亡淘汰率從現(xiàn)有水平降低60％～70％。鑒于現(xiàn)在沒有預(yù)防ALV的疫苗，近期內(nèi)也很難研制出真正有效的疫苗，對(duì)雞白血病的預(yù)防控制需要采取綜合性的措施。這需要在養(yǎng)雞的各個(gè)環(huán)節(jié)的不同層次采取有力措施。
7.1政府主管部門要強(qiáng)化種雞群的監(jiān)控
建議農(nóng)業(yè)部畜牧司和獸醫(yī)局共同制定對(duì)各類種雞場(chǎng)白血病感染狀態(tài)的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)施經(jīng)常性的監(jiān)控。并將該標(biāo)準(zhǔn)作為種雞場(chǎng)準(zhǔn)入市場(chǎng)經(jīng)營的一項(xiàng)必須的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)可先松后緊，逐漸向發(fā)達(dá)國家早已達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)靠近。對(duì)嚴(yán)重感染的種雞群，應(yīng)暫時(shí)取消其生產(chǎn)許可證。
對(duì)于每年從國外引進(jìn)祖代雛雞的種雞場(chǎng)，也實(shí)施同樣的監(jiān)控。在現(xiàn)階段。對(duì)進(jìn)口種雞不建議實(shí)施海關(guān)檢疫，因?yàn)檫@一做法不現(xiàn)實(shí)，效果也不好。但應(yīng)該要由對(duì)方提供官方的檢疫證明，并由各地獸醫(yī)主管部門對(duì)祖代雞場(chǎng)在飼養(yǎng)過程中作跟蹤檢疫。
對(duì)于各種雞群的監(jiān)控結(jié)果，可以用適當(dāng)?shù)男问皆谛袠I(yè)內(nèi)公布，從而能起到監(jiān)督效應(yīng)并為下游養(yǎng)雞公司選擇苗雞提供有益的參考。各下游養(yǎng)雞公司在選擇苗雞來源時(shí)，應(yīng)以苗雞的健康質(zhì)量為第一考慮因素。也就是說，要選擇多年來信譽(yù)度好的祖代或父母代種雞公司購買父母代或商品代苗雞。千萬不要拘泥于一點(diǎn)點(diǎn)價(jià)格差異。苗雞中有無外源性ALV的垂直感染或其感染的嚴(yán)重程度，對(duì)一批雞生產(chǎn)效益的負(fù)面影響帶來的經(jīng)濟(jì)損失要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于苗雞間的價(jià)格差。養(yǎng)雞行業(yè)內(nèi)應(yīng)該討論一下，種雞場(chǎng)是否需公布雞群對(duì)ALV感染狀態(tài)檢測(cè)結(jié)果?從而優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)。
7.2保持種雞群對(duì)ALV的高度潔凈狀態(tài)
需要做好如下幾方面：
7.2.1從無外源性ALV感染的祖代雞或原種雞公司選購苗雞，這有賴于商業(yè)合同或政府主管部門提供的可靠信息。
7.2.2一個(gè)雞場(chǎng)只飼養(yǎng)同一品系和同一批(年齡)的種雞。橫向感染都是由近距離引起，同一雞場(chǎng)內(nèi)是無法隔離的。
7.2.3嚴(yán)格選用沒有外源性ALV污染的活疫苗，并定期檢測(cè)血清抗體狀態(tài)。
7.2.4同一孵化廳只用于同一個(gè)種雞場(chǎng)來源的種蛋，以預(yù)防孵化廳內(nèi)可能的早期橫向傳播。雛雞對(duì)ALV最易感，垂直感染的雛雞出殼后就可排毒。孵化廳內(nèi)雞運(yùn)輸箱內(nèi)高度密集，同一箱內(nèi)有一只感染雛雞，在運(yùn)輸期間可使同箱內(nèi)20％~30％的接觸雞感染。
7.2.5預(yù)防潛在的昆蟲傳播。
7.2.6建議種雞群自我檢測(cè)。當(dāng)對(duì)AB及J亞群抗體陽性率高于一定限度后自行淘汰。避免在客戶雞場(chǎng)出現(xiàn)問題后再發(fā)生糾紛。
