豬傳染性胃腸炎(porcinetransmissiblegastroenteritis,TGE)和豬流行性腹瀉(porcineepidemicdiarrhoea,PED)分別是由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的以豬嘔吐、腹瀉、脫水為特征的傳染病。TGE豬傳染性胃腸炎對新生仔豬具有高度致死率,雖然不同年齡的豬對這種病毒均易感,但5周齡以上豬的死亡率則很低。1945年,Doyle在美國首次報(bào)道發(fā)生了本病。我國1956年在廣東省首次報(bào)道,給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重危害。豬流行性腹瀉是一種豬腸道傳染病,哺乳仔豬受害最嚴(yán)重。本病主要發(fā)生在冬季,夏季也可發(fā)生。20世紀(jì)70年代初首先發(fā)現(xiàn)于英國和比利時(shí),我國從20世紀(jì)80年代初開始陸續(xù)有本病的流行。
1973年先后在我國上海、遼寧、吉林、黑龍江、四川等地分離到TGE和PED病毒。目前,已成為重要的豬病毒性腹瀉病之一。多年來,包括我國在內(nèi)的許多國家為了預(yù)防和控制TGE和PED,曾投入了一定的人力、物力和財(cái)力,但迄今為止這兩種疾病仍在世界上許多國家存在,且PED可與TGE混合感染,二者在流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化上非常相似,給臨床診斷帶來一定困難。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,TGE與PED的研究取得了較大進(jìn)展。本文就TGE和PED近年來的研究進(jìn)行比較綜述如下。
病原特征
豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒皆屬于套式病毒目冠狀病毒科、冠狀病毒屬(國際病毒分類委員會第7次分類報(bào)告,2000年)。
朱維正等發(fā)現(xiàn)PED與TGE在血清學(xué)上的不一致,馬思奪采用聚乙二醇沉淀法結(jié)合蔗糖梯度密度離心法純化PED,以改良的SDS—PAGE分析表明,PED粒子有六種結(jié)構(gòu)蛋白,其分子量分別為P133KD、P240KD、P353KD、P462KD、P5163KD和P6190KD,除P5(纖突蛋白)與TGE在電泳條中帶排布有顯著差異外,其余5種結(jié)構(gòu)蛋白則與TGE很相似。上海農(nóng)科院畜牧所報(bào)道,用熒光抗體技術(shù)發(fā)現(xiàn)PED和TGE在小腸粘膜絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)的感染存在著動態(tài)差異,TGE首先感染小腸絨毛基部的上皮細(xì)胞,以后再向絨毛的頂部發(fā)展,而PED在早期首先感染絨毛上部,以后逐步向絨毛基部發(fā)展。
流行病學(xué)
2.1TGE流行病學(xué)
2.1.1流行特點(diǎn):呈季節(jié)性發(fā)生,12月至次年4月發(fā)病最多,夏季發(fā)病少。在新疫區(qū)主要呈暴發(fā)性流行,在老疫區(qū)則呈地方性流行。
2.1.2臨床癥狀:潛伏期很短,約15~18h,有的可延長至2~3d,傳播快,幾天內(nèi)可波及全群。典型癥狀是出現(xiàn)短暫的嘔吐,伴有或繼發(fā)水樣腹瀉,糞便黃色、綠色或白色,因脫水體重迅速下降。
病理剖檢:病變主要在胃和腸道,以小腸病變?yōu)橹鳎憩F(xiàn)為腸壁變薄透明,腸內(nèi)容物稀薄如水,呈黃色,偶然可見胃底出血。
2.2PED流行病學(xué)
2.1.1流行特點(diǎn):本病在12月至次年3~4月間多發(fā),夏季也有豬感染發(fā)病,但相對較少。哺乳仔豬、斷奶仔豬和育肥豬感染發(fā)病率可高達(dá)100,成年母豬發(fā)病率較低,為15~19。哺乳仔豬受害最嚴(yán)重,病死率平均50。本病通常在有一頭豬發(fā)病后,同圈或毗鄰豬相繼于一周內(nèi)發(fā)病,經(jīng)過2~3周后流行終止.
