全病毒滅活疫苗

全病毒滅活疫苗是將疫苗株病毒在雞胚尿囊腔中繁殖，經梯度離心濃縮純化后，用甲醛或者β-丙內酯滅活處理制得。流感病毒滅活疫苗于1941年在美國首次被批準使用，1945年在美國開始廣泛應用。禽流感滅活疫苗通常制備成針對幾種不同亞型病毒的多價疫苗，已證明一種滅活疫苗可以至少包括4種不同的AIV亞型，同只含單一亞型的疫苗比，并沒有減弱對同一種血凝素亞型病毒攻擊的有效保護，而且各亞型抗原之間不產生免疫干擾。2003年研究人員對5周齡雌性小鼠鼻腔注射20微升含量為100微克的用甲醛滅活的流感全病毒疫苗，2周~3周后再免，最后一次免疫后l周，分別檢測血清和鼻拭子樣品，并同時經鼻腔攻擊20倍小鼠半數致死量的病毒。試驗結果，該疫苗既產生中和抗體，又能刺激機體CTL反應，并能抵御不同亞型流感病毒的攻擊。

全病毒滅活疫苗安全性好，抗原成分齊全，免疫原性強，不會出現毒力返強和變異的危險，能夠經受同種亞型AIV的攻擊，給免疫雞群提供良好的免疫保護，也是目前被廣泛應用的免疫疫苗。但滅活疫苗有一些不足，如免疫效率低下，免疫劑量較大等。其最突出的缺點是不能誘導有效的黏膜免疫和細胞免疫應答，因而無法抑制呼吸道中流感病毒的復制，接種動物血清學檢查呈陽性，故不能與自然感染區分，影響疫病的監測。

重組活載體疫苗

利用對禽類致病性很弱的痘苗病毒或禽痘病毒作載體，構建含有免疫原性基因的重組病毒。用此重組病毒作疫苗，可在動物體內復制，并不斷地表達出免疫原性蛋白，從而誘導禽類產生針對目標病原的免疫保護力，此種疫苗稱為重組活載體疫苗。據報道，基于HA基因的活載體疫苗對同型病毒攻擊幾近100％保護，而對其他亞型病毒的攻擊保護性較差。1995年和1997年，研究人員先后構建了禽痘病毒重組疫苗，用該苗免疫子雞，然后用墨西哥分離的致死性強毒H5N2攻擊，證明該苗可對H5N2提供90％~100％的保護，減少從呼吸道和腸道的排毒，并且有效地降低了攻毒后接觸雞之間的傳染。

由于重組病毒所表達的外源基因在機體內隨載體病毒的復制而表達，所以同滅活苗相比，它免疫用量少，接種方法簡便，不需添加佐劑，從而大大降低了生產成本；而且免疫保護持續時間長，免疫效果好。其最大優點是不影響用AGP法對AI疫情的監測和流行病學調查，能區分自然感染雞群和免疫雞群。

亞單位疫苗亞單位疫苗是提取流感病毒具有免疫原性的蛋白，并輔以佐劑而制成的疫苗。這種疫苗能刺激機體產生足夠的免疫力，產生的抗體不針對病毒的內部蛋白，因此不會干擾禽流感病毒的血清學調查，而且其不存在毒力返強、散毒和環境污染的問題，是安全性很好的疫苗。但免疫保護持續時間短，且制作的成本高。研究人員利用重組桿狀病毒表達系統生產H5、H7的含佐劑HA亞單位疫苗，接種1日齡雛雞，然后用致死性禽流感病毒攻擊，結果顯示，所有接種雞不發病，未接種組全部死亡。

由于禽流感病毒的HA極容易發生抗原變異，而M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白，它含有高度保守的抗原決定簇。研究表明，M2抗體在小鼠體內能夠抑制流感病毒的復制。因此，利用M2來研制具有交叉保護作用的亞單位疫苗是一種有效預防流感病毒的措施，是今后開發研究疫苗的一種新思路。

