核心提示:豬回腸炎又名增生性腸炎、增生性出血性腸炎, 是由胞內勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結腸粘膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。
豬回腸炎又名增生性腸炎、增生性出血性腸炎, 是由胞內勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結腸粘膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。該病易感染生長育肥豬、后備母豬，嚴重影響豬只飼料效率與生長速度，對養豬業的經濟效益影響嚴重[1]。據Jensen報道，在美國每頭回腸炎感染豬的經濟損失至少1.531美元[2]。
依據臨床癥狀差異，本病可分為急性型、慢性型與亞臨床型。急性型多發于后備母豬及17周齡以上的育肥豬，健康豬群似乎更易感染急性型回腸炎[3]。常表現為出血性下痢（圖1），甚至突然死亡。慢性型與亞臨床型回腸炎無典型臨床癥狀（圖2，圖3，圖4），2周齡～20周齡的豬只均易感染[4] ，無法依據臨床癥狀進行診斷。
本試驗采用Lawsonia FIRSTtest TM回腸炎診斷試劑盒對該豬場糞便樣品中的胞內勞森氏菌進行了檢測，以期了解回腸炎的感染狀態與感染時間點，為該病的精準化策略性用藥預防或疫苗免疫提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 樣品采集
2011年12月，在江蘇省某規模化豬場隨機采集特定周齡的新鮮松軟或水泥樣的糞便樣品，各3克。樣品主要來自于4周齡、6周齡、8周齡、10周齡、12周齡、14周齡、后備母豬與經產母豬，每階段作2～3份重復，采樣后立即檢測。
1.2 檢測試劑
本檢測采用德國Microcoat公司開發的Lawsonia FIRSTtest TM回腸炎現場診斷試劑盒（免疫磁珠法，美國禮來公司擁有專利權）。其原理與雙抗體夾心ELISA類似。以包被在磁珠上的多克隆抗體捕捉糞便中的胞內勞森氏菌，然后通過連接在多克隆抗體上的過氧化物酶（POD）催化TMB顯色，通過顏色變化，對胞內勞森氏菌的感染狀態進行定性檢測。通過對比顏色變化，對胞內勞森氏菌的感染狀態進行半定量檢測。（圖5）。
1.3檢測方法
依照FIRSTtestTM試劑盒說明書進行，步驟如下。①樣品稀釋與沉淀：將1g糞便樣品與5mL樣品稀釋緩沖液在樣品收集管中混合，搖勻后，放在試管架上靜置5min；②樣品轉移：分別使用不同的移液管吸取0.5mL的上清液至分析管（管內含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠）中，設立陽性對照組（陽性對照為0.5mL勞森氏菌菌液），搖勻后，將分析管放在試管架上孵育30min；③磁珠分離與洗滌：將分析管轉移至磁體架上進行磁頭分離，然后洗滌2次；④加入抗體－過氧化物酶共軛物：分別向分析管中加入0.5mL的抗體－過氧化物酶共軛物，搖勻后，將分析管放置在試管架上孵育20min；⑤磁珠分離與洗滌：同步驟③；⑥加入TMB顯色：分別向分析管中加入0.5mL的TMB底物顯色液，并設立陰性對照（陰性對照管內含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠），搖勻后，孵育7分鐘；⑦結果判讀：將分析管放置在磁鐵架上，記錄顏色變化，陽性呈藍色，陰性液體透明。
