2005年版《中國(guó)獸藥典》（以下簡(jiǎn)稱本版獸藥典或CVP2005）共收載抗生素產(chǎn)品75個(gè)，占一部446種藥品的16.8％。抗生素品種廣泛用于動(dòng)物養(yǎng)殖和獸醫(yī)臨床，鑒于其生產(chǎn)工藝不同于其他化學(xué)藥品，因此質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也具有特殊性。為了更好地執(zhí)行本版獸藥典，現(xiàn)將有關(guān)情況介紹如下：
一、本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)
1、修訂數(shù)量多，新增品種比例大。收載的75個(gè)品種中，其中1個(gè)為新增品種，占一部新增品種（27個(gè)）的52％，修訂并收載了CVP2000中 64個(gè)抗生素品種中的62個(gè)，未收載CVP2000中的琥珀氯霉素和注射用琥珀氯霉素。
2、高效液相色譜（HPLC）等現(xiàn)代分析技術(shù)應(yīng)用廣泛。75個(gè)抗生素品種中HPLC在鑒別項(xiàng)中47項(xiàng)，檢查項(xiàng)中占39項(xiàng),含量測(cè)定中占37項(xiàng);IR在鑒別項(xiàng)中占28項(xiàng);并增加了分子排阻色譜法對(duì)聚合物的檢查。
3、傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)增加了新的內(nèi)涵。如抗生素微生物檢定法中增加了濁度法。
4、檢查項(xiàng)中動(dòng)物試驗(yàn)項(xiàng)目大幅減少。熱原檢查改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查達(dá)17個(gè)品種，有11個(gè)品種刪減了異常毒性的檢查，10個(gè)品種刪減了降壓物質(zhì)檢查。符合凡例中第二十四條中“隨著獸藥純度的提高，凡是有準(zhǔn)確的化學(xué)和物理方法或細(xì)胞學(xué)方法能取代動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行獸藥質(zhì)量檢定的，盡量采用，以減少動(dòng)物試驗(yàn)”，方便檢驗(yàn)的同時(shí)也體現(xiàn)了動(dòng)物福利。
二、執(zhí)行本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)把握的重點(diǎn)
（一）掌握“凡例”內(nèi)容是執(zhí)行好獸藥典的基礎(chǔ)
“凡例”是解釋和正確使用獸藥典進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)的基本原則，并把正文品種及質(zhì)量檢定有關(guān)共性問(wèn)題加以規(guī)定，避免了重復(fù)說(shuō)明，并且“凡例”中的有關(guān)規(guī)定具有法定約束力。本版獸藥典“凡例”在CVP2000的基礎(chǔ)上進(jìn)行了修訂，增加了各相關(guān)內(nèi)容的分類題目，包括：名稱與編排，項(xiàng)目與要求，檢驗(yàn)方法與限度，標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品，計(jì)量，精確度，試藥、試劑、指示劑，動(dòng)物試驗(yàn)，說(shuō)明書、包裝、標(biāo)簽等共9部分，28條。其中需要重點(diǎn)把握“凡例”中對(duì)鑒別，檢查，原、輔料，檢驗(yàn)方法和限度幾個(gè)方面的表述。
（二）分類學(xué)習(xí)正文品種是執(zhí)行好獸藥典的關(guān)鍵
本版獸藥典共收載青霉素類抗生素18種，四環(huán)素類9種，大環(huán)內(nèi)酯類16種，氨基糖苷類18種，酰胺醇類3種，林可胺類3種，多肽類2種，抗寄生蟲(chóng)類6種。每類品種檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)均有雷同，現(xiàn)分類詳述。
1、青霉素類抗生素
本版藥典收載青霉素類抗生素18種。
（1）鑒別項(xiàng)除普魯卡因青霉素注射液、氨芐西林外全部采用了HPLC法，部分品種刪減了青霉素酶水解法和一些理化鑒別。
（2）在檢查項(xiàng)下，需結(jié)晶性檢查的有2種。有5個(gè)品種需用分子排阻色譜法測(cè)β-內(nèi)酰胺類聚合物。β-內(nèi)酰胺類抗生素藥物中的高分子雜質(zhì)主要分為蛋白（多肽）類雜質(zhì)和聚合物類雜質(zhì)兩大類，前者主要來(lái)源于生產(chǎn)過(guò)程的殘留和污染，后者主要是抗生素在生產(chǎn)、貯存和使用條件下發(fā)生分子間的聚合反應(yīng)產(chǎn)物。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究證明，抗生素所致的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)和其中的高分子雜質(zhì)有關(guān)。
（3）注射用青霉素鈉（鉀）等6個(gè)品種的熱原檢查改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
（4）進(jìn)一步明確了青霉素類藥物的無(wú)菌檢查――經(jīng)青霉素酶滅活后，采用薄膜過(guò)濾法檢驗(yàn)。
（5）含量測(cè)定除普魯卡因青霉素注射液繼續(xù)采用抗生素微生物檢定法測(cè)定外，其余全部采用HPLC法。其中，由電位滴定法改為HPLC法，克服了電位滴定法存在滴定液污染環(huán)境，降解物測(cè)定差異較大，產(chǎn)品技術(shù)摻假等缺點(diǎn)。目前,CP2005、BP、USP29中，青霉素類均采用HPLC法，此法應(yīng)注意2-苯乙胺與青霉素的分離度及理論塔板數(shù)等系統(tǒng)適用性檢查。