核酸疫苗

核酸疫苗自20世紀90年代興起以來，目前已成為國際疫苗研究最熱門的課題之一。核酸疫苗，又稱DNA疫苗或基因疫苗，是近幾年新興的一種疫苗，是利用病原的保護性抗原基因構建真核表達質粒，再將質粒DNA用肌肉注射或基因槍直接導入機體細胞，使外源基因通過機體內源性表達系統并提呈給免疫系統，誘發產生特異性的免疫應答。其主要成分不是基因表達產物或重組微生物，而是基因本身。

流感病毒是最早用于基因免疫研究的模型。1993年報道了基因免疫用于流感病毒的結果，他們將流感株NP基因插入表達質粒，注射入老鼠體內，不僅產生抗NP的特異性IgG抗體，而且誘導CTL反應。攻毒結果免疫組小鼠能抵抗同型流感病毒株的攻擊，用基因槍免疫小鼠，可以使其產生長期的B細胞應答反應，在免疫1年后仍可在骨髓和脾臟中檢測到HA蛋白特異的B細胞存在。

DNA疫苗有許多優點：免疫原的單一性，能長時間表達抗原，可避免母源抗體的干擾，易于構建和制備，易凍干，成本低，穩定性好，儲存和運輸相對方便，成本較低廉。雖然核酸疫苗具有很多優點，但DNA疫苗本身仍存在著安全性問題：一是轉入體內的外源BNA有可能整合到宿主染色體基因組DNA上，使宿主細胞轉化為癌細胞。二是少量抗原長期表達很可能引起針對該抗原的免疫耐受，在遭遇病原體后反而會引起嚴重感染。因此，在核酸疫苗投入使用前必須有證據證明已產生出正確的序列并能在生產中保證穩定，且需要有確保生產條件及成品質量恒定的方法。禽流感病毒在公共衛生學上的意義使得對禽流感的研究和控制已刻不容緩，因此，研制出高效、安全、生產工藝簡單、價格低廉、適用的禽流感疫苗有重要意義。從上文分析來看，由于滅活全病毒疫苗的自身缺點，尤其影響對疫病的監控，只能用于禽流感暴發時的應急免疫，來減少經濟損失，不能用于常規免疫。亞單位疫苗制作成本較高，免疫期短，不能成為解決禽流感危害的理想疫苗。重組活載體疫苗從多個角度分析較為理想，它不但解決滅活全病毒疫苗存在的一些問題，而且有自己的優點，有廣闊的市場前景。

國家“863計劃”現代農業技術領域針對口蹄疫、禽流感、豬瘟等重大動物疫病，研制開發了高效疫苗40種，一批新獸藥已進入臨床應用和試驗階段，將為我國動物重要疫病防控、保障食品安全和社會公共安全提供產品支持。

在畜禽重要病毒病、細菌病、寄生蟲的基因工程疫苗的構建和研制上取得重大突破。研制了針對口蹄疫、禽流感、狂犬病、豬瘟等畜禽重大病毒病的單價和多價基因工程疫苗10種；創制了針對豬鏈球菌、豬肺炎支原體、雞白痢、雞傷寒沙門氏菌和禽大腸桿菌病等基因工程疫苗等9種；研制針對血吸蟲、豬囊蟲、雞球蟲、羊泰勒蟲等畜禽重要寄生蟲病的基因工程疫苗15種。這些新疫苗中已有5個進入臨床試驗階段。

在新型生物獸藥研究上，以抗病毒、抗細菌、抗寄生蟲為主要目標，研制了一批廣譜、高效、低殘留的新型獸藥并進入臨床試驗階段。構建了高產多拉菌素bkd基因缺失突變株、高產假黑盤菌素的轉基因畢赤酵母、高效表達抗菌肽的大腸桿菌、高產南昌霉素與梅嶺霉素的基因定點突變菌株、表達人防御素NHP4基因的大腸桿菌和畢赤酵母菌株等基因工程菌近30株，建立了細菌素、沃尼妙林、托拉菌素、泰樂菌素等新獸藥的發酵和制備工藝。改進了托拉菌素原藥生產的制備工藝，使總收益提高到30.8％，比美國專利報道的15％提高了一倍，大幅度降低了生產成本。