7．3強(qiáng)化弱毒疫苗中ALV污染的檢測(cè)和監(jiān)控
弱毒疫苗中外源性ALV污染是蛋雞、三黃雞和其他品系雞中傳播白血病的一個(gè)最可能的現(xiàn)實(shí)原因之一。對(duì)商品代雞群來說，特別要注意1周齡內(nèi)使用的活疫苗，如對(duì)馬立克氏病和禽痘的活疫苗。但是在種雞群。各種活疫苗都要檢測(cè)，特別是非口服疫苗。前幾年美國市場(chǎng)上供應(yīng)的馬立克氏病疫苗中還發(fā)現(xiàn)有ALV-A污染，我國生產(chǎn)的疫苗可能會(huì)問題更多。
問題是如何檢測(cè)?要檢測(cè)疫苗中的ALV污染，一定要區(qū)別內(nèi)源性和外源性ALV，否則會(huì)帶來很大的混亂，即報(bào)告很多的假陽性。可以根據(jù)情況依次從如下幾種方法中做一選擇：
7.3.1經(jīng)典方法(金標(biāo)準(zhǔn))。將一定劑量(相當(dāng)于雛雞用量的3~5倍)活疫苗接種8～10只3～4周齡SPF雞，在隔離罩中飼養(yǎng)4～6周后采血清，隔2周后用商品化的抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ALV-AB和ALV-J特異性抗體。同時(shí)在另一隔離罩中飼養(yǎng)同批SPF雞做對(duì)照。隔2周后重復(fù)一次。接種疫苗組中只要有2只或以上表現(xiàn)對(duì)ALV-AB和ALV-J特異性抗體陽性而對(duì)照組全陰性，即可判定疫苗有ALV-AB或ALV-J污染。如為陰性，可隔2周后重復(fù)一次。這一方法成功率高，結(jié)果比較可靠，但周期長，成本高，需要一定飼養(yǎng)條件。
7.3.2在DF1細(xì)胞(對(duì)E亞群ALV有抵抗力)上分離病毒，再用ALVp27試劑盒檢測(cè)。這一方法適用于在該細(xì)胞上不產(chǎn)生細(xì)胞病變的疫苗病毒。對(duì)但有些疫苗病毒感染后細(xì)胞死亡，無法進(jìn)行。對(duì)細(xì)胞結(jié)合性馬立克氏病疫苗，可先將疫苗細(xì)胞在超聲波處理下裂解或用無菌蒸餾水稀釋裂解后接種DF1細(xì)胞，以此最大限度去處MDV疫苗病毒復(fù)制。對(duì)于禽痘疫苗病毒，可先接種l周齡SPF雞，再在7～10天后采血漿接種DF1細(xì)胞。
7.3.3PCR擴(kuò)增囊膜蛋白全基因及其相連的3’-末端序列，測(cè)序比較和鑒定亞群。鑒于有些細(xì)胞基因組中可帶有ALV-AB、J的Env基因，單獨(dú)擴(kuò)增出Env基因還不能作為依據(jù)，一定要擴(kuò)增到Env基因的及其相連的3’-末端序列，并證明其3’-末端序列中的LTR也是外源性ALV特異性的，才有較大把握作出判斷。但要下最終結(jié)論，最好還要靠分離到病毒。
由于ALV的橫向傳播能力很弱。除非有嚴(yán)重的垂直感染，一般雞群對(duì)外源型ALV抗體的陽性率是很少會(huì)高于30％的。因此，如果雞群對(duì)ALV-AB或ALV-J的抗體陽性率高于30％時(shí)，就要懷疑在過去用過的弱毒活疫苗中是否有哪種疫苗有ALV污染。這對(duì)種雞場(chǎng)尤為重要，雖然在使用被ALV-AB或ALV-J污染的疫苗后的雞群不一定就會(huì)發(fā)生腫瘤(一般不會(huì)，因?yàn)殡u對(duì)ALV的抵抗力有很明顯的年齡依賴性)，但有可能是給下一代造成垂直感染的來源。因此。有必要對(duì)種雞群作定期的血清學(xué)檢測(cè)。
7.4原種雞群的凈化
對(duì)我國自行育種并已形成相應(yīng)品系的自繁自養(yǎng)種雞群，應(yīng)該對(duì)外源性白血病感染實(shí)施定期檢測(cè)和嚴(yán)格的凈化措施。這項(xiàng)工作在技術(shù)操作上涉及到育種選種和長期病毒感染檢測(cè)的諸多方面措施，需要較大的資金投入。作為一個(gè)大國，必須要有自己自繁自養(yǎng)種雞群，但也必須實(shí)現(xiàn)對(duì)白血病的凈化。這需要從國家層次，由政府立項(xiàng)資助幾個(gè)不同類型種雞的龍頭企業(yè)完成凈化并保持凈化狀態(tài)。這一方面是企業(yè)行為。但也要政府在技術(shù)和資金方面資助，并實(shí)施監(jiān)控。