2、四環(huán)素類抗生素
四環(huán)素類抗生素共收載9個(gè)品種。
（1）在鑒別項(xiàng)下增加了9項(xiàng)HPLC法、4項(xiàng)IR法。
（2）檢查項(xiàng)下，鹽酸土霉素等2個(gè)品種增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，刪減了熱原檢查；鹽酸四環(huán)素刪減了降壓物質(zhì)、異常毒性檢查。同時(shí)，四環(huán)素類有7個(gè)品種應(yīng)用HPLC進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。
（3）含量測(cè)定由微生物檢定法全部改為HPLC法。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)主要考察理論塔板數(shù)和分離度，流動(dòng)相pH值為8.0左右，要求選用耐高pH值的C18柱，并應(yīng)控制柱溫，用后注意及時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的沖洗。
3、氨基糖苷類抗生素
氨基糖苷類抗生素共收載18個(gè)品種
（1）鑒別項(xiàng)下硫酸慶大霉素、硫酸新霉素等5個(gè)品種增加了IR法鑒別。
（2）檢查項(xiàng)下硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素注射液等8個(gè)品種增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，刪減了熱原、降壓物質(zhì)、異常毒性檢查。硫酸安普霉素刪減了妥布霉素檢查。
（3）含量測(cè)定仍采用抗生素微生物檢定法，但除另有規(guī)定外，檢定可信限率由7％提高到5％。氨基糖苷類抗生素在CP2005、USP29中，部分品種采用了HPLC－ELSD法測(cè)定含量。
4、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素
大環(huán)內(nèi)酯類抗生素共收載16種。
（1）鑒別項(xiàng)下除了硫氰酸紅霉素、硫氰酸紅霉素可溶性粉、乳糖酸紅霉素和注射用乳糖酸紅霉素外，均采用了HPLC法，個(gè)別品種還采用了IR法。
（2）檢查項(xiàng)下吉他霉素、紅霉素等12個(gè)品種增加了HPLC法的組分檢查；吉他霉素及其鹽、制劑的干燥失重改為水分測(cè)定；乳糖酸紅霉素及其制劑刪減了異常毒性和降壓物質(zhì)，增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
（3）含量測(cè)定全部采用抗生素微生物檢定法，與CVP2000和CP2005保持一致。
5、酰胺醇類抗生素
酰胺醇類抗生素共收載3個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)下增加了HPLC法。（試驗(yàn)過(guò)程中HPLC和TLC法可任選一項(xiàng)）
（2）檢驗(yàn)項(xiàng)下增加了HPLC法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。甲砜霉素粉的干燥失重限度由10.0％提高到8.0%。
（3）含量測(cè)定由原來(lái)的電位滴定改為HPLC法。
6、多肽類抗生素
多肽類抗生素共收載2個(gè)品種。
各項(xiàng)檢測(cè)方法均與CVP2000保持一致。
7、林可胺類抗生素
林可胺類抗生素共收載3個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)與CVP2000保持一致，即采用HPLC法。在制劑的鑒別項(xiàng)下增加了氯化物的鑒別反應(yīng)。
（2）檢查項(xiàng)下刪減了異常毒性和降壓物質(zhì)檢查，增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并且3個(gè)品種均要求進(jìn)行林可霉素B的檢查。
（3）含量測(cè)定與CVP2000保持一致，采用HPLC法。
8、抗寄生蟲(chóng)類抗生素
抗寄生蟲(chóng)類抗生素共收載伊維菌素、鹽霉素鈉、馬杜米星銨及其制劑共6個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)下伊維菌素及其制劑刪減了紫外鑒別，增加了IR鑒別，其它與CVP2000保持一致。
（2）檢查項(xiàng)下伊維菌素的伊維菌素B1b改為伊維菌素組分；熾灼殘?jiān)?.5%提高到0.1%，其他與CVP2000保持一致。
（3）含量測(cè)定與CVP2000保持一致。
（三）牢固掌握附錄內(nèi)容是執(zhí)行好獸藥典的保障
本版藥典附錄最大的改進(jìn)在于對(duì)劑型分類及制劑通則的表述更加科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)，有關(guān)內(nèi)容，現(xiàn)就有關(guān)抗生素產(chǎn)品的內(nèi)容再做進(jìn)一步探討。
目前，習(xí)慣把經(jīng)化學(xué)改造的天然來(lái)源抗生素或微生物代謝的其它化合物，以低微濃度能抑制或影響他種生物機(jī)能的化學(xué)物質(zhì)統(tǒng)稱為抗生素。
抗生素藥品的質(zhì)量檢驗(yàn)就是要控制抗生素成品中的雜質(zhì)量及有效成分。
1、雜質(zhì)檢查法
由于抗生素多為微生物發(fā)酵產(chǎn)品，其中間產(chǎn)物或副產(chǎn)物往往會(huì)帶入到產(chǎn)品中，因此進(jìn)行抗生素產(chǎn)品中雜質(zhì)的檢查顯得十分重要。目前采用的雜質(zhì)檢查法（包括有關(guān)物質(zhì)、有關(guān)組分）主要有薄層色譜法、紫外－可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法和分子排阻色譜法。
