雞傳染性腦脊髓炎的診斷

初步的診斷

根據雛禽出殼后陸續出現癱瘓、早期食欲尚好、剖檢無明顯的特征性肉眼變化，追蹤到其種雞有短暫的產蛋下降，且某段時間內孵出的多批小雞需分發到不同地方飼養，但均出現麻痹、震顫和死亡等情況，結合組織病理學特征性變化，即可作出初步的診斷。確診應進行實驗室診斷。

病原的分離與鑒定

1．病原的分離采多只出現典型癥狀的小雞腦組織混合，按常規方法制備腦組織懸液，腦內接種1日齡無AE母源抗體或SPF雛雞，每只接種0.03ml，接種后1～4周齡內出現典型的癥狀。收集有典型癥狀的病雞的腦、胰腺作繼代用的種毒。也可將病料通過卵黃囊途徑接種5～7日的易感雞胚，接種后12天檢查部分雞胚是否有胚胎萎縮、爪卷曲、肌營養不良等特征性變化，但野外分離病毒常不能使SPF雞胚產生病變，需盲傳3～4代，才能適應雞胚產生病變。其余讓其孵化至出雛，出殼后10天內便可見AE的癥狀出現，此時，取其病雛的腦、腺胃、胰腺等作病理組織學的檢查。

2.病原的鑒定 病毒的檢查可用熒光抗體技術(FA)，直接從病雞的腦、胰腺和腺胃中檢出AE病毒抗原。其方法是將病料制成6～7μm厚的冷凍切片，固定于載玻片上．空氣干燥；用4℃丙酮固定10min，傾去丙酮液，空氣干燥；用抗AEV的特異性熒光抗體于室溫染色30min，經pH7.4的磷酸鹽緩沖鹽水沖洗20min，然后加蓋玻片，并用pH7.4的緩沖甘油封片。在熒光顯微鏡下檢查，陽性雞的組織中可見黃綠色的熒光。此時，還可用瓊脂擴散疑集試驗(AGP)，將病料接種SPF雞或雞胚，取發病雞或雞胚的腦、胃腸和胰等制備待檢瓊擴抗原，用已知AE陽性血清檢查病毒的存在。

血清學診斷

1．病毒中和試驗(VN) 將VR株10倍系列稀釋的病毒液0．5ml中加等量的5倍稀釋的被檢血清，置37℃作用60min后，各取約0．2ml，接種于SPF雞胚的卵黃囊內，置37℃孵育觀察，至18日胚齡時，觀察雞胚的特征性病變，計算EID50。從病毒對照的 EID50減去上述的EID50值的對數差異計算中和指數，中和指數在1.0以上，視為抗體陽性。

2．雞胚敏感試驗 經蛋黃囊途徑對6日齡的雞胚接種100EID50/0.1ml的AE雞胚適應株，接種后觀察12天，檢查雞胚有無特征性病變，如果100％雞胚有病變，種雞被認為易感的，50％以下有病變表明雞群有免疫力，中間數表明雞群免疫不全或有近期的感染。

3．瓊脂擴散凝集試驗(AGP) 利用AE-VR雞胚適應株或分離的野毒株分別接種 SPF雞胚，收集發病胚的腦、胃腸和胰腺制成瓊脂擴散抗原。在含20％NaCl和0.5％苯酚的0.8％瓊脂凝膠中，用這種抗原進行AGP試驗檢測AE抗體，結果穩定，特異性強，方法簡便迅速。

4．酶聯免疫吸附試驗(ELISA) 此法已廣泛被國外采用于評價母雞AE抗體的水平或作免疫效果的監測。美國IDEXX公司有商品化的試劑盒面市。此法與VN有良好的可比性，能定量檢測血清中的AE抗體水平，加上每次可同時檢測大量的血清樣品，并容易將結果輸入計算機軟件程序中進行處理，因此，適用于禽場進行AE抗體的快速檢測和評價AE抗體水平。其ELISA滴度用ET表示，同時用協同變異百分率(CV)表示群體內抗體的整齊度。

此外，還有間接免疫熒光和被動血凝抑制試驗檢測雞血清中AE抗體的報道。