凈化的基本原則：①小群孵化小群飼養(yǎng)(20～50只/群)；②每只采樣分離病毒或檢測(cè)p27，淘汰所有陽性雞及所有同群雞；③嚴(yán)格選用弱毒活疫苗；④嚴(yán)禁不同種群雞共用孵化廳。
在我國現(xiàn)有條件下原種雞群凈化方案列舉如下(僅供參考)：
方案A(國際金標(biāo)準(zhǔn))：完全按美國喬治亞大學(xué)禽病診斷和研究中心現(xiàn)在正在使用的方法。對(duì)核心群雞全部采血漿接種DF-1細(xì)胞，9天后檢測(cè)p27抗原，凡陽性者全部淘汰。分別在68日齡和168日齡至少做二次采血分離病毒。對(duì)保留的核心群種雞的下一代所有用出殼雞，檢測(cè)胎糞中的p27，淘汰所有陽性雞。如此反復(fù)。
這一方案的優(yōu)點(diǎn)是，檢測(cè)特異性和檢出率均很高，如嚴(yán)格實(shí)施4～5年，就有可能實(shí)現(xiàn)基本凈化。此后只需抽樣監(jiān)控，不再全面檢測(cè)。
缺點(diǎn)是，現(xiàn)在就需要投入的資金、設(shè)備和人力較大。而且還沒有足夠數(shù)量的訓(xùn)練有素的有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)隊(duì)伍。
方案B：基本原則：根據(jù)泄殖腔棉拭子及蛋清中g(shù)sP27抗原檢測(cè)，陽性者都全部淘汰。
優(yōu)點(diǎn)：方法簡單，成本相對(duì)較低，每次可檢測(cè)所有個(gè)體樣品。
缺點(diǎn)：不能區(qū)別內(nèi)源性E亞群ALV，將會(huì)把感染了內(nèi)源性E群但外源性ALV陰性雞也淘了。但是當(dāng)陽性率高時(shí)，對(duì)選種不利，很難被育種專家接受。另一方面，單靠泄殖腔棉拭子及蛋清中g(shù)sP27抗原檢測(cè)，其靈敏度尚不足以檢測(cè)出所有感染雞。因此，只能保持雞群相對(duì)較高的潔凈度，但不能完全凈化。因而，檢測(cè)和凈化過程需不斷進(jìn)行。
適應(yīng)情況：當(dāng)整個(gè)后備雞群p27陽性率在20％以下或在育種專家可接受全部淘汰的范圍內(nèi)時(shí)。可采取這一方法。
具體程序：母雞和公雞：①18～20W棉拭子檢測(cè)p27；②2l～22W棉拭子檢測(cè)p27，如人工授精，最初次2要同時(shí)檢測(cè)公母雞；③23～25W(開產(chǎn)初期)棉拭子檢測(cè)最初第l～3個(gè)，蛋的蛋清中p27；④～40W(準(zhǔn)備孵化留種時(shí))，公母雞棉拭子檢測(cè)p27，母雞2個(gè)蛋的蛋清檢測(cè)p27；⑤～43W孵出小雞，對(duì)每只后備母雞最初孵出的二只小雞。胎糞棉拭子檢測(cè)p27。
方案C：這是將前二個(gè)方案結(jié)合起來。基本原則：將對(duì)棉拭子p27陽性和陰性雞分開飼養(yǎng)，p27陽性雞分別取血清或蛋清在DFI細(xì)胞上分離外源性ALV，僅淘汰外源性ALV陽性雞。
優(yōu)點(diǎn)：能區(qū)別內(nèi)外源ALV，將僅僅淘汰外源性ALV陽性雞，仍保留內(nèi)源性病毒陽性雞。
缺點(diǎn)：增加了一道鑒別性細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)性要求高，人力成本、試劑成本及實(shí)驗(yàn)室裝備較方案B明顯提高，但顯著低于方案A。
適應(yīng)情況：當(dāng)整個(gè)雞群棉拭子或蛋清中p27陽性率超過20％，非外源性ALV淘汰率過高影響育種而不能為育種專家接受時(shí)。或者說，在我國現(xiàn)在的條件下，但各相關(guān)的原種雞群還沒有條件按方案A實(shí)施凈化時(shí)，這一替代方案是最適合的過度階段。先投入有限的資金和人力，采用這一方案開始做起來，待有足夠力量時(shí)再采用反案A。
具體程序：基本同方案A，但要把p27陽性和陰性雞群分隔飼養(yǎng)，分別定為陰性和陽性群。僅對(duì)陽性雞群中的每只雞按方案A采血分離病毒。這樣，可暫時(shí)把病毒分離的工作量減少80％。