薄層色譜法 采用薄層色譜法進(jìn)行雜質(zhì)檢查主要是限量檢查，可采用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法和自身對(duì)照法。
紫外分光光度法 主要指在特定波長(zhǎng)處，測(cè)定供試品溶液的吸光度，與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)相比較。
高效液相色譜法 主要采用自身對(duì)照法和面積歸一化法。
分子排阻色譜法 主要用外標(biāo)法進(jìn)行大分子聚合物的測(cè)定。如CVP2005第108頁(yè)青霉素聚合物的測(cè)定。
2、生物檢查法
目前，獸藥檢驗(yàn)過(guò)程中，所用的生物檢查法主要包括熱原檢查、異常毒性檢查、無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、微生物限度檢查等。本版獸藥典收載的品種中，凡是能進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，且規(guī)定了限度的品種，不再進(jìn)行異常毒性和熱原檢查。
熱原檢查、異常毒性檢查 主要是將供試品溶液注入動(dòng)物體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物出現(xiàn)體溫升高或者死亡等現(xiàn)象，來(lái)對(duì)藥物的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。在CVP2005中，熱原檢查項(xiàng)規(guī)定實(shí)驗(yàn)室溫度由CVP2000中的“17～28℃”調(diào)整為“17～25℃”，并在結(jié)果判定中補(bǔ)充“當(dāng)家兔升溫為負(fù)值時(shí)，均以0℃計(jì)”；異常毒性項(xiàng)下補(bǔ)充 “規(guī)定緩慢注射的品種可延長(zhǎng)至30秒”。
無(wú)菌檢查 系用于檢查獸藥典要求無(wú)菌的獸藥制劑、原料、輔料、獸醫(yī)醫(yī)療器具及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。本版藥典與上版藥典相比，對(duì)無(wú)菌檢查進(jìn)行了如下描述：即若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查的檢驗(yàn)場(chǎng)所也進(jìn)行了相應(yīng)的規(guī)定，要求在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。新版藥典對(duì)培養(yǎng)基、稀釋液、沖洗液的制備、貯藏、培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了相應(yīng)規(guī)定，且將所用培養(yǎng)基的名稱進(jìn)行了相應(yīng)的改動(dòng)。增加了方法驗(yàn)證試驗(yàn)，且對(duì)每一類藥物無(wú)菌檢查都做了相應(yīng)規(guī)定，便于檢驗(yàn)者操作。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 本版藥典規(guī)定，利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)的主要是由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素，收載了凝膠法和光度法兩種方法。對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行了更為嚴(yán)格的規(guī)定。
微生物限度檢查 本版藥典對(duì)微生物限度檢查操作環(huán)境和結(jié)果報(bào)告方式進(jìn)行了改動(dòng)，增加了驗(yàn)證方法，對(duì)各類產(chǎn)品的操作進(jìn)行了規(guī)定，但對(duì)具體品種未做強(qiáng)制性檢查。
3、抗生素藥品含量測(cè)定
抗生素是一種生理活性物質(zhì)，含量測(cè)定方法主要分為化學(xué)法、生物學(xué)法、儀器法。結(jié)合本版藥典的內(nèi)容，主要介紹生物學(xué)法和高效液相色譜法。
生物學(xué)法 用生物學(xué)方法測(cè)定抗生素含量的方法，常用的主要有管碟法和濁度法。
管碟法 是使用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固前，將試驗(yàn)菌混進(jìn)去，采用一定的方法，將含有抗生素的物質(zhì)與含菌的培養(yǎng)基表面接觸。目前，國(guó)際上采用將抗生素加入到特定的小鋼管中，使小鋼管中的抗生素與培養(yǎng)基表面接觸，此方法稱為“管碟法”。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，由于抗生素不斷向培養(yǎng)基中擴(kuò)散，凡抑菌濃度能到達(dá)之處，試驗(yàn)菌不能生長(zhǎng)，從而形成透明的抑菌范圍，此范圍一般都呈圓形，稱為“抑菌圈”。由于抗生素藥品的醫(yī)療作用主要是抗菌能力，管碟法是以抗生素對(duì)細(xì)菌或霉菌的抗菌能力作為客觀指標(biāo)來(lái)衡量抗生素的效力，其原理恰好與臨床應(yīng)用的要求一致，能直接反映出抗生素對(duì)微生物（細(xì)菌、霉菌）的殺死或抑菌能力大小。
管碟法主要有二劑量法和三劑量法。本版獸藥典對(duì)各品種項(xiàng)下的可信限率作了更嚴(yán)格的要求。目前與國(guó)外藥典保持一致，即除另有規(guī)定外，可信限率應(yīng)控制在5％以內(nèi)。這就要求從事抗生素檢驗(yàn)的技術(shù)人員水平需進(jìn)一步提高，特別是在鋪菌層、鋼管的同質(zhì)性、雙碟的選擇、小鋼管溶液的滴加等方面要認(rèn)真摸索，規(guī)范操作。
