豬口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,世界動物衛生組織(OIE)將該病列為A類家畜傳染病之首,大多數亞洲、非洲、南美洲國家一直都通過注射滅活疫苗的辦法來控制該病的流行。從2001年英國暴發口蹄疫后,歐盟允許在暴發口蹄疫時進行疫苗的緊急接種。因此,建立準確、快捷的鑒別口蹄疫野毒與疫苗的方法,對該病的控制、食品安全和進出口貿易十分重要。以下就國內外ELISA法鑒別口蹄疫野毒與疫苗的技術介紹如下:
中國農業科學院蘭州獸醫研究所朱彩珠等利用大腸桿菌表達的口蹄疫病毒(FMDV)非結構蛋白(NSP)3ABC多肽作為抗原,建立了一種可區分FMDV感染與接種滅活疫苗免疫牛的間接酶聯免疫吸附試驗(I-ELISA)。通過對336份正常牛血清、508份注射疫苗牛血清、6O份人工感染牛血清和58份豚鼠免疫血清的檢測,確定了血清抗體陰性與陽性效價的臨界值。336份正常牛血清檢測結果,特異性為98.21%;508份接種滅活疫苗1~2次后1~6個月的牛血清檢測結果,特異性為98.62%;60份實驗性感染牛血清的檢測結果顯示,I-ELISA檢出率為95.00%(按D值>0.400為陽性統計)。
華中農業大學動物醫學院阮力等利用大腸桿菌BL21(DE3)表達3B蛋白,建立了間接酶聯免疫吸附試驗(I-EIISA)區分口蹄疫病毒感染豬與注苗豬的方法。
上海市農業科學院畜牧獸醫研究所潘潔等以大腸桿菌表達重組口蹄疫病毒非結構蛋白3AB為檢測抗原,研制了口蹄疫病毒非結構蛋白ELISA檢測試劑盒,該試劑盒可用于判定被檢動物是否感染口蹄疫病毒。在1746份免疫豬血清中,3AB-ELISA對免疫豬血清的特異性為98.68%;在1077份健康非免疫豬血清中,3AB-ELISA對健康非免疫豬血清的特異性為98.68%;在36份人工感染豬血清中,3AB-ELISA對陽性檢出率為100%。3AB-ELISA對2031份免疫牛血清檢測,特異性為94.04%;3AB-ELISA對336份健康未免疫未感染牛血清檢測,特異性為97.96%。
臺灣屏東科技大學獸醫學系以桿狀病毒表達重組非結構蛋白3AB為抗原,建立了ELISA鑒別豬口蹄疫病毒感染的方法。大母豬經過10次口蹄疫接種,檢測結果仍為陰性。利用上述診斷試劑檢測100份未免疫未感染豬血清和106份免疫豬血清,陰性率分別為99.1%和100%;檢測120份感染豬血清,陽性率為95.8%。