病毒分離和鑒定用于診斷PPV感染的最大優點是結果準確可靠,可以作為最后確診。用于分離PPV的病料,一般為流產或死產胎兒的腦、腎、肝、肺、睪丸、胎盤及腸系膜淋巴結等,其中以腸系膜淋巴結和肝臟的分離率最高。雖然此方法是最準確的診斷方法,但是其費時費力,并且需要一定的技術條件和設備,另外,其感染力會隨著胎兒死亡時間而降低從而限制了臨床應用;紅細胞凝集試驗(HA)操作簡便易行,且能進行快速、大量的診斷,但是其靈敏度低、特異性不強,只能作為輔助診斷方法。
血凝抑制(HI)試驗是檢測PPV抗體最常用的經典方法,一般采用試管法和微量法。利用HI試驗檢測人工感染PPV的豬,發現感染后5天即可檢測到相應抗體,12~14天抗體滴度高1024~4096,并能持續多年檢出抗體。待檢血清進行HI試驗時需要首先進行熱滅活處理,然后再用紅細胞吸附,以除去血清中的非特異性血凝素,進一步用高嶺土吸附以除去或減少血清中非特異性抑制因子。目前,該方法在國內外已得到廣泛應用。血清中和試驗(SN)也是檢測PPV抗體的方法之一,其原理是利用被檢血清的抗體中和PPV,然后根據培養細胞的病變情況來計算血清抗體的滴度。SN的特異性比HI高,但是SN的操作較為復雜,首先要進行病毒感染力的測定,而PPV在低劑量時并不引起細胞病變,從而限制了該方法的使用。1988年,Hohdatsu等率先建立了PPV的ELISA診斷方法并用于檢測PPV的血清抗體,我國姜永厚等(1997)建立了雙抗體夾心ELISA用于檢測PPV的抗原,可建立的ELISA診斷方法非特異性較強。邵振華、田海燕(中國獸藥監察所)用濾紙采集豬血樣,加入到預先用PPV抗原處理的微孔板小孔內,進行免疫間接過氧化物酶染色試驗檢測PPV抗體,在2-3小時內即可觀察結果。對比試驗證實比HI敏感(高7.4%),特異性更強。就操作過程而言,該方法比HI要簡單,且具有采血方式新穎、送樣方便以及抗原軟板可隨意剪取、不需要特殊的儀器設備等優點,但該方法中抗原的保存時間有限,因此限制了該方法的普及應用。
血凝抑制(HI)試驗是檢測PPV抗體最常用的經典方法,一般采用試管法和微量法。利用HI試驗檢測人工感染PPV的豬,發現感染后5天即可檢測到相應抗體,12~14天抗體滴度高1024~4096,并能持續多年檢出抗體。待檢血清進行HI試驗時需要首先進行熱滅活處理,然后再用紅細胞吸附,以除去血清中的非特異性血凝素,進一步用高嶺土吸附以除去或減少血清中非特異性抑制因子。目前,該方法在國內外已得到廣泛應用。血清中和試驗(SN)也是檢測PPV抗體的方法之一,其原理是利用被檢血清的抗體中和PPV,然后根據培養細胞的病變情況來計算血清抗體的滴度。SN的特異性比HI高,但是SN的操作較為復雜,首先要進行病毒感染力的測定,而PPV在低劑量時并不引起細胞病變,從而限制了該方法的使用。1988年,Hohdatsu等率先建立了PPV的ELISA診斷方法并用于檢測PPV的血清抗體,我國姜永厚等(1997)建立了雙抗體夾心ELISA用于檢測PPV的抗原,可建立的ELISA診斷方法非特異性較強。邵振華、田海燕(中國獸藥監察所)用濾紙采集豬血樣,加入到預先用PPV抗原處理的微孔板小孔內,進行免疫間接過氧化物酶染色試驗檢測PPV抗體,在2-3小時內即可觀察結果。對比試驗證實比HI敏感(高7.4%),特異性更強。就操作過程而言,該方法比HI要簡單,且具有采血方式新穎、送樣方便以及抗原軟板可隨意剪取、不需要特殊的儀器設備等優點,但該方法中抗原的保存時間有限,因此限制了該方法的普及應用。