濁度法 是將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及供試品，加到接有試驗(yàn)菌的液體培養(yǎng)基內(nèi)，混勻，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)（通常約為4小時(shí)）。經(jīng)培養(yǎng)后觀察試驗(yàn)菌生長(zhǎng)混濁度，在光電比色計(jì)中測(cè)定透光率，濁度越大透光率就越小。比濁法不以試驗(yàn)菌有無(wú)生長(zhǎng)的區(qū)分為終點(diǎn)，而是將標(biāo)準(zhǔn)品濃度和試驗(yàn)菌生長(zhǎng)所致混濁度求得一定的比例，再由標(biāo)準(zhǔn)品的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)混濁度來(lái)推算供試品的效價(jià)。凡是能制成均勻懸液的微生物均可應(yīng)用。因此，濁度法具有快速、靈敏度高、易操作、無(wú)擴(kuò)散因素影響等優(yōu)點(diǎn)。但這一方法往往因供試品中含有雜質(zhì)，影響細(xì)菌生長(zhǎng)，并且不適用于有色或混濁的供試品。
用濁度法測(cè)定抗生素效價(jià)，國(guó)外藥典大都已采用，CP2005也收載了該方法，且硫酸慶大霉素注射液采用該法進(jìn)行含量測(cè)定。本版獸藥典參照CP2005僅收載了濁度法，但未收載具體品種，望各檢驗(yàn)單位、生產(chǎn)企業(yè)對(duì)此方法做進(jìn)一步的探索。
高效液相色譜法 隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在獸藥檢測(cè)領(lǐng)域中，HPLC法已相當(dāng)普及。目前，常用的HPLC檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。本版獸藥典涉及的品種主要用紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器。CP2005中氨基糖苷類藥物已采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，本版藥典只收載了方法，氨基糖苷類藥物仍采用微生物檢定法進(jìn)行含量測(cè)定。
HPLC法所要求的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)主要包括理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性（校正因子）、拖尾因子。結(jié)合抗生素的特點(diǎn)，日常檢驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)主要考察理論塔板數(shù)和分離度。
HPLC法用于含量測(cè)定主要采用外標(biāo)法進(jìn)行。在日常檢測(cè)過(guò)程中，由于流動(dòng)相多采用緩沖鹽溶液，加之抗生素產(chǎn)品是發(fā)酵產(chǎn)品，會(huì)帶入蛋白質(zhì)等多種異物，對(duì)色譜柱的危害較大，使用時(shí)應(yīng)注意對(duì)液相色譜的柱塞桿、密封圈的保養(yǎng)，對(duì)色譜系統(tǒng)應(yīng)及時(shí)沖洗和保養(yǎng)。采用紫外檢測(cè)器時(shí)還應(yīng)注意考察溶劑及流動(dòng)相在各紫外吸收波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收度大小。
三、本版獸藥典存在的不足
1、雖然收載了比濁法，但由于未進(jìn)行具體品種應(yīng)用的考察，未收載執(zhí)行此方法的具體品種。該法在CP2005中用于測(cè)定慶大霉素的檢測(cè)。目前，BP、USP中均有采用，望各有關(guān)單位積極進(jìn)行具體研究，并結(jié)合現(xiàn)代儀器的應(yīng)用，制定檢驗(yàn)操作規(guī)程。該法是采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行半成品質(zhì)量控制、提高檢驗(yàn)效率、降低勞動(dòng)強(qiáng)度均有實(shí)際意義。
2、本版獸藥典中收載了質(zhì)譜法，目前該法在獸藥殘留檢測(cè)方面已經(jīng)廣泛應(yīng)用，隨著技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜法將更廣泛地運(yùn)用于新藥安全評(píng)價(jià)、老藥再評(píng)價(jià)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)的考察等。
3、抗生素有關(guān)物質(zhì)或者組分檢查中，相對(duì)保留時(shí)間或者出峰的先后順序應(yīng)相對(duì)固定，除規(guī)定色譜條件外，還應(yīng)標(biāo)明色譜柱的品牌、規(guī)格、填料種類等，標(biāo)準(zhǔn)中還應(yīng)附標(biāo)準(zhǔn)色譜圖以示對(duì)照。
4、在細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查法中，各品種項(xiàng)下規(guī)定的限值是參照CP2005而制定的，應(yīng)結(jié)合獸藥臨床使用情況，做進(jìn)一步研究。
5、本版獸藥典中鹽酸土霉素、青霉素類抗生素等基本完全參照CP2005修訂。個(gè)別品種未參照國(guó)外藥典使用的HPLC－ELSD法進(jìn)行含量測(cè)定，以上項(xiàng)目仍需結(jié)合獸藥實(shí)際，做進(jìn)一步的研究。
6、澄明度檢查法應(yīng)參照CP2005,逐步用可見(jiàn)異物檢查法代替，并需做進(jìn)一步考察驗(yàn)證。