2.1.2臨床癥狀:潛伏期,新生仔豬為24~36h,育肥豬為2d以上。病豬表現(xiàn)嘔吐、腹瀉、脫水,開始時(shí)糞便黏稠,后變成水樣便;精神沉郁,厭食,消瘦并衰竭。1周齡以內(nèi)的哺乳仔豬常于腹瀉后2~4d內(nèi)死亡。斷奶豬、育肥豬癥狀輕,發(fā)病4~7d后逐漸恢復(fù)正常。
病理剖檢:剖檢可見腸壁變薄,腸內(nèi)有黃色粘稠液體,小腸粘膜絨毛大部分萎縮變短,上皮細(xì)胞壞死脫落。全身淋巴結(jié)腫大、出血,腎小管上皮細(xì)胞變性壞死。
診斷
目前,對這兩種傳染病的診斷方法主要有病毒中和試驗(yàn),免疫熒光法,免疫電鏡法,ELISA法RT-PCR法。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展,ELISA法和RT-PCR法以其敏感性高、特異性強(qiáng)越來越受到人們的重視。
3.1TGE診斷方法
3.1.1病毒的分離與鑒定原代和次代豬腎細(xì)胞、豬腎傳代細(xì)胞系、豬唾液腺原代細(xì)胞、豬甲狀腺原代細(xì)胞以及McClurkinST傳代細(xì)胞已成功地用來從被感染豬的糞便及腸道內(nèi)容物中分離TGEV。在ST或豬甲狀腺細(xì)胞上的典型CPE由具有膨脹的、圓形或長形外觀如氣球的細(xì)胞組成。ST傳代細(xì)胞已用于蝕斑或IF實(shí)驗(yàn)以檢測TGEV野毒株,Kemeny(1978)。為提高病毒的分離率,在細(xì)胞培養(yǎng)液中加胰酶制劑或胰蛋白酶和使用較老的細(xì)胞可進(jìn)一步提高ST細(xì)胞的敏感性,Bohl(1979)。Pocock和Garwes(1975)報(bào)道,在次代豬甲狀腺細(xì)胞用弱酸性營養(yǎng)液時(shí)TGEV增殖滴度最高。
3.1.2電鏡法檢測通過電鏡負(fù)染色法證實(shí),在感染豬腸內(nèi)容物和糞便中有TGEV。發(fā)病期間病毒存在于病豬的許多器官中,實(shí)驗(yàn)證實(shí)除脾臟外,其他器官均可檢測到病毒,但是以空腸、十二指腸和腸系膜淋巴結(jié)中含毒量最高。通過電鏡觀察,病毒多分布在胞漿的空泡里和微絨毛間隙。在微絨毛間的病毒往往呈串球狀排列。研究證實(shí),免疫電鏡(IEM)比常規(guī)EM技術(shù)更好,前者對檢測臨床樣品或細(xì)胞培養(yǎng)物中的TGEV更敏感,并可提供病毒血清學(xué)鑒定。此外,用IEM更易區(qū)分TGEV和常見的膜類碎片,而且同時(shí)可檢測其它腸道病毒的存在。經(jīng)IEM觀察,TGEV與PEDV之間未見到免疫交叉反應(yīng)。
3.1.3免疫熒光法檢測免疫熒光法(IF)和免疫過氧化物酶技術(shù)都可應(yīng)用,但前者較常用。若IF或免疫過氧化物酶試驗(yàn)呈陽性,并伴有腹瀉癥狀,則幾乎肯定為TGEV。國外在小腸上皮細(xì)胞中檢測TGE病毒抗原,采集病死豬小腸或腹瀉早期將豬捕殺,取空腸和回腸粘膜涂片或?qū)⒖漳c和回腸制備冷凍切片進(jìn)行直接或間接免疫熒光檢測的方法已經(jīng)建立,并得到廣泛應(yīng)用。但本方法必須在死后或撲殺后才能進(jìn)行。我國哈爾濱獸醫(yī)研究所研制成功了扁桃體采樣器,采取豬只的扁桃體組織,做成冷凍切片,進(jìn)行直接免疫熒光法檢測TGE病毒抗原。本法是活體診斷,可以迅速做出判定,已廣泛應(yīng)用于疫病普查和口岸檢疫。另外,一種用抗TGEV高糖蛋白N的單克隆抗體免疫過氧化物酶技術(shù)來檢測TGEV(小腸組織)的方法已建立,且TGEV的單克隆抗體已被用IF或免疫過氧化物酶試驗(yàn)中。用上述兩種實(shí)驗(yàn)方法已在呼吸道組織和鼻腔上皮細(xì)胞中檢測出TGEV。用抗TGEV單克隆或多克隆抗體雙層夾心ELISA方法已被廣泛應(yīng)用于檢測在細(xì)胞培養(yǎng)、糞便和腸內(nèi)容物中的TGEV,是一種快速且適用于從活豬中取得大量樣品的診斷方法。