中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告
第 1924

根據(jù)《 獸藥管 理條例 》規(guī)定， 我部組織制定了《氟苯尼考粉和氟苯尼考預(yù)混劑中非法添加氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星的檢查方法》（見附件），現(xiàn)予公布，自發(fā)布之日起執(zhí)行。

附件： 氟苯尼考粉氟苯尼考預(yù)混劑中非法添加氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星的檢查方法

農(nóng)業(yè)部

2013年4月12日

附件

氟苯尼考粉和氟苯尼考預(yù)混劑中非法添加

氧氟沙星、 諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星的檢查方法

一、適用范圍

本方法適用于氟苯尼考粉、 氟苯尼考預(yù)混劑中非法添加氧氟沙星、 諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、恩諾沙星的檢查。

二、 檢查方法

照高效液相色譜法測定（《中國獸藥典》 二〇一〇版一部附錄 36 頁）。

色譜條件與系統(tǒng)適用性  用十八烷基鍵合硅膠為填充劑（Waters XBridge C18 色譜柱或性能相當?shù)纳V柱）；以磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺調(diào) pH 值至3.0±0.1， 加乙腈 50ml） -甲醇（88:12） 為流動相， 流速為每分鐘 1ml， 采用二極管陣列檢測器檢測， 采集波長為 200 nm～400nm， 分辨率為 1.2nm； 記錄 283nm 波長處的色譜圖。

稱取氧氟沙星對照品、 諾氟沙星對照品、 環(huán)丙沙星對照品、 恩諾沙星對照品各約 25mg分別置 50ml 量瓶中， 加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1） 適量， 超聲處理 30 分鐘使溶解， 放冷至室溫， 用 2%磷酸溶液-乙腈（1:1）稀釋至刻度， 搖勻。 各量取 5ml 置同一 50ml 量瓶中，用磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺調(diào) pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml）稀釋至刻度， 搖勻， 作為系統(tǒng)適用性試驗溶液。 取 10 μ l 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖和光譜圖。 氧氟沙星、 諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星各相鄰色譜峰之間的分離度均應(yīng)符合要求。

測定法    取供試品 1.0g 置具塞錐形瓶中， 加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1） 50ml，超聲處理15 分鐘， 放冷至室溫， 濾過， 取續(xù)濾液 5ml，加磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml，用三乙胺調(diào) pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml） 稀釋至 50ml， 搖勻， 作為供試品溶液。 另取需要驗證物質(zhì)的相應(yīng)對照品（氧氟沙星、諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星） 各約 25mg， 分別加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1）50ml，超聲處理 15 分鐘使溶解， 放冷至室溫； 各取 5ml， 分別加磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺調(diào) pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml）稀釋至 50ml， 搖勻， 作為對照品溶液。 取供試品溶液和對照品溶液各 10 μ l， 分別注入高效液相色譜儀， 同時記錄色譜圖和光譜圖。 通過與對照品液相色譜圖保留時間、 光譜圖的比對，確定供試品中是否含有氧氟沙星、諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星。

三、 結(jié)果判定

1、 在相同實驗條件下， 供試品色譜圖中如出現(xiàn)色譜峰與相應(yīng)對照品峰保留時間一致（±5%），在大于 200nm 的波長范圍內(nèi)， 供試品出現(xiàn)的色譜峰和相應(yīng)對照品峰相對峰高大于 10%時， 兩者光譜圖無明顯差異（必要時可調(diào)整供試品溶液的濃度）， 最大吸收波長一致（±2nm），判定為檢出氧氟沙星、諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星。

2、 供試品溶液色譜圖中如出現(xiàn)與相應(yīng)對照品保留時間一致的色譜峰， 但峰面積小于檢測限峰面積， 判定為未檢出氧氟沙星、 諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、恩諾沙星。

四、 檢測限

本測定法的檢測限為 0.5mg/g。

附圖：

圖 2 氧氟沙星、 諾氟沙星、 環(huán)丙沙星、 恩諾沙星的光譜圖

起草單位： 河南省獸藥監(jiān)察所

復(fù)核單位： 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

江蘇省獸藥飼料質(zhì)量檢驗所