7、本版獸藥典未收載緩釋劑、顆粒劑、糊劑、乳房注入劑、陰道用制劑等新劑型品種。各科研單位，特別是各獸藥生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加大這方面的研究。另外，寵物專用劑型、規(guī)格未做充分的考慮。
一、本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)
1、修訂數(shù)量多，新增品種比例大。收載的75個(gè)品種中，其中1個(gè)為新增品種，占一部新增品種（27個(gè)）的52％，修訂并收載了CVP2000中 64個(gè)抗生素品種中的62個(gè)，未收載CVP2000中的琥珀氯霉素和注射用琥珀氯霉素。
2、高效液相色譜（HPLC）等現(xiàn)代分析技術(shù)應(yīng)用廣泛。75個(gè)抗生素品種中HPLC在鑒別項(xiàng)中47項(xiàng)，檢查項(xiàng)中占39項(xiàng),含量測(cè)定中占37項(xiàng);IR在鑒別項(xiàng)中占28項(xiàng);并增加了分子排阻色譜法對(duì)聚合物的檢查。
3、傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)增加了新的內(nèi)涵。如抗生素微生物檢定法中增加了濁度法。
4、檢查項(xiàng)中動(dòng)物試驗(yàn)項(xiàng)目大幅減少。熱原檢查改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查達(dá)17個(gè)品種，有11個(gè)品種刪減了異常毒性的檢查，10個(gè)品種刪減了降壓物質(zhì)檢查。符合凡例中第二十四條中“隨著獸藥純度的提高，凡是有準(zhǔn)確的化學(xué)和物理方法或細(xì)胞學(xué)方法能取代動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行獸藥質(zhì)量檢定的，盡量采用，以減少動(dòng)物試驗(yàn)”，方便檢驗(yàn)的同時(shí)也體現(xiàn)了動(dòng)物福利。
二、執(zhí)行本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)把握的重點(diǎn)
（一）掌握“凡例”內(nèi)容是執(zhí)行好獸藥典的基礎(chǔ)
“凡例”是解釋和正確使用獸藥典進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)的基本原則，并把正文品種及質(zhì)量檢定有關(guān)共性問(wèn)題加以規(guī)定，避免了重復(fù)說(shuō)明，并且“凡例”中的有關(guān)規(guī)定具有法定約束力。本版獸藥典“凡例”在CVP2000的基礎(chǔ)上進(jìn)行了修訂，增加了各相關(guān)內(nèi)容的分類題目，包括：名稱與編排，項(xiàng)目與要求，檢驗(yàn)方法與限度，標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品，計(jì)量，精確度，試藥、試劑、指示劑，動(dòng)物試驗(yàn)，說(shuō)明書、包裝、標(biāo)簽等共9部分，28條。其中需要重點(diǎn)把握“凡例”中對(duì)鑒別，檢查，原、輔料，檢驗(yàn)方法和限度幾個(gè)方面的表述。
（二）分類學(xué)習(xí)正文品種是執(zhí)行好獸藥典的關(guān)鍵
本版獸藥典共收載青霉素類抗生素18種，四環(huán)素類9種，大環(huán)內(nèi)酯類16種，氨基糖苷類18種，酰胺醇類3種，林可胺類3種，多肽類2種，抗寄生蟲(chóng)類6種。每類品種檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)均有雷同，現(xiàn)分類詳述。
1、青霉素類抗生素
本版藥典收載青霉素類抗生素18種。
（1）鑒別項(xiàng)除普魯卡因青霉素注射液、氨芐西林外全部采用了HPLC法，部分品種刪減了青霉素酶水解法和一些理化鑒別。
（2）在檢查項(xiàng)下，需結(jié)晶性檢查的有2種。有5個(gè)品種需用分子排阻色譜法測(cè)β-內(nèi)酰胺類聚合物。β-內(nèi)酰胺類抗生素藥物中的高分子雜質(zhì)主要分為蛋白（多肽）類雜質(zhì)和聚合物類雜質(zhì)兩大類，前者主要來(lái)源于生產(chǎn)過(guò)程的殘留和污染，后者主要是抗生素在生產(chǎn)、貯存和使用條件下發(fā)生分子間的聚合反應(yīng)產(chǎn)物。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究證明，抗生素所致的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)和其中的高分子雜質(zhì)有關(guān)。
（3）注射用青霉素鈉（鉀）等6個(gè)品種的熱原檢查改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
（4）進(jìn)一步明確了青霉素類藥物的無(wú)菌檢查――經(jīng)青霉素酶滅活后，采用薄膜過(guò)濾法檢驗(yàn)。
（5）含量測(cè)定除普魯卡因青霉素注射液繼續(xù)采用抗生素微生物檢定法測(cè)定外，其余全部采用HPLC法。其中，由電位滴定法改為HPLC法，克服了電位滴定法存在滴定液污染環(huán)境，降解物測(cè)定差異較大，產(chǎn)品技術(shù)摻假等缺點(diǎn)。目前,CP2005、BP、USP29中，青霉素類均采用HPLC法，此法應(yīng)注意2-苯乙胺與青霉素的分離度及理論塔板數(shù)等系統(tǒng)適用性檢查。
2、四環(huán)素類抗生素
四環(huán)素類抗生素共收載9個(gè)品種。
（1）在鑒別項(xiàng)下增加了9項(xiàng)HPLC法、4項(xiàng)IR法。
