操作步驟一般由三個人一組，兩人輪流抓雞翻肛，一人來回輸精。翻肛人員用左手捉住雞的雙腿，右手大拇指與其他四指分開成八字形，伸貼在肛門上下方向偏肛門的左側，使掌心堵住直腸開口，分開的手指使勁向外開張肛門，拇指擠壓腹部，使母雞產生腹壓，肛門會自然外翻，露出陰道開口。注意翻肛時，無須用力擠壓腹部，以防糞尿射出。如果輕壓時發現有排糞現象，重復幾次翻肛動作，使糞便排出，然后再輸精。

輸精數量若用新鮮的未經稀釋的精液，一般每只每次輸0.025～0.03毫升；若用稀釋后的精液，一般每只每次輸0.05毫升即可。

輸精深度一般宜采用淺部輸精，即陰道部輸精，將輸卵管插入陰道2～2.5厘米即可。

輸精時間輸精時間在下午3點鐘以后開始，到7～8點鐘以前結束為最佳。