（2）檢查項(xiàng)下，鹽酸土霉素等2個(gè)品種增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，刪減了熱原檢查；鹽酸四環(huán)素刪減了降壓物質(zhì)、異常毒性檢查。同時(shí)，四環(huán)素類有7個(gè)品種應(yīng)用HPLC進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。
（3）含量測(cè)定由微生物檢定法全部改為HPLC法。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)主要考察理論塔板數(shù)和分離度，流動(dòng)相pH值為8.0左右，要求選用耐高pH值的C18柱，并應(yīng)控制柱溫，用后注意及時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的沖洗。
3、氨基糖苷類抗生素
氨基糖苷類抗生素共收載18個(gè)品種
（1）鑒別項(xiàng)下硫酸慶大霉素、硫酸新霉素等5個(gè)品種增加了IR法鑒別。
（2）檢查項(xiàng)下硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素注射液等8個(gè)品種增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，刪減了熱原、降壓物質(zhì)、異常毒性檢查。硫酸安普霉素刪減了妥布霉素檢查。
（3）含量測(cè)定仍采用抗生素微生物檢定法，但除另有規(guī)定外，檢定可信限率由7％提高到5％。氨基糖苷類抗生素在CP2005、USP29中，部分品種采用了HPLC－ELSD法測(cè)定含量。
4、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素
大環(huán)內(nèi)酯類抗生素共收載16種。
（1）鑒別項(xiàng)下除了硫氰酸紅霉素、硫氰酸紅霉素可溶性粉、乳糖酸紅霉素和注射用乳糖酸紅霉素外，均采用了HPLC法，個(gè)別品種還采用了IR法。
（2）檢查項(xiàng)下吉他霉素、紅霉素等12個(gè)品種增加了HPLC法的組分檢查；吉他霉素及其鹽、制劑的干燥失重改為水分測(cè)定；乳糖酸紅霉素及其制劑刪減了異常毒性和降壓物質(zhì)，增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。
（3）含量測(cè)定全部采用抗生素微生物檢定法，與CVP2000和CP2005保持一致。
5、酰胺醇類抗生素
酰胺醇類抗生素共收載3個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)下增加了HPLC法。（試驗(yàn)過(guò)程中HPLC和TLC法可任選一項(xiàng)）
（2）檢驗(yàn)項(xiàng)下增加了HPLC法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。甲砜霉素粉的干燥失重限度由10.0％提高到8.0%。
（3）含量測(cè)定由原來(lái)的電位滴定改為HPLC法。
6、多肽類抗生素
多肽類抗生素共收載2個(gè)品種。
各項(xiàng)檢測(cè)方法均與CVP2000保持一致。
7、林可胺類抗生素
林可胺類抗生素共收載3個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)與CVP2000保持一致，即采用HPLC法。在制劑的鑒別項(xiàng)下增加了氯化物的鑒別反應(yīng)。
（2）檢查項(xiàng)下刪減了異常毒性和降壓物質(zhì)檢查，增加了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并且3個(gè)品種均要求進(jìn)行林可霉素B的檢查。
（3）含量測(cè)定與CVP2000保持一致，采用HPLC法。
8、抗寄生蟲(chóng)類抗生素
抗寄生蟲(chóng)類抗生素共收載伊維菌素、鹽霉素鈉、馬杜米星銨及其制劑共6個(gè)品種。
（1）鑒別項(xiàng)下伊維菌素及其制劑刪減了紫外鑒別，增加了IR鑒別，其它與CVP2000保持一致。
（2）檢查項(xiàng)下伊維菌素的伊維菌素B1b改為伊維菌素組分；熾灼殘?jiān)?.5%提高到0.1%，其他與CVP2000保持一致。
（3）含量測(cè)定與CVP2000保持一致。
（三）牢固掌握附錄內(nèi)容是執(zhí)行好獸藥典的保障
本版藥典附錄最大的改進(jìn)在于對(duì)劑型分類及制劑通則的表述更加科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)，有關(guān)內(nèi)容，現(xiàn)就有關(guān)抗生素產(chǎn)品的內(nèi)容再做進(jìn)一步探討。
目前，習(xí)慣把經(jīng)化學(xué)改造的天然來(lái)源抗生素或微生物代謝的其它化合物，以低微濃度能抑制或影響他種生物機(jī)能的化學(xué)物質(zhì)統(tǒng)稱為抗生素。
抗生素藥品的質(zhì)量檢驗(yàn)就是要控制抗生素成品中的雜質(zhì)量及有效成分。
1、雜質(zhì)檢查法
由于抗生素多為微生物發(fā)酵產(chǎn)品，其中間產(chǎn)物或副產(chǎn)物往往會(huì)帶入到產(chǎn)品中，因此進(jìn)行抗生素產(chǎn)品中雜質(zhì)的檢查顯得十分重要。目前采用的雜質(zhì)檢查法（包括有關(guān)物質(zhì)、有關(guān)組分）主要有薄層色譜法、紫外－可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法和分子排阻色譜法。
薄層色譜法 采用薄層色譜法進(jìn)行雜質(zhì)檢查主要是限量檢查，可采用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法和自身對(duì)照法。
紫外分光光度法 主要指在特定波長(zhǎng)處，測(cè)定供試品溶液的吸光度，與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)相比較。
高效液相色譜法 主要采用自身對(duì)照法和面積歸一化法。
分子排阻色譜法 主要用外標(biāo)法進(jìn)行大分子聚合物的測(cè)定。如CVP2005第108頁(yè)青霉素聚合物的測(cè)定。
2、生物檢查法
目前，獸藥檢驗(yàn)過(guò)程中，所用的生物檢查法主要包括熱原檢查、異常毒性檢查、無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、微生物限度檢查等。本版獸藥典收載的品種中，凡是能進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，且規(guī)定了限度的品種，不再進(jìn)行異常毒性和熱原檢查。
熱原檢查、異常毒性檢查 主要是將供試品溶液注入動(dòng)物體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物出現(xiàn)體溫升高或者死亡等現(xiàn)象，來(lái)對(duì)藥物的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。在CVP2005中，熱原檢查項(xiàng)規(guī)定實(shí)驗(yàn)室溫度由CVP2000中的“17～28℃”調(diào)整為“17～25℃”，并在結(jié)果判定中補(bǔ)充“當(dāng)家兔升溫為負(fù)值時(shí)，均以0℃計(jì)”；異常毒性項(xiàng)下補(bǔ)充 “規(guī)定緩慢注射的品種可延長(zhǎng)至30秒”。
無(wú)菌檢查 系用于檢查獸藥典要求無(wú)菌的獸藥制劑、原料、輔料、獸醫(yī)醫(yī)療器具及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。本版藥典與上版藥典相比，對(duì)無(wú)菌檢查進(jìn)行了如下描述：即若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查的檢驗(yàn)場(chǎng)所也進(jìn)行了相應(yīng)的規(guī)定，要求在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。新版藥典對(duì)培養(yǎng)基、稀釋液、沖洗液的制備、貯藏、培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了相應(yīng)規(guī)定，且將所用培養(yǎng)基的名稱進(jìn)行了相應(yīng)的改動(dòng)。增加了方法驗(yàn)證試驗(yàn)，且對(duì)每一類藥物無(wú)菌檢查都做了相應(yīng)規(guī)定，便于檢驗(yàn)者操作。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 本版藥典規(guī)定，利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)的主要是由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素，收載了凝膠法和光度法兩種方法。對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行了更為嚴(yán)格的規(guī)定。
微生物限度檢查 本版藥典對(duì)微生物限度檢查操作環(huán)境和結(jié)果報(bào)告方式進(jìn)行了改動(dòng)，增加了驗(yàn)證方法，對(duì)各類產(chǎn)品的操作進(jìn)行了規(guī)定，但對(duì)具體品種未做強(qiáng)制性檢查。
3、抗生素藥品含量測(cè)定
抗生素是一種生理活性物質(zhì)，含量測(cè)定方法主要分為化學(xué)法、生物學(xué)法、儀器法。結(jié)合本版藥典的內(nèi)容，主要介紹生物學(xué)法和高效液相色譜法。
生物學(xué)法 用生物學(xué)方法測(cè)定抗生素含量的方法，常用的主要有管碟法和濁度法。
管碟法 是使用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固前，將試驗(yàn)菌混進(jìn)去，采用一定的方法，將含有抗生素的物質(zhì)與含菌的培養(yǎng)基表面接觸。目前，國(guó)際上采用將抗生素加入到特定的小鋼管中，使小鋼管中的抗生素與培養(yǎng)基表面接觸，此方法稱為“管碟法”。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，由于抗生素不斷向培養(yǎng)基中擴(kuò)散，凡抑菌濃度能到達(dá)之處，試驗(yàn)菌不能生長(zhǎng)，從而形成透明的抑菌范圍，此范圍一般都呈圓形，稱為“抑菌圈”。由于抗生素藥品的醫(yī)療作用主要是抗菌能力，管碟法是以抗生素對(duì)細(xì)菌或霉菌的抗菌能力作為客觀指標(biāo)來(lái)衡量抗生素的效力，其原理恰好與臨床應(yīng)用的要求一致，能直接反映出抗生素對(duì)微生物（細(xì)菌、霉菌）的殺死或抑菌能力大小。
管碟法主要有二劑量法和三劑量法。本版獸藥典對(duì)各品種項(xiàng)下的可信限率作了更嚴(yán)格的要求。目前與國(guó)外藥典保持一致，即除另有規(guī)定外，可信限率應(yīng)控制在5％以內(nèi)。這就要求從事抗生素檢驗(yàn)的技術(shù)人員水平需進(jìn)一步提高，特別是在鋪菌層、鋼管的同質(zhì)性、雙碟的選擇、小鋼管溶液的滴加等方面要認(rèn)真摸索，規(guī)范操作。
濁度法 是將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及供試品，加到接有試驗(yàn)菌的液體培養(yǎng)基內(nèi)，混勻，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)（通常約為4小時(shí)）。經(jīng)培養(yǎng)后觀察試驗(yàn)菌生長(zhǎng)混濁度，在光電比色計(jì)中測(cè)定透光率，濁度越大透光率就越小。比濁法不以試驗(yàn)菌有無(wú)生長(zhǎng)的區(qū)分為終點(diǎn)，而是將標(biāo)準(zhǔn)品濃度和試驗(yàn)菌生長(zhǎng)所致混濁度求得一定的比例，再由標(biāo)準(zhǔn)品的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)混濁度來(lái)推算供試品的效價(jià)。凡是能制成均勻懸液的微生物均可應(yīng)用。因此，濁度法具有快速、靈敏度高、易操作、無(wú)擴(kuò)散因素影響等優(yōu)點(diǎn)。但這一方法往往因供試品中含有雜質(zhì)，影響細(xì)菌生長(zhǎng)，并且不適用于有色或混濁的供試品。
用濁度法測(cè)定抗生素效價(jià)，國(guó)外藥典大都已采用，CP2005也收載了該方法，且硫酸慶大霉素注射液采用該法進(jìn)行含量測(cè)定。本版獸藥典參照CP2005僅收載了濁度法，但未收載具體品種，望各檢驗(yàn)單位、生產(chǎn)企業(yè)對(duì)此方法做進(jìn)一步的探索。
高效液相色譜法 隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在獸藥檢測(cè)領(lǐng)域中，HPLC法已相當(dāng)普及。目前，常用的HPLC檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。本版獸藥典涉及的品種主要用紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器。CP2005中氨基糖苷類藥物已采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，本版藥典只收載了方法，氨基糖苷類藥物仍采用微生物檢定法進(jìn)行含量測(cè)定。
HPLC法所要求的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)主要包括理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性（校正因子）、拖尾因子。結(jié)合抗生素的特點(diǎn)，日常檢驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)主要考察理論塔板數(shù)和分離度。
HPLC法用于含量測(cè)定主要采用外標(biāo)法進(jìn)行。在日常檢測(cè)過(guò)程中，由于流動(dòng)相多采用緩沖鹽溶液，加之抗生素產(chǎn)品是發(fā)酵產(chǎn)品，會(huì)帶入蛋白質(zhì)等多種異物，對(duì)色譜柱的危害較大，使用時(shí)應(yīng)注意對(duì)液相色譜的柱塞桿、密封圈的保養(yǎng)，對(duì)色譜系統(tǒng)應(yīng)及時(shí)沖洗和保養(yǎng)。采用紫外檢測(cè)器時(shí)還應(yīng)注意考察溶劑及流動(dòng)相在各紫外吸收波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收度大小。
三、本版獸藥典存在的不足
1、雖然收載了比濁法，但由于未進(jìn)行具體品種應(yīng)用的考察，未收載執(zhí)行此方法的具體品種。該法在CP2005中用于測(cè)定慶大霉素的檢測(cè)。目前，BP、USP中均有采用，望各有關(guān)單位積極進(jìn)行具體研究，并結(jié)合現(xiàn)代儀器的應(yīng)用，制定檢驗(yàn)操作規(guī)程。該法是采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行半成品質(zhì)量控制、提高檢驗(yàn)效率、降低勞動(dòng)強(qiáng)度均有實(shí)際意義。
2、本版獸藥典中收載了質(zhì)譜法，目前該法在獸藥殘留檢測(cè)方面已經(jīng)廣泛應(yīng)用，隨著技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜法將更廣泛地運(yùn)用于新藥安全評(píng)價(jià)、老藥再評(píng)價(jià)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)的考察等。
3、抗生素有關(guān)物質(zhì)或者組分檢查中，相對(duì)保留時(shí)間或者出峰的先后順序應(yīng)相對(duì)固定，除規(guī)定色譜條件外，還應(yīng)標(biāo)明色譜柱的品牌、規(guī)格、填料種類等，標(biāo)準(zhǔn)中還應(yīng)附標(biāo)準(zhǔn)色譜圖以示對(duì)照。
4、在細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查法中，各品種項(xiàng)下規(guī)定的限值是參照CP2005而制定的，應(yīng)結(jié)合獸藥臨床使用情況，做進(jìn)一步研究。
5、本版獸藥典中鹽酸土霉素、青霉素類抗生素等基本完全參照CP2005修訂。個(gè)別品種未參照國(guó)外藥典使用的HPLC－ELSD法進(jìn)行含量測(cè)定，以上項(xiàng)目仍需結(jié)合獸藥實(shí)際，做進(jìn)一步的研究。
6、澄明度檢查法應(yīng)參照CP2005,逐步用可見(jiàn)異物檢查法代替，并需做進(jìn)一步考察驗(yàn)證。
7、本版獸藥典未收載緩釋劑、顆粒劑、糊劑、乳房注入劑、陰道用制劑等新劑型品種。各科研單位，特別是各獸藥生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加大這方面的研究。另外，寵物專用劑型、規(guī)格未做充分的